不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较

以牛乳清乳铁蛋白（bovine whey lactoferrin,LFW）、牛初乳乳铁蛋白（bovine colostrum lactoferrin, LFC）、人乳铁蛋白（human lactoferrin,LFH）、牛乳铁蛋白素（bovine lactoferricin,LfcinB）和人乳铁蛋白 素（human lactoferricin,LfcinH）为研究对象,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响并比较不同来源乳铁蛋白 （lactoferrin,LF）及乳铁蛋白素（lactoferricin,Lfcin）作用效果的差异性。采用CCK-8法检测不同来源的LF与 Lfcin作用小鼠脾淋巴细胞24、48、72 h后,及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响。结果显 示：LF与Lfcin均在48 h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好,且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升 高而加强;LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞 的增殖。结果表明：两种牛乳铁蛋白（bovine lactoferrin,LFB）及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提 高婴幼儿免疫能力,LFB推荐添加质量浓度为0.50～2.00 mg/mL,Lfcin推荐添加质量浓度为75～125 μg/mL。     

不同来源Lfcin诱导Jurkat细胞凋亡的对比研究

本文以牛乳铁蛋白素LfcinB和人乳铁蛋白素LfcinH为研究对象,研究其通过降低线粒体膜电位抑制Jurkat细胞增殖效果及两者的差异性。采用MTT法检测LfcinB和LfcinH对Jurkat细胞增殖影响;Hoechst33258染色法荧光显微镜观察Jurkat细胞核的变化;运用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术将LfcinB和LfcinH促进Jurkat细胞凋亡的阶段进行区分;JC-1染色激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变。结果显示:LfcinH和LfcinB对Jurkat细胞有显著的抑制作用(P0.05),呈剂量依赖性;经LfcinB和LfcinH处理后的Jurkat细胞在荧光显微镜下均可见细胞核皱缩、碎裂呈凋亡特征;激光共聚焦显微镜观察到Jurkat细胞线粒体膜电位下降;流式细胞术检测发现Jurkat细胞经LfcinB和LfcinH处理48 h时主要发生早期凋亡。研究结果表明:Jurkat细胞凋亡的机制可能是通过影响线粒体膜电位导致Jurkat细胞凋亡并抑制细胞增殖;当两者浓度小于250μg/mL时LfcinH对Jurkat细胞抑制效果较强,浓度大于250μg/mL时两者对Jurkat细胞抑制效果相近。     

副干酪乳杆菌VL8胞外多糖协同ConA对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

本研究以前期从viili中分离得到的一株副干酪乳杆菌VL8为基础,对其胞外多糖（VL8-EPS）的免疫活性进行了初步探究。首先分离制备小鼠脾淋巴细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度的VL8-EPS对小鼠脾淋巴细胞增殖及在其与有丝分裂原共同作用下对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测细胞因子白介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）的含量。结果表明,VL8-EPS在浓度12.5⁸00μg/m L范围内,能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖;VL8-EPS协同刀豆蛋白（Con A）也显著地增强了脾淋巴细胞的增殖作用,且诱导效果高于单独施用VL8-EPS;并能显著促进协同Con A诱导的细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6的分泌水平。综上,VL8-EPS显著地促进了脾淋巴细胞的增殖,并对Con A诱导的脾淋巴细胞的增殖有协同促进作用,还通过促进细胞因子的分泌发挥了免疫增强作用,说明VL8-EPS在一定程度上对免疫机制进行了调控。      

瑞士乳杆菌发酵乳中多肽的分离对小鼠体外淋巴细胞增殖的影响

目的:分离瑞士乳杆菌发酵乳中多肽片段,并对分离片段的的免疫调节作用进行研究。方法:利用瑞士乳杆菌LH0906发酵牛乳获得多肽样品,采用离心、超滤的方法对所得多肽进行粗提,利用凝胶层析色谱和反相层析色谱进一步分离发酵乳中的多肽,使用Folin-Lowry法测定发酵后样品中多肽含量,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测发酵乳中的多肽对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响。结果:牛乳发酵液其对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效果显著高于未发酵牛乳,并经过凝胶层析色谱和反相层析色谱分离发酵乳得到的峰S12-A对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖效果十分显著(P<0.01),峰S12-C对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖效果显著(P<0.05)。结论:牛乳经瑞士乳杆菌LH0906发酵后,分离得到的多肽片段对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖具有显著的增强作用。     

黑灵芝多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的：研究黑灵芝多糖(PSG-1)对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测PSG-1 在不同质量浓度、不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,检测不同质量浓度PSG-1 单独作用及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B 淋巴细胞增殖作用的影响;用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果：PSG-1 在20～160μg/mL 质量浓度范围能显著促进脾细胞的增殖,且48h 效果最佳;PSG-1 能显著增强刀豆蛋白A (Con A)诱导的T 淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B 淋巴细胞的增殖作用;并且能显著诱导脾淋巴细胞分泌IL-2 和TNF- α。结论：PSG-1 能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A、LPS 对T、B 淋巴细胞的增殖有协同刺激作用,还可以通过IL-2 和TNF-α发挥免疫增强作用。     

饲喂酸奶不同时间对小鼠巨噬细胞和脾T淋巴细胞功能的影响

分别给Balb／c小鼠饲喂含质量分数为20％用保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌发酵的酸奶冻干粉的饲料2，5，8d后处死．取其腹膜巨噬细胞和脾淋巴细胞进行测定，结果发现酸奶饲料处理增加了脾淋巴细胞和巨噬细胞的增殖活性，并提高了脾T淋巴细胞当中CD4 ／CD8 比例。对巨噬细胞活性的促进在第2d组中最为显著，而对淋巴细胞增殖活性的作用在第5d组达到高峰并持续到第8d组。对细胞因子进行分析发现，2d组处理者脾淋巴细胞的IL-2产生量和巨噬细胞的TNF-α产生量都较对照组显著升高；IL-2产生量的上升在8d处理后消失，而TNF-α产生量在5d处理组即已恢复到对照组水平。     

鹿茸水提取物及其蛋白酶解物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

研究了鹿茸水提取物中非蛋白成分、粗蛋白酶解物及分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.非蛋白成分和酶解物的分离分别采用HPLC法和超滤法.应用WST-8法检测各分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用高分辨质谱对非蛋白成分进行初步鉴定.结果显示,非蛋白成分对未经刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾细胞增殖的促进作用优于其分离...     

壳寡糖及其磷酸化修饰产物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的:研究壳寡糖及其磷酸化修饰产物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测壳寡糖及其磷酸化修饰产物在不同质量浓度条件下对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果:壳寡糖及其修饰产物对小鼠脾细胞均具有明显的细胞增殖作用,并存在一定的剂量依赖关系,2种实验药物均能提高IFN-γ水平;IL-2测定结果显示,壳寡糖具有明显提高脾细胞分泌IL-2的作用。结论:壳寡糖及其修饰产物具有明显的免疫增强作用,该作用与诱导小鼠脾细胞增殖、提高脾细胞中IFN-γ、IL-2的水平有关。     

白藜芦醇对小鼠脾淋巴细胞免疫调节活性的影响

研究了白藜芦醇（Res）对小鼠脾淋巴细胞免疫调节活性的影响。无菌分离小鼠脾,制备淋巴细胞,并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刀豆蛋白A（Con A）、脂多糖（LPS）以及5、10、20、40μg/m L不同浓度的Res,经过不同时间培养后,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测淋巴细胞分泌IL-4和IL-12的水平,流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期和细胞膜表面标志。结果表明:Res能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,能与Con A协同促进小鼠脾淋巴细胞增殖,不能与LPS协同促进小鼠脾淋巴细胞增殖;能增强IL-4和IL-12的分泌;能提高小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+的比值;能提高脾淋巴细胞周期中细胞进入S期细胞的百分率。综上,Res能增强小鼠脾淋巴细胞的免疫调节活性。      

牛乳铁素对几种免疫细胞因子的影响

通过对灌胃牛乳铁素(LfcinB)后小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10 和TNF-α水平的变化,评价其免疫调节作用。结果表明,灌胃牛乳铁素后3h 采血,分离其血清,用ELISA 试剂盒检测细胞因子,与阴性对照组相比,对细胞因子IL-2 和TNF- α产生极显著促进作用(P ≤ 0.01),对抗炎细胞因子IL-4 有极显著的抑制作用(P ≤ 0.01),对IL-6 有显著的抑制作用(P ≤ 0.05),对抗炎细胞因子IL-10 的分泌影响也极显著(P ≤ 0.01),并且IL-10 随TNF-α的增强而增强,起到平衡作用。因此,口服牛乳铁素对实验小鼠具有免疫增强和调节作用。     

山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用

为研究山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用,将小鼠分为空白组、左旋咪唑组和不同浓度山楂黄酮处理组(100、200、400和800 μg/mL)。利用MTT法检测山楂黄酮对淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测山楂黄酮对淋巴细胞白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的影响,流式细胞术检测山楂黄酮对淋巴细胞膜表面标志物(CD4⁺和CD8⁺)的影响。结果表明,山楂黄酮在100~400 μg/mL对淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子的分泌具有浓度依赖性,IL-6和IFN-γ的分泌极显著高于空白组(P<0.01),IL-4的分泌极显著低于空白组(P<0.01),且400 μg/mL处理组与左旋咪唑组无统计学意义(P>0.05);对淋巴细胞亚群CD4⁺CD8^-、CD4^-CD8⁺具有浓度依赖性的促进作用,且极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01);对淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺百分比极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01),200 μg/mL浓度组CD4⁺/CD8⁺的比值极显著高于其它浓度组(P<0.01)。100~400 μg/mL山楂黄酮通过诱导淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子IL-6、IL-4和IFN-γ的分泌,提高淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值,从而发挥免疫调节作用。     

蓝莓花色苷对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用

为探讨蓝莓花色苷对淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。无菌分离淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和腹腔巨噬细胞悬液,以终浓度为4、8、16、32、64 mg/mL的蓝莓花色苷作用于体外培养的淋巴细胞(48 h)和腹腔巨噬细胞(24 h),采用MTT法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞增殖率及中性红吞噬实验检测腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,ELISA法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞(IL-6白细胞介素-6)、(TNF-α肿瘤坏死因子-α)和腹腔巨噬细胞(IL-4白细胞介素-4)、(IL-12白细胞介素-12)分泌的影响。结果显示,蓝莓花色苷各浓度组淋巴细胞增殖率、腹腔巨噬细胞的吞噬活性、培养上清中淋巴细胞IL-6、TNF-α及腹腔巨噬细胞IL-12的分泌高于空白组(p<0.05),各浓度组与阳性组腹腔巨噬细胞IL-4分泌量均低于空白对照组(p<0.05)。蓝莓花色苷可能通过促进淋巴细胞增殖和提高腹腔巨噬细胞吞噬及分泌功能,提高机体免疫功能。     

乳杆菌对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

目的：体外评估7 种乳杆菌的免疫作用,探讨小鼠离体脾脏淋巴细胞在筛选免疫活性乳酸菌中应用的可行性。方法：用MTT 法观察不同种属、不同剂量的活性和热致死乳杆菌对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响。结果：活性和热致死乳杆菌单独作用都能促进体外淋巴细胞增殖且均表现出剂量依赖关系,当活性和热致死乳杆菌剂量为107CFU/mL 时(即细菌与细胞的比例为10:1)的效果最为明显(P＜ 0.05),且活菌制剂的免疫调节作用优于热致死菌体 (P ＜ 0.05),其中活性罗伊氏乳杆菌、约氏乳杆菌和发酵乳杆菌刺激淋巴细胞的增殖指数(PI 值)明显较ConA诱导组高(P ＜ 0.05)。结论：正常离体小鼠脾脏淋巴细胞可用于体外初步筛选具有潜在免疫活性的乳杆菌,从而缩小用于动物实验的目标菌株的范围。     

菠萝蜜多糖对脾淋巴细胞抗氧化作用及免疫功能的影响

本研究旨在探明菠萝蜜多糖(polysaccharide from jackfruit pulp,JFP-Ps)对正常小鼠脾淋巴细胞增殖和免疫调节的影响。通过体外小鼠脾淋巴细胞的培养实验,测定不同质量浓度JFP-Ps对正常小鼠脾淋巴细胞增殖、抗氧化能力(总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力和丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)含量)及细胞因子(肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β))分泌水平的影响。结果显示,JFP-Ps可促进小鼠脾淋巴细胞增殖,质量浓度为80μg/mL和160μg/mL时效果显著(P0.05);当JFP-Ps质量浓度为40μg/mL甚至更高时,T-AOC及GSH-Px、SOD和CAT活力显著升高(P0.05),但MDA含量显著降低(P0.05);JFP-Ps在质量浓度40~160μg/mL范围内可显著促进脾淋巴细胞TNF-α、IFN-γ和IL-1β的分泌(P0.05)。结果表明JFP-Ps的免疫增强活性可能与其促进小鼠脾淋巴细胞增殖、提高抗氧化活性及诱导细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-1β分泌水平有关。     

D-氨基葡糖盐酸盐对小鼠淋巴细胞增生及IL-2产生的作用

目的研究D-氨基葡糖盐酸盐(GAH)对小鼠淋巴细胞增生及IL-2产生的作用。方法用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增生,碘化丙锭(PI)检测淋巴细胞周期,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定细胞内IL-2的含量。结果在200～50μg/mL浓度范围内,GAH能促进小鼠淋巴细胞增生,并可诱导淋巴细胞分泌IL-2。结论GAH能有效的促进淋巴细胞增生,促进分泌IL-2,具有免疫作用。     

N-乙酰-D-氨基葡糖体外对小鼠淋巴细胞增殖和细胞内钙调蛋白和钙调神经磷酸酶表达的影响

目的 研究N-乙酰-D-氨基葡糖（N-AcGA）对小鼠淋巴细胞的增殖作用及对细胞内钙调蛋白（CaM）和钙调神经磷酸酶（CaN）表达的影响。方法 以小鼠淋巴细胞为实验材料,通过MTT法及流式细胞仪研究N-AcGA对小鼠淋巴细胞增殖和对淋巴细胞内CaM与CaN表达的影响。结果 N-AcGA在200～50 mg/L浓度范围内对小鼠淋巴细胞增殖有显著的促进作用,浓度为200 mg/L时作用极为显著。N-AcGA可增加小鼠淋巴细胞内CaM和CaN的表达。加入N-AcGA 72h后CaM的平均阳性细胞百分率由61.6%上升到72.6%,CaN的平均阳性细胞百分率由75.6%上升到86.0%。结论 N-AcGA能够诱导小鼠淋巴细胞增殖,并促进细胞内CaM与CaN的表达。     

大枣多糖对小鼠淋巴细胞免疫调节作用的研究

研究大枣多糖对小鼠淋巴细胞的免疫调节作用。将小鼠淋巴细胞无菌分离,制备细胞悬液,设计空白组、阳性对照组（左旋咪唑）以及不同质量浓度的大枣多糖组（终浓度为20、40、80、160和320 μg/mL）。按照MTT法观察大枣多糖对小鼠淋巴细胞增殖的影响情况;采用ELISA法观察大枣多糖对小鼠淋巴细胞上清液中IL-2、IL-6、IL-10、IL-12水平的影响;QRT-PCR检测大枣多糖对小鼠淋巴细胞IL-2、IL-6、IL-10、IL-12信使核糖核酸（mRNA）表达的影响。在20~320 μg/mL浓度范围内,大枣多糖能促进小鼠淋巴细胞增殖,同时提高细胞因子的分泌量,进而促进细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12 mRNA表达。在20~320 μg/mL浓度范围内,大枣多糖通过诱导淋巴细胞增殖、淋巴细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12分泌以及mRNA表达,从而提高机体免疫功能。     

银杏多糖对小鼠淋巴细胞免疫调节作用的研究

为研究银杏多糖对小鼠淋巴细胞的免疫调节作用,无菌分离小鼠脾淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液,实验设空白组、阳性组(终浓度为5 pg/mL的左旋咪唑)、银杏多糖处理组(终浓度为25、50、100、200、400 μg/mL).采用MTT法检测银杏多糖对淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术检测银杏多糖对淋巴细胞周期的影响,ELISA法...