中温α-淀粉酶高产菌株的选育及其粗酶性质

以从自然界中筛选的野生芽孢杆菌XLG-1为出发菌株,通过紫外线诱变及紫外线-氯化锂复合诱变筛选出高产中温α-淀粉酶的优异菌株XLG-51,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。初步研究了其所产的α-淀粉酶的酶学性质:通过SDS-starch-PAGE电泳与酶谱分析得该酶分子质量为60 ku左右,最适作用温度为60℃,最适作用pH范围为5.0～6.5,且在最适条件下具有较强的稳定性。以该菌株为生产菌进行5 L罐发酵实验,产酶达5298 U/mL。     

浓香型大曲中蛋白酶产生细菌的分离鉴定

从浓香型大曲中分离纯化得到5株产蛋白酶细菌,对其进行了生化分析,结合《伯杰细菌鉴定手册》对这5株细菌的鉴定。鉴定结果为：A苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）;B枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）;C蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）;D多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）;E枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对产酶能力最强的C菌株用Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,鉴定结果与生化鉴定结果相符合。     

一株产耐热耐碱木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质研究

目的对分离得到的一株产耐热耐碱木聚糖酶细菌ZH-07进行鉴定,并对其产木聚糖酶进行酶学性质分析。方法根据培养基上透明圈大小筛选产酶量高的菌株,通过菌落形态、生理生化特征及16S rDNA序列同源性比对等分析鉴定菌株种属。并通过一系列单因素试验、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和薄层色谱(TLC)进行酶学性质研究。结果 ZH-07菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌能以农业废弃物玉米芯为碳源,液体发酵产耐热耐碱木聚糖酶,50℃培养36 h,木聚糖酶的最高酶活性达1664.9 U/m L;木聚糖酶的相对分子质量(Mr)约24×10~3,无纤维素酶活性;酶促反应最适温度为70℃,最适pH 10,70℃、pH 10处理3 h仍保持64.7%的活性。结论 Bacillus subtilis ZH-07产木聚糖酶有较好的热稳定性和碱稳定性,在低聚木糖工业生产中有巨大应用潜力。     

传统发酵黄豆酱中低营养菌株的筛选及产胞外酶特性分析

为了更好地研究北方地区传统黄豆酱中低营养菌株的分布及其功能特性,对采集于不同地区的黄豆酱样品进行低营养菌株的筛选、分离及纯化,并研究其产胞外酶特性。结果共分离出114 株低营养菌株,其中69 株产纤维素酶,81 株产淀粉酶,112 株产脂肪酶,72 株产β-葡萄糖苷酶,59 株产蛋白酶。通过16S rRNA基因序列分析对产酶活性高的代表菌株进行鉴定,鉴定出5 种类别菌株,分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeu）、阿萨尔基亚芽孢杆菌（Bacillus axarquiensis）。所筛选的产酶活性高的低营养菌株短小芽孢杆菌HS1-4和枯草芽孢杆菌HS5-13耐盐性高,对环境的抗耐性强,具有广阔的应用前景。     

枯草杆菌在淀粉液态培养基中生产α-淀粉酶的研究

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为出发菌株。以淀粉为主要原料,采用液态培养基发酵。生产α-淀粉酶。经实验表明：在23℃至44℃内,产酶最适培养温度为37℃;枯草杆菌在淀粉液态培养基中37℃条件下。经过振荡培养,其产酶最适淀粉水组成为淀粉：水=75：100;在最适温度37℃下,淀粉：水=75：100时,最适培养时间为36h。     

耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的筛选及酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到1株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9.其发酵条件及酶学特性为:发酵 72h,在pH6.0、70℃条件下,酶活性为82.64u/mL.分子生物学及其生理生化鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).W-9产β-葡聚糖酶的酶学性质结果显示,其产β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,在70℃条件下保温时,酶活基本稳定.     

蔗糖酶产生菌的分离鉴定及酶学性质的研究

以蔗糖为唯一碳源筛选培养基,从高糖土壤筛选出1株分离出一株产蔗糖酶活力较高的细菌菌株,编号为L23。根据生理生化特性和16S rDNA序列,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。对该菌所产蔗糖酶的性质研究结果表明:酶的最适pH为3.6,最适反应温度为40℃,在30~40℃范围内稳定。     

枯草芽孢杆菌BJ3-2赖氨酸脱羧酶基因yaaO的克隆与序列分析

根据GenBank中的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 168菌株假定的赖氨酸脱羧酶基因（LDC）序列设计同源引物,提取枯草芽孢杆菌BJ3-2基因组DNA进行PCR扩增,并克隆至pGEM-T载体后测序.序列分析结果表明：Bacillus subtilis BJ3-2 yaaO基因开放阅读框（ORE）长为1 443bp,获得基因登录号为KJ561349,BLAST比对与已报道枯草芽孢杆菌的yaaO基因核苷酸序列及氨基酸序列同源性均高达90％以上,对赖氨酸脱羧酶氨基酸序列构建系统进化树分析,发现Bacillus subtilis BJ3-2的LDC与B.subtilis JS亲缘关系最近,SWISS-MODEL预测该蛋白的3D结构与鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶蛋白相似性为39.22％,属于典型的Ⅲ型磷酸吡哆醛（PLP）依赖型鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶家族成员.yaaO基因序列分析及氨基酸保守结构域的分析,为有效控制水豆豉产品中尸胺含量过高的研究提供了理论基础.     

产碱性蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及其酶学性质的初步研究

从盐碱地土壤中筛选到5株产碱性蛋白酶的细菌,分别命名为TCCC11001、TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024、TCCC11029.将其革兰氏染色、16S rRNA鉴定为Bacillus subtilis、Bacillus alcalophilus、Bacillus pumilus、Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis.将菌株接入发酵培养基中,37℃、180r/min摇床培养48h,发酵液进行不同处理后Fohn法测定酶活.结果发现:TCCC11001、TCCC11029的最适作用温度为40℃,TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024的最适作用温度为50℃;TCCC11001、TCCC11004、TCCC11013、TCCC11024、TCCC11029的最适作用pH值分别为10.0、11.0、10.0、9.0、11.0;TCCC11004、TCCC11013于40℃保温2h,残留酶活为最高酶活70%;TCCC11001、TCCC11024、TCCC11029的残留酶活＜50%.DFP、PMSF完全抑制酶的活性,表明5种蛋白酶是典型的丝氨酸蛋白酶.     

枯草芽孢杆菌胺氧化酶基因的克隆与表达

以细菌型豆豉工业发酵菌种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BJ3-2为材料,根据NCBI中菌株B. subtilis 168的胺氧化酶（AMO）基因序列设计同源引物,克隆获得菌株B. subtilis BJ3-2的胺氧化酶基因YobN序列。测序结果显示,YobN基因开放阅读框（ORF）长为1 437 bp,编码478个氨基酸,分子质量为53.79 ku,与菌株B. subtilis 168同源性达98%。目的基因克隆至原核表达载体,获得重组菌pET28a-YobN/BL21,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示,浓度为1.0 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）22 ℃诱导5 h,表达量最高达1.30 mg/mL。该研究为AMO活性的研究奠定了基础,对豆类发酵食品中生物胺的控制具有重要意义。