四种酵母基因组提取方法的比较

为获得简便高效的提取酵母基因组DNA的方法,分别采用溶菌酶法、蜗牛酶过夜处理法、蜗牛酶反复冻融法和珠磨法处理酵母细胞,在荧光倒置显微镜下观察、比较细胞的破壁情况,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测基因组DNA的质量。结果表明,除溶菌酶法外,其他3种方法均能提取出高质量的酵母基因组DNA。珠磨法提取酵母基因组具有质量高、成本低、时间短且操作简单的优点。     

全新酵母基因组图谱出炉

来自美国斯坦福大学医学院遗传学系、斯坦福基因组技术研究中心（Stanford Genome Technology Center）、加拿大多伦多大学Terrenee Donnelly细胞与生物分子研究中心的研究人员设计出了一种新的方法对酵母中70000个核小体（Nucleosomes）成功进行了描绘，获得了一张全新的酵母基因组图谱，这有助于我们了解和预测细胞的核小体状态，以及研究细胞遗传物质活动过程中的详细细节。这一研究成果公布在《自然-遗传学》（Nature Genetics）杂志上。     

红酵母提取SOD的研究

研究了从红酵母中提取、纯化超氧化物歧化酶(SOD)的方法和条件。所得SOD酶比活2297．20U/mg，对粗酶液的收率为89．94％，纯化倍数为11倍。     

产番茄红素红酵母基因组重排实验条件的优化

目的:探索基因组重排技术应用于产番茄红素红酵母育种中关键步骤的最优条件.方法:本实验以3株产生番茄红素的红酵母ep-2-11、cp-2-6、cp-28为实验菌株,研究菌体培养时间、酶解浓度、酶解时间、灭活条件以及融合时间对基因组重排的影响.结果:当菌体培养12h,酶解浓度为2％,酶解70min时,原生质体制备与再生率最佳;15w紫外灯,照射距离为35cm,磁力搅拌50r/min的条件下照射18min,60℃下灭活35min作为双亲灭活条件;35％聚乙二醇4000(PEG-4000)作为融合剂,处理23min为最佳融合时间.结论:通过基因组重排最佳条件的确定,后续重排实验的效率得到很大的提升,最终筛选出了高产的目的菌株,产量较融合亲本提高了122％.     

基于基因组改组技术选育多重抗性乙醇酵母

本文通过基因组改组（Genome shuffling）技术将酵母菌株的多重耐受性能集中于同一菌株,从而选育出多重抗性的乙醇酵母。以分别经过热灭活和紫外灭活的酵母GZ-0533、GZ-241、GZ一-582为亲本菌株,经过3轮基因改组后,筛选得到的28株酵母菌。第二次改组得到的MSR14和第三次改组得到的MSR23对多重胁迫条件的耐受性提高最多,乙醇产量分别达到8．58％和8．86％,较多重抗性最好的出发菌GZ-05相对提高了7％和10．5％。26SrDNA序列分析表明,MSR14和MSR23的26SrDNA序列与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的同源性为100％,均认定为酿酒酵母。     

酵母蔗糖酶的提取方法

采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶,经质量分数50%的乙醇分级沉淀、Mono Q阴离子交换柱层析纯化后,制得高纯度的酵母蔗糖酶。比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。纯化的酶经等电聚焦测定,等电点为5.6,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol/L。结果显示3种提取方法各有优劣,冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中SDS抽提法的效率最高,加之其操作简便,更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。     

平菇基因组DNA提取方法的研究

以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8～2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。     

平菇基因组DNA提取方法的研究

以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8～2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。      

产番茄红素红酵母基因组重排实验条件的优化

目的:探索基因组重排技术应用于产番茄红素红酵母育种中关键步骤的最优条件。方法:本实验以3株产生番茄红素的红酵母cp-2-11、cp-2-6、cp-28为实验菌株,研究菌体培养时间、酶解浓度、酶解时间、灭活条件以及融合时间对基因组重排的影响。结果:当菌体培养12h,酶解浓度为2%,酶解70min时,原生质体制备与再生率最佳;15W紫外灯,照射距离为35cm,磁力搅拌50r/min的条件下照射18min,60℃下灭活35min作为双亲灭活条件;35%聚乙二醇4000（PEG-4000）作为融合剂,处理23min为最佳融合时间。结论:通过基因组重排最佳条件的确定,后续重排实验的效率得到很大的提升,最终筛选出了高产的目的菌株,产量较融合亲本提高了122%。      

酒曲中生香酵母的分离及生理生化鉴定

从酒曲中筛选出11株生香酵母,并对其形态及生理生化特性进行研究,确定其种属。筛出菌后进行发酵测发酵液中总酯含量,选出高产优质菌株。在11株产酯酵母中,产酯最高的菌株是X7,其发酵液总酯含量达到1.78 g/L。     

甜菜叶片组织快速制备DNA的方法

通过试验，获得用叶片组织制备甜菜DNA的方法。利用液氮或冷冻研磨直接捣碎叶片组织，提取DNA，该方法简单，易操作，所获DNA纯度较高，可直接用于PCR扩增分析，实验效果较好。     

开菲尔粒中酵母菌的分离及其发酵性能的研究

本文分别对开菲尔滤液和洗液中酵母菌的分离方法及其在牛乳中的发酵性能进行了研究。结果表明：从滤液和洗液中分离筛选出不同类型的乳糖发酵性酵母。它们在牛乳中发酵产酒精能力较强，确定了其在牛乳中的最佳发酵条件是：发酵温度为28℃，发酵时间为60h，接种量为3％。     

大曲中酵母菌的分离及其鉴定

本试验对大曲中酵母菌进行分离纯化,共得到8株酵母菌。从形态学和生化鉴定两方面对其进行属的鉴定。将其归入4个属,分别是汉逊酵母属、假丝酵母属、酒香酵母属和德克酵母属。     

啤酒酵母的分离与性能检测

介绍了啤酒酵母的优化、筛选、培养工作的方法和步骤。     

葡萄酒中酒类酒球菌的分离——抑制剂对酵母菌生长的抑制效应

从葡萄酒中分离酒类酒球菌时 ,酵母菌是最主要的干扰菌。作者通过在ATB和改良MRS琼脂培养基中添加放线菌酮、山梨酸和制霉菌素 ,研究了不同抑制剂对酵母生长的抑制效应。结果表明 ,采用ATB + 5 0mg/L放线菌酮、改良MRS + 5 0mg/L放线菌酮、改良MRS + 10 0mg/L山梨酸、改良MRS + 5 0mg/L制霉菌素选择性培养基 ,能够完全抑制酿酒酵母的生长。     

民间传统酒曲主要微生物的分离及鉴定

酿造酒的独特风味、质量与酒曲中的微生物密切相关.从选取的民间传统酒曲中主要分离得到酵母茵和根霉菌,还有少量曲霉茵等.通过对其微生物进行茵落特征、茵体形态观察和生理生化特征检测,鉴定出酵母茵有3类,分别为酒香酵母属(Brettanomyces)、假丝酵母属(Candida)、毕赤氏酵母属(Pichia);根霉菌有2类,分别为米根霉(Rhizopus chinensis)和华根霉(Rhizopus oryzae).     

酒曲中生香酵母的分离鉴定与产酯工艺优化

用添加30U／mL硫酸链霉素抑制霉菌方法从酒曲中富集和筛选出具有典型酵母菌落特征的菌株,通过鉴定实验确定为生香酵母。选取其中10株进行发酵,比较它们发酵酒的酒精度、总酸和总酯,筛选出酒精度和总酯含量最高的菌株是Y2-7。通过发酵条件优化和小试,得到蒸馏酒（60％,v／v）中总酯含量迭2．1g／L,酒液酯香明显。     

西藏牦牛曲拉中高产酒精酵母菌株的分离及鉴定

从西藏不同海拔地区的曲拉样品分离得到80株酵母菌,经过TTC一级筛选、糖浓度耐性二级筛选和酒精发酵三级筛选获得1株发酵性能较好的菌株XZ3,结合生理生化特征和26S r DNAD1/D2序列分析,鉴定该菌株为Saccharomyces cerevisiae。     

红豆越橘酿酒优良降酸酵母的筛选及分离鉴定

以红豆越橘果汁为原料,在24 ℃的恒温条件下自然发酵,从中筛选出一株优良的降酸菌株,对其进行分离鉴定,并研究其降酸性能。结果表明,菌株BY-9降酸性能最好,适合对红豆越橘果酒进行生物降酸处理。对菌株BY-9进行形态学和生理学特征鉴定以及内源转录间隔区（internally transcribed spacer,ITS）序列解析,鉴定出菌株BY-9为酵母属中的二孢结合酵母（Zygosaccharomyces bisporus）。将菌株BY-9接入酒精发酵结束的红豆越橘果酒中,发现其使红豆越橘果酒总酸含量降低了12.26%。