Fungal and Plant Xyloglucanases May Act in Concert During Liquefaction of Apples

Efficient enzymic degradation of cellulose in isolated cell wall material of apples requires prior removal of its xyloglucan coating. In this study, raw and blanched apple fruit tissues were treated with pectin lyase and various (combinations of purified) cellulases. These experiments confirmed that xyloglucanase activity is important for cellulose degradation in apple fruit tissue. Apart from this, it was observed that raw apple material disintegrated faster than blanched. Typically, the release of xyloglucan oligosaccharide XXXG from raw apple material was slower (relative to XXFG) when compared to that from blanched material. The endogenous enzyme, xyloglucan endotransglycosylase (XET), is probably responsible for these phenomena. It is hypothesised that XET activity accelerates disintegration of apple tissue once its depolymerising mode is triggered by xyloglucan oligosaccharides released by exogenous endoglucanases. © 1997 SCI.     

向日葵黄萎病菌不同培养型产毒能力和致病力分化

为了明确向日葵黄萎病菌间毒素产生能力以及致病力存在的分化现象,本文选取5种不同培养型的向日葵黄萎病菌对其菌落生长速度、粗毒素含量、毒素致萎活性及致病力进行测定。结果表明,不同培养型的黄萎病菌分生孢子的形态没有显著差异,但是菌株生长速度、粗毒素产生量及其致萎能力存在一定的差异。粗毒素产生能力高的菌株,其致萎能力也强,如菌株V33（产生大量微菌核）、V21（不产生微菌核）、V27（产生一定量的微菌核及气生菌丝）的粗毒素分泌量分别为0.36、0.34、0.23mg/mL,其72h的致萎指数为58.33、52.08、37.50。采用纸钵撕底蘸根法对供试菌株的致病力进行测定,结果表明,不同培养型黄萎病菌的致病力存在一定的分化现象。其中致病力最强的菌株是V33,病情指数为53.97;其次是V21和V39（产生大量微菌核）,其病情指数分别为45.91和43.35;菌株V27的致病力最弱,其病情指数为37.44。相关性分析结果表明,菌株致病力的强弱与其分泌的粗毒素含量呈显著的正相关关系（R2=0.816 9,P〈0.05）,但与其菌落生长速度以及微菌核的数量没有相关性。向日葵黄萎病菌毒素的分泌量是决定其致病力分化的关键因子。     

一株产白藜芦醇真菌的分离及培养

在虎杖组织培养过程中分离出1株真菌,对其发酵液提取物进行TLC和HPLC分析证明,该菌株能产生白藜芦醇,并对其培养条件及白藜芦醇积累特性进行了初步研究。结果表明,培养时间、温度、pH值、接种量对白藜芦醇积累均有较大影响。通过单因素和正交试验得到最佳培养条件为:20g/L蔗糖、2g/LNH4NO3、自然pH值(6.8～7.0)、温度为28℃、培养时间7d、接种量为培养基装液量的10%,转速100r/min,其白藜芦醇含量约为39.58μg/L。     

向日葵黄萎病菌营养亲和性及致病力分化

为进一步研究向日葵黄萎病病原菌的变异规律及不同菌株致病力差异,本研究以采自于黑龙江、内蒙古东部和西部、河北、陕西、宁夏、新疆等向13葵黄萎病发生严重的地块,并经分离纯化后得到的120株菌株为材料,开展了菌株问营养亲和性、致病力分化研究。结果表明：利用硝酸盐营养缺陷型突变体（nu）技术可将120株菌株分为3个亲和群（VCGs）,3个亲和群分别有89株、13株、7株,此外,还有11株未能鉴定出亲和群。通过对3个鉴别寄主的致病力测定,120株菌株可分为3个致病类型,强致病力（Ⅰ）占7．3％,中等致病力（Ⅱ）占52．7％,弱致病力（Ⅲ）占40％,菌株致病力存在明显的差异。研究同时表明菌株问营养亲和性与地理位置没有明显的相关性,但与致病性类型具有一定的相关性。     

一株喜树内生真菌的分离及其产喜树碱的初步分析

从秦巴山区喜树中分离到42株内生真菌,其发酵产物经HPLC检测发现,菌株M-20氯仿-甲醇提取物的出峰时间为5.314 min,同喜树碱标准品的出峰时间(5.453 mim)靠近。HPLC-MS分析显示,菌株M-20产生一个M+H+核质比为349.4的离子峰,喜树碱标准品的M+H+核质比为349.2。上述结果表明,菌株M-20代谢产喜树碱,含量为233.3μg/L。结合形态特征和ITS序列分析,将菌株M-20初步鉴定为炭角菌属(Xylaria)真菌。     

一株丹参种子内生真菌ZJZD-3的分离鉴定及其生物活性

目的:从丹参种子中分离纯化内生菌,筛选具有抑菌、抗氧化、抗凝血活性的菌株进行分子鉴定。方法:采用平板分离法从丹参种子中分离内生菌;采用平板对峙法和滤纸片法筛选具有抑菌效果的内生菌,采用DPPH法测定内生菌抗氧化活性,兔耳缘静脉取血测定内生菌抗凝血活性。结果:从白花丹参种子中分离出11株内生真菌和2株内生细菌,从紫花丹参种子中分离出9株内生真菌和9株内生细菌。其中,一株内生真菌ZJZD-3发酵液对丹参病原菌4和6均有抑制作用,抑制率分别为70.1%和59.6%;内生真菌ZJZD-3具有很好的抗氧化能力,其0.5 mg/mL乙醇粗提液对DPPH清除率为91.44%;内生真菌ZJZD-3对于内源性、外源性凝血途径都具有一定的延长作用,并且内源性凝血途径最为明显,对家兔凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活性部分凝血酶时间(APTT)的延长率分别为48.48%、12.38%和34.44%。该菌株经鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。结论:内生真菌ZJZD-3具有很好的抗丹参病原菌、抗氧化和抗凝血能力,为丹参药效成分的工业化开发以及丹参的绿色规模化栽培提供新的途径和方法。     

一株产白藜芦醇真菌的培养及调控研究

在虎杖组织培养过程中分离出1株真菌,对其发酵液提取物进行TLC和HPLC分析证明能产生白藜芦醇,并对其培养条件及白藜芦醇积累特性进行了初步研究,通过正交优化试验得到最佳培养条件为:20g/L蔗糖、2g/L硝酸铵、自然pH值（6．8～7．0）、温度为28℃,转速100r/min。3mmol/L苯丙氨酸前体物、Mg2+、Zn2+能促进真菌B-39的生长及白藜芦醇的积累,其白藜芦醇含量能达8．6617μg/100ml。     

产白藜芦醇葡萄内生菌的分离与鉴定

从酿酒葡萄梅洛特的葡萄皮、葡萄穗轴及梗中分离出30株葡萄内生菌,经过摇瓶液体发酵后检测发酵液提取物,发现有7株内生真菌具有产白藜芦醇的能力。其中菌株MG1发酵产白藜芦醇的能力稳定、产量高,达97μg/L,其他几株菌株白藜芦醇产量较低且不稳定。对菌株MG1的分类鉴定进行重点研究,结合形态学特征及分子生物检测结果,鉴定其为链格孢属菌。     

一株片栗内生真菌的分离鉴定及其次级代谢产物对癌细胞的抑制作用

本文采用组织分离法从片栗叶部分离获得一株内生真菌,通过28s r DNA序列测定和系统发育树分析对此菌株进行了鉴定。用PD培养基和YM培养基分别发酵培养此菌株,其次级代谢产物通过高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)进行了分析。在YM培养基条件下对此菌株大量培养,利用硅胶层析等手段对其次级代谢产物进行分离纯化,采用MTT法测定了次级代谢产物对癌细胞的毒性。结果表明,从片栗叶部分离得到的内生真菌鉴定为Eupenicillium sp.NF2_PD013。经HPLC和MS分析表明,此内生真菌的次级代谢产物在YM培养基条件下比在PD培养基条件下丰富且产量大。从YM培养基条件下的次级代谢产物中分离得到4个化合物,分别为geodin,dihydrogeodin,3’-chlorotrypacidin和monochlorosulochrin,4个化合物均含有氯元素。化合物geodin和3’-chlorotrypacidin对乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G2都有明显的增殖抑制作用。     

鱿鱼丝加工中真菌菌相变化规律及优势真菌的分离鉴定

为减少鱿鱼丝加工过程中真菌污染,提高鱿鱼丝产品的质量,将传统的微生物鉴定技术与5.8S r DNA-ITS序列分析法相结合,并通过系统发育树分析,探索鱿鱼丝加工过程中真菌菌相变化规律及优势菌株。结果表明,在鱿鱼丝加工过程中,不同阶段样品中真菌数量差异显著(p0.05),在加工终点(即烘干包装后)时真菌数量高达2.61 log cfu/g,其中调味和烘干包装阶段是真菌污染的主要环节。加工终点的鱿鱼丝中分离出6种酵母菌和4种霉菌,经测序并通过National Center for Biotechnology Information(NCBI)数据库比对,确定它们分别属于假丝酵母属(Candida sp.)、隐球酵母属(Cryptococcus sp.)、座囊菌属(Dothideomycetes sp.)、胶红酵母属(Rhodotorula sp.)、丝孢酵母属(Trichosporon sp.)、茎点霉属(Phoma sp.)、青霉属(Penicillium sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、枝孢霉属(Cladosporium sp.)。其中,青霉菌(M-03)和假丝酵母菌(Y-04)为鱿鱼丝加工过程中的优势菌,在加工终点时的数量分别为1.85 log cfu/g和2.15 log cfu/g。     

红茶菌中微生物的分离与鉴定

对某红茶菌中的微生物菌种进行分离,共得到70个菌株,其中酵母菌15株,醋酸菌30株,乳酸菌25株,经过初步鉴定得到6个菌种。分别为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe、醋化醋杆菌木质亚种Acetobacterxylinum、液化醋杆菌A.liquefaciens、甲醇醋杆菌Acidomonas mnethanolica、乳杆菌Lactobacillus sp。     

Characterization of Internal and Surface Lipids of Oat Starches from Two Isolation Processes

Oat starches representing two different isolation methods were studied for lipid contents and compositions. One of the starch isolation methods utilized water and the other slightly alkaline solution. The internal lipids were practically identical in both starches. However, starch from the alkaline method contained 21% less non-starch lipids as total fatty acids, 63% less Kjeldahl nitrogen, and the content of non-starch free fatty acids was low. Instead, starch from the water method contained almost three fold higher amounts of free fatty acids which contributed up to 49% of non-starch lipids. Therefore, it was concluded that isolation of starch under alkaline conditions both reduces the content of non-starch lipids and maintains a better composition in the residual starch lipids.     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

盐生海芦笋来源真菌Penicillium stoloniferum发酵产物抗肿瘤活性成分研究

采用活性追踪的方法,对一株盐生海芦笋来源真菌Penicillium stoloniferum发酵产物中的抗肿瘤活性成分进行分离和鉴定。利用常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20、半制备HPLC等分离方法从中分离得到8个单体化合物,通过理化性质分析及波谱学方法鉴定其化学结构分别为：麦角甾-7,9(11),22-三烯-3-醇、麦角固醇、菠菜甾醇、5α,8α-环二氧-(22E,24R)-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、色氨酸-苯丙氨酸-环二肽、苯丙氨酸、邻苯二甲酸正丁酯、邻苯二甲酸异丁酯;以SRB法评价化合物的抗肿瘤活性,5α,8α-环二氧-(22E、24R)-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、邻苯二甲酸正丁酯、邻苯二甲酸异丁酯对小鼠乳腺癌P388细胞具有强的细胞毒活性,IC50值分别为14、34、46μg/mL,其他化合物没有活性。     

药用真菌液化苦瓜渣获取膳食纤维的研究

对药用真菌Irpex lacteus CD液化苦瓜渣获取功能性膳食纤维饮品的可行性、液化机理及培养条件进行了研究。结果表明,药用真菌能较好地液化苦瓜渣,在保持皂苷含量的同时,发酵液中膳食纤维含量明显增加。液化的主要机理在于,药用真菌对苦瓜渣中的纤维素成分进行了有效的降解。在优化条件为:转速150 r/ min、加水量60 mL、种龄3 d、培养时间3 d,发酵液中皂苷、SDF和IDF含量分别能达到0.71 g/L、3.76g/L和5.86 g/L。该研究为获取功能性膳食纤维蔬菜饮品提供了新的思路。     

1株产甘露聚糖酶嗜热真菌的鉴定、酶学性质表征及转录组学分析

从大曲中筛选出一株产嗜热甘露聚糖酶的嗜热真菌GZFH7,经鉴定该菌为微小根毛霉(Rhizomucorpusillus),接菌至魔芋发酵培养基诱导产生的甘露聚糖酶的最适反应温度为70?℃.在50～80?℃范围内可保留50％以上的酶活力.在最适反应温度处理1?h,酶活力基本保持不变.该酶pH?2.0～12.0范围内均具有一...     

一株产纤维素酶真菌的筛选及其对秸秆的降解效果研究

为了筛选新的降解玉米秸秆的高产纤维素酶真菌,本研究从全国不同区域采集了大量的半腐秸秆、半腐木材和富含腐殖质的土壤。通过常规分离方法共分离得到120株真菌分离物。利用纤维素刚果红培养基培养、测定滤纸酶活和羧甲基纤维素(CMC)酶活、玉米秸秆粉降解实验对分离到的120株真菌进行了三重筛选,获得了一株高产纤维素酶的真菌MC-1,并对比了MC-1、产纤维素酶木霉菌对照菌株及二者混合发酵液HJ-1对玉米秸秆室内降解效果。结果表明,MC-1在纤维素刚果红培养基上培养72h后水解圈直径达到8.52 cm;培养48h MC-1的CMC酶活为96.31 U/g,滤纸酶活为8.68 U/g,室内秸秆腐解试验表明,秸秆失重率和纤维素分解率均在15 d内迅速升高,之后升高速度放缓。MC-1在处理45 d后秸秆失重率达到了46.84%,HJ-1处理的秸秆失重率和纤维素分解率高于单一菌剂处理。     

韭菜过氧化物酶的分离纯化及性质

经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的韭菜过氧化物酶(POD)。该酶比活力达到14031.41U/mg,纯化倍数为102.96,回收率为10.85%。该酶分子质量约为28.4kD,最适温度40℃、最适pH值为4.6。该酶在20～40℃以及pH 4.0～8.0有较好的稳定性,在最适条件下测得其Km值为18.15mmol/L。低浓度草酸、Zn2+、Mg2+等对该酶有较强激活作用;甲醇、乙醇、异丙醇、SDS、抗坏血酸(AsA)以及Mn2+、Fe3+等对该酶有较强的抑制作用。     

Isolation, Purification, and Characterization of Lipase Isoenzymes from a Technical Aspergillus niger Enzyme

A qualitative screening revealed the occurrence of lipase, esterase, protease, amylase, endo-1,4-β-D-glucanase, xylanase, pectinmethylesterase, polygalacturonase, catalase, β-D-glucosidase and β-D-galactosidase activities in the technical Aspergillus niger enzyme under study (Lipase 2212 D, Röhm). The isolation and purification of lipolytic activities were performed by combination of DEAE-Trisacryl M ion exchange chromatography, Sephadex G 50 gel filtration and hydrophobic chromatography using Phenylsepharose CL-4B. The individual purification steps were checked by specific enzyme visualization in ultrathin agar gels after ultrathin-layer isoelectric focusing (UIEF). Two UIEF homogeneous lipase isoenzymes (I and II) were isolated and characterized by the following parameters: isoelectric points (I: 4.0; II. 3.5); molecular weights (I: 31000 daltons; II: 19000 daltons); carbohydrate contents (I: 6%; II: 9%) and compositions; pH optima (I, II: 5-6); substrate specificities and various effectors.