湘味卤豆干中腐败微生物的分离鉴定及控制

目的：更好地控制湘味卤豆干腐败微生物的生长,保证湘味卤豆干的食品安全。方法：采用平板划线法进行初筛,结合菌落形态观察、革兰氏染色、16S rDNA和ITS序列鉴定湘味卤豆干中的腐败微生物。结果：共分离筛选得到9株菌株,KZ2780-3和KZ2780-4为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、NZ2559-1为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、JZ2559-5为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、FZ2559-2为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）、SZ2641-5为屎肠球菌（Enterococcus faecium）、RZ2641-7为溶血性葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus）、BZ2780-1为鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baui）、CZ2780-5为橘青霉（Penicillium citri）。结论：引起湘味卤豆干腐败的菌株是枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、屎肠球菌、溶血性葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、橘青霉。湘味卤豆干的控制方法是超高温瞬时杀菌技术、等离子体杀菌技术、天然抑菌物质结合生物防腐剂、真空包装、气调保鲜等。     

菌株BS-3的鉴定及其真菌抑制活性的初步研究

从土壤中分离得到一株对多种植物病原真菌具有抑制作用的菌株,将其命名为BS-3。该菌株对水稻纹枯病、稻瘟病、苦瓜枯萎病等病原真菌均有较强抑制作用。通过对菌株BS-3的16S rDNA的序列测定和同源性比对,发现它与Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bacillus amyloliquefaciens等的16S rDNA有高达100%的同源性,结合形态和生理生化鉴定指标,将其鉴定为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。选用受其抑制作用较明显的水稻纹枯病病原真菌瓜亡革菌（Thanatephorus cucumeris）作为指示菌,牛津杯法检测BS-3菌株发酵产物的抑菌活性。结果表明BS-3菌株的发酵上清液滤液、硫酸铵处理离心沉淀对水稻纹枯病菌有较强抑菌活性。此外,该抗真菌物质具有较强热稳定性。     

原桃胶中1株芽孢杆菌的分离鉴定及其主要抗菌物质

从天然原桃胶分离到1 株产抑菌活性物质的芽孢杆菌TJ12。其发酵产物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）和串珠镰刀菌（Fusarium moniliforme）有抑菌活性。结合菌落形态、生理生化指标、16S rRNA序列和gyrB序列将TJ12菌株鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。通过硫铵沉淀、有机溶剂萃取、羟丙基葡聚糖凝胶、高效液相色谱分离纯化,得到其主要活性物质。该物质对pH值、温度和3 种蛋白酶（胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶）有较好的稳定性。经电喷雾电离质谱分析,初步鉴定该株地衣芽孢杆菌TJ12的主要抗菌物质为杆菌肽A。     

温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分布及分子分型研究

目的 了解温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分子分型及分布特征。方法 4 ℃增菌后用选择性培养基对食品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行分离鉴定,分析阳性菌株的生物型、血清型、毒力基因型、耐药性和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子型别。结果 采集6类食品,共676份样品,其中68份样品检出69株小肠结肠炎耶尔森氏菌,检出率为10.1%（68/676）。调理肉制品检出率最高（20.5%,9/44）,其次为速冻食品（17.2%,11/64）。95.7%（66/69）的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5（29.0%）为主,其次为1A/O∶8（14.5%）;88.4%（61/69）的菌株仅携带ystB基因,检出1株4/O∶3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到94%以上。32株血清已分型菌株,分为29种PFGE带型。结论 温州市食品中存在一定程度的小肠结肠炎耶尔森氏菌污染,且检出致病性小肠结肠炎耶尔森菌,菌株耐药率处于较低水平,分子分型提示菌株呈高度遗传多态性。     

盐生海芦笋抗菌内生细菌的筛选与鉴定

以抗菌活性为指标,从野生海芦笋中筛选与鉴定具有抗菌活性的内生细菌。采用平板分离与斜面纯化的方法,从海芦笋中分离到13株内生细菌,经过对8株病原菌抗菌活性测试,菌株HLS-7和HLS-8对大肠杆菌(Escherichia coli)、金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)和白假丝酵母(Candida albicans)均显示了较强的抑制活性,其抑菌圈直径均10 mm;对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella penumoniae)均显示了中等抗菌活性,表现出广谱的抑菌活性。PCR扩增这2株菌的16S r DNA区域,单克隆后测序进行同源性分析,构建系统发育树,结合形态学观察和生理生化实验,将菌株HLS-7和HLS-8分别鉴定庆生芽孢杆菌(Bacillus qingshengii)和甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。通过电喷雾质谱分析这2株菌的发酵产物,结果显示,菌株HLS-7可产生脂肽类化合物Fenycin和Iturin,菌株HLS-8可产生脂肽类化合物Iturin,提示这2株菌的抗菌活性可能源于脂肽化合物。     

一株产抑菌物质的蜡样芽胞杆菌的鉴定及其抑菌物质性质

从酱渣中分离到一株产抑菌物质的新菌株,暂命名为菌株B。研究表明,该菌株经碱中和后的无细胞发酵液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有抑制作用;其发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后,仍然有抑菌活性;双缩脲和茚三酮实验表明,抗菌活性物质为肽类物质。生理生化实验、16S rDNA序列比对及系统发育分析表明,菌株B为蜡样芽胞杆菌,其生长和抑菌最适培养基为NB培养基,在pH 7.0的NB培养液中培养40h其抑菌活性达到最大。     

4种海南诺丽果内生细菌多样性及其关键生物活性研究

诺丽果富含生物活性成分,具有较强抑菌性和抗氧化能力。为探讨海南诺丽果中内生菌多样性的区别及其关键活性与多样性之间的联系,通过高通量测序技术(HTS),从4种诺丽果(长果标号为L、圆果标号为R、连体果标号为C、大溪地诺丽果标号为T)中发现了它们共同的优势菌属为短波单胞菌属(Brevundimonas)、泛菌属(Pantoea)和芽孢杆菌属(Bacillus),并测定内生细菌抑菌性,对具有抑菌活性的内生细菌进行总抗氧化性测定,发现具有抑菌性的诺丽果内生细菌均具有抗氧化性,抗氧化值在3.07～20.78U·mL-1,同时内生细菌的抗氧化性和抑菌活性呈正相关性。挑选4个品种诺丽果中2种关键活性较高的内生菌8株,进行16S rDNA和gyrA分子生物学鉴定,鉴定结果均为芽孢杆菌属(Bacillus),并分别属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、摩加夫芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。研究结果从微生物学角度比较了不同品种诺丽果内生细菌群落多样性差异,并探讨了内生细菌功能性之间以及与内生群落之间的关联,证实了植物-微生物相互作用学说。希望研究可为今后研究内生菌和宿主功能的协调性和统一性提供帮助,为具有特定功能的诺丽果内生菌的筛选应用提供理论基础,为内生菌在食品工业中的应用及植物与微生物互作研究提供更多思路。     

拮抗砀山梨炭疽菌的内生菌筛选及抑菌效果分析

从健康砀山梨中分离出15 株内生菌,筛选出1 株对砀山梨胶孢炭疽菌抑菌活性较高的菌株,命名为DSL-9,初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。DSL-9菌株对炭疽菌的抑制主要是通过胞外分泌物作用的结果。采用硫酸铵沉淀法获得DSL-9的粗蛋白提取液,蛋白提取液在30～60?℃抑菌率无明显变化,大于60?℃抑菌率下降;在pH?7～10区间抑菌活性较高,且无明显变化;紫外线对抑菌物质无明显影响;蛋白提取液经蛋白酶处理后,抑菌活性下降。研究内生菌DSL-9对感染炭疽菌砀山梨防御酶活性的影响,发现内生菌DSL-9可提高砀山梨果实对病菌的抗性。从砀山梨中分离筛选的枯草芽孢杆菌DSL-9?对砀山梨炭疽病害的生物防治具有潜在的应用价值。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的筛选、鉴定及其活性物质初步研究

从海南红树林土壤分离筛选抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株,通过形态学观察、生理生化试验及分子生物学进行菌种鉴定。采用不同培养基优选抑菌活性物质生成条件;以有机溶剂萃取抑菌活性物质,采用气相色谱-质谱（GC-MS）分析抑菌物质化学成分,采用微量稀释法测定最低抑菌浓度与最低杀菌浓度。结果表明,筛选得到一株抗MRSA菌株,编号为NEL-002,被鉴定为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）。菌株NEL-002采用LB液体培养基得到发酵液经石油醚萃取粗提物抗MRSA菌活性最强,且在40～80 ℃、pH在5～10较稳定,对多种蛋白酶不敏感;最低抑菌质量浓度为62.5 μg/mL,最低杀菌质量浓度为500 μg/mL。GC-MS鉴定出抗菌活性物质为十甲基环戊硅氧烷、十二甲基环六硅氧烷及邻苯二甲酸二丁酯。     

拮抗丁香假单胞菌海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物，首先采用滤纸片法对丁香假单胞菌拮抗菌株进行初筛，然后采用牛津杯法进行复筛，并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后研究其抑菌谱。结果表明，从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物，经过初筛得到33株丁香假单胞菌拮抗菌株，再经过复筛后，筛选出一株对丁香假单胞菌抑菌效果最好的菌株，编号为NO.4.1.3-1，其抑菌圈直径达（12.63±0.06） mm。该菌被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）；除屎肠球菌外，该菌对8株致病菌均有抑制作用，且对肺炎克雷伯氏菌、金黄葡萄球菌的抑菌作用较好，具有较广的抑菌谱。