转基因成分定量检测技术研究进展

转基因作物的种类以及含有转基因成分的产品在日益增长,转基因产品的安全性也越来越被社会公众广泛关注。世界各国均颁布转基因安全管理、标识法规,对转基因生物及其加工产品进行标识和管理。如何准确、稳定地对转基因产品中的转基因成分进行定量,已成为转基因产品检测技术研究的重要方向。本文综述了竞争性PCR、荧光定量PCR以及数字PCR等定量检测技术在转基因成分检测中应用及研究进展,讨论了目前各类转基因定量检测技术的优缺点,并在此基础上展望了定量检测技术在转基因成分检测领域的发展前景。      

转基因水稻定性PCR检测体系的建立

采用PCR技术检测CaMV35S启动子、NOS终止子、Bt基因,判断水稻样品中是否含转基因成分,建立了稳定快速的转基因水稻定性PCR检测体系.PCR检测的灵敏度达到0.1%,稳定性良好.结果表明:PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中.此外,进一步讨论了转基因成分检测中存在的问题、转基因产品标识的必要性和目前转基因检测技术在检测中的问题.     

转基因食品成分分析检测技术研究进展

随着转基因研发技术的快速发展及在农业领域产业化应用的不断推进,抗逆、抗病和高产优质的转基因(genetically modified,GM)作物品种日渐增多。但转基因食品(genetically modified food,GMF)在带来极大经济效益同时,其安全性也备受争议。因此,世界各国不断建立和完善GM产品标识制度,有些国家甚至规定了转基因成分(genetically modified ingredients,GMIs)具体阈值限量。为更好地对GMF安全性提供评价,识别和量化转基因成分(GMIs)检测技术的持续创新与发展尤为重要。本文从基于外源核酸水平的检测技术和基于外源蛋白的检测技术两个方面,系统介绍了定性PCR技术、定量PCR技术、等温扩增技术、基因组测序技术、酶联免疫吸附技术、免疫层析试纸条技术以及较新的CRISPR/Cas核酸检测技术等重要技术的原理、应用情况和研究进展,并总结分析各转基因食品成分检测技术的优缺点和亟需解决的难点问题,以期为促进GMF快速、准确及高通量检测技术发展,为确保我国GMF安全的高效准确的监督提供有效支撑。     

实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分

采用实时荧光PCR技术，建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性，特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分，还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法，即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0．1％)，也可以用于定性检测，或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。     

生产加工过程食用玉米淀粉基因降解情况

含有转基因成分的玉米在生产加工过程中核酸成分受到不同程度破坏,增加出口过程中转基因成分检验难度。针对转基因食用玉米淀粉在加工过程中主要环节进行样本收集,使用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）对加工过程中样品内、外源基因不同扩增片段进行定量研究。研究发现,浸泡后的浆料湿磨及精磨分离阶段的样品DNA降解严重。随着检测转基因成分方法的不断创新和提高及数字PCR在检测领域的开发和应用,利用数字PCR方法检验痕量转基因成分,不仅可以定性检测,并且可以对转基因成分含量进行定量检测。     

可视化膜芯片检测转基因大豆的研究

目的研究可视化膜芯片技术对转基因大豆及其制品的检测能力,验证该技术的灵敏度及可行性。方法利用可视化膜芯片对转基因大豆及其制品进行检测,并采用行业标准要求的实时荧光PCR方法进行对比验证。结果该技术具备典型外源基因片段的判定能力,能够用于大豆及其制品中转基因成分的检测,方法检出限为0.1%,比对验证实际样品的检测结果与行业标准荧光PCR法一致。结论该技术便捷、直观、准确,可用于大豆及其制品的转基因成分快速初筛与鉴定。     

利用微滴式数字PCR技术检测大豆毛油中的转基因成分

我国是转基因大豆的进口大国,由转基因大豆加工而成的大豆油成为进入消费者生活的食用油,判定食用的大豆油是否含有转基因成分,是国家监管部门和公众消费者密切关心、关注的问题。大豆油在制备精炼过程中破坏了大豆的DNA,造成检验时DNA富集难度增加,严重影响了大豆油转基因成分检测的准确度。到目前为止,国家已经颁布的标准中没有涉及转基因大豆油的检测标准。本研究利用高灵敏度、精确度的数字PCR技术,并通过优化大豆毛油DNA提取方法和PCR反应体系,对大豆毛油样品进行外源转基因成分检测。检测结果显示,大豆毛油外源转基因成分被成功检测到。实验结果表明,本研究建立的大豆毛油转基因成分检测方法准确可靠,可进行推广应用。     

大豆、油菜籽及大豆油中外源基因检测的灵敏度、准确度研究

本研究针对转基因产品中转入的目的基因以及启动子、终止子,设计了相应引物35SCP142、CPNOS165.通过对引物的调整,使PCR扩增产物的大小控制在100～170 bp,从而提高了检测灵敏度.在25μl的PCR反应体系中,可以检测到0.01ng的外源DNA.为了检测以大豆为原料的油脂类产品中的外源基因,我们又设计了NEST-PCR的两对引物35SCP318和35SCP114,并检测到了外源基因的片断.对新设计的引物进行准确度分析,即在不同的样品(包括转基因或非转基因产品)中进行检测,并经测序验证,新设计的引物35SCP142,CPNOS165及NEST-PCR的引物都有高特异性,可用于含有相应外源基因的产品检测.     

数字PCR技术在食品检测中的应用研究进展

数字PCR是近年来迅速发展的一种核酸分子定量检测技术,与传统检测方法相比具有不依赖标准曲线、灵敏度和精准度高等优势,在食品转基因成分分析、动植物产品检测、微生物检测等相关领域逐渐显现出巨大的应用价值和发展前景。本文对数字PCR的原理、应用、存在的问题及发展趋势等进行综述及分析,为数字PCR在食品检测中的应用提供参考。     

普通PCR法、荧光定量PCR法及微流控芯片法检测大豆产品中外源基因灵敏度的比较

目的:为提高食品中转基因成分检测的灵敏度,将微流控芯片仪应用到转基因检测中.方法:将微流控芯片法与普通PCR法、荧光定量PCR法进行灵敏度比较;检测高温、高压处理过的转基因大豆粉.结果:荧光定量PCR法的灵敏度明显高于普通PCR法,但在较极端高温、高压处理(高压灭菌121℃/30min)及转基因成分含量较低(1%)的情况下,采用荧光定量PCR法未能检测到外源基因,而微流控芯片法能检测到相应的峰值,前提是在未添加内标(Marker)的情况下.若添加内标,在内标峰和目的峰区分开的条件下,有损检测灵敏度.结论:微流控芯片在转基因检测中具有高效率、高灵敏度的特点,但该方法有待完善.     

利用PCR方法检测转基因大豆加工食品中的修饰基因

市场上的转基因产品以及深加工产品越来越多,其安全性引起全世界的极大争论,很多国家的检验检疫机构相继开展了转基因产品的检测工作。本文以转基因大豆类食品为材料,以聚合酶链式反应(PCR)方法为基础,选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术,针对抗除草剂Round up Ready (RR)大豆的插入基因进行PCR检测,建立适合转基因大豆类食品的检测方法．该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符．     

环介导等温扩增技术检测转基因组分的研究进展

随着越来越多的转基因作物获得商业化生产和种植,转基因农产品的安全问题一直都有异议,因此,无论对消费人群还是政府监管部门,快速检测转基因组分都是非常必要。转基因组分的检测通常以核酸为基础进行检测,而环介导等温扩增技术(LAMP)是一种等温条件下核酸扩增技术,具有高特异性、高灵敏度、操作简单、成本低廉、结果可视化及不需要专用设备的特点,已逐渐用于转基因组分的检测中。本文针对LAMP技术的原理、优点、关键技术及其在转基因大豆、玉米、水稻等农产品中的应用做一综述,从而为其更广泛的用于转基因组分的检测提供理论依据。     

利用PCR方法检测水稻及其加工产品中转基因水稻

市场上的转基因产品以及深加工产品越来越多,其安全性引起全世界的极大争论,很多国家的检验机构相继开展了转基因产品的检测工作。以转基因水稻为材料,以聚合酶链式反应(PCR)方法为基础,选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术,针对转入苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简写为Bt)基因水稻的Cry1Ac片段进行PCR检测,建立适合转基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。     

数字PCR技术在转基因检测与溯源中的应用

转基因食品的安全性一直备受关注,准确测定转基因成分及其含量十分重要。近年来,数字聚合酶链式反应(digital polymer chain reaction,dPCR)技术因具有高灵敏度、受基质干扰少等优势而被广泛用于转基因食品检测。本研究综述了数字PCR技术的原理、系统各部件的优劣势,梳理了数字PCR技术在转基因检测与溯源技术(标准物质)方面的进展和发展趋势,以期为转基因食品检测领域提供参考依据。     

转基因作物检测技术研究进展

转基因作物的广泛种植为人类社会带来了巨大的经济利益和社会效益,有效缓解了因土地不足或病虫害导致的粮食减产和不足的现状。由于目前转基因食品的生物安全仍存在不确定性,随着其种植面积的逐年增加,转基因食品检测在转基因生物安全监管中的作用越来越重要。因此,建立简单、快速、适用性强的转基因检测方法对转基因食品监管、评估和风险防范等具有重大的意义。本文针对目前三大类,分别为基于核酸水平的检测、基于蛋白水平的检测和基于代谢物水平检测的具体转基因检测技术的原理、应用和研究进展进行概述,并对相关的检测方法及其适用范围进行了简单概括,对比不同检测技术的优势和劣势,指出了目前转基因生物检测技术存在的问题,展望了未来转基因检测技术的发展方向,以期使人们对转基因检测技术的现状和发展趋势有较为清晰和全面的了解。     

转基因植物食品的检测策略

近年来 ,随着越来越多的转基因植物被批准商业化生产 ,由此衍生而来的转基因食品数量也迅速增加 ,引起了社会各界对转基因食品的广泛关注。为了消除消费者对转基因食品安全性的疑虑 ,保证转基因植物的健康发展 ,包括我国政府在内的世界上许多国家针对转基因食品的研究开发制定了严格的管理条例 ,转基因食品的标识制度是其中重要的一条。建立准确可靠的转基因食品鉴别技术是贯彻转基因食品标识制度的基础。本文在对转基因食品与传统食品的差异进行详细分析的基础上 ,讨论了鉴别转基因食品的一般策略 ,并对利用PCR技术鉴别转基因食品的基本原理及技术要点作了简要介绍     

转基因植物中标记基因定性PCR检测方法研究

为了建立以标记基因为检测靶标的高效定性检测方法,本研究系统地分析了日前申请商业化的转基因植物中标记基因的应用频率,选取了应用频率高或在末来应用潜力大的标记基因neomycin phosphotrarsferaseII （NPTll） ,phosphinothricin acetyltransferase （ PAT）, 5 - enolpyrul - shikimate - 3 - phosphate synthase （ CP4 - EPSPS ） ,phosphlnothricin acetyltransferase （bar） ,hygromycin phosphotransferase H（HPTI1） ,β - glucuronidase （GUS） 和 phospho-mannose isomerase （PMI）作为检测靶标,建立了这七个基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。该研究建立的普通PCR方法和实时荧光PCR方法特异性强、灵敏度高、重现性好,适用于农产品中转基因成分的大规模筛查检测,而且应用实时荧光PCR方法可大大提高检测效率,降低检测过程中样品交叉污染和环境污染的几率。