正相柱色谱法分离制备陈皮中橘皮素和川陈皮素

该实验建立一种从陈皮中分离制备高纯度橘皮素和川陈皮素的方法。选用陈皮作为原料,先用无水乙醇浸提,得陈皮粗提物Ⅰ,然后依次用正己烷和二氯甲烷萃取,得到陈皮粗提物Ⅱ。再以硅胶为吸附剂,乙酸乙酯-石油醚为洗脱剂,探究橘皮素和川陈皮素的最佳分离条件,在最优分离条件下得到橘皮素和川陈皮素两种单体。该法所得的橘皮素和川陈皮素单体,经高效液相色谱（HPLC）法峰面积归一化法计算其纯度均≥98%,并采用质谱（MS）法对其结构进行了确证。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

高核苷酸酵母水解物对脂多糖诱导RAW264.7细胞免疫调节的影响

为探讨高核苷酸酵母水解物对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性调节及其相关作用机制,采用脂多糖(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞来建立体外细胞炎症模型,以不同质量浓度的高核苷酸酵母水解物干预来明确其抗炎效果。ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,RT-PCR法检测相关mRNA表达水平,Western blot法检测细胞iNOS及胞核内核转录因子NF-κBp65蛋白水平。结果表明:高核苷酸酵母水解物作用RAW264.7细胞的安全范围≤150μg/mL。与LPS模型组相比,质量浓度60～150μg/mL的高核苷酸酵母水解物能显著增强RAW264.7吞噬能力,高核苷酸酵母水解物(60～150μg/mL)能有效抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞释放NO、TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子及相关mRNA表达,降低iNOS及NF-κB蛋白水平。研究结果证实了高核苷酸酵母水解物对LPS刺激RAW264.7细胞炎症的保护作用,作用机制与NF-κB通路有关,为食疗干预慢性病提供一定的理论依据。     

澳洲坚果油脂对脂多糖诱导小鼠肠道损伤的改善作用研究

澳洲坚果油（MO）富含单不多饱和脂肪酸,尤其是棕榈油酸,具有多种生物活性。本研究采用脂多糖（LPS）构建小鼠肠道损伤模型,研究澳洲坚果油脂对肠道损伤的改善作用及其机理。将小鼠随机分为4组：对照组（CON）、MO组（2.5 mL/（kg·d））、LPS组（5 mg/kg）、LPS+MO组,检测小鼠空肠组织病理变化、抗氧化指标、Toll样受体4/细胞核转录因子（TLR4/NF-κB）基因炎性因子、空肠组织病理学变化、细胞凋亡及炎症通路关键因子表达水平。结果表明：澳洲坚果油改善了LPS诱导的小鼠肠道病理形态;与LPS组相比,LPS+MO组显著增强了总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平（P<0.01）,降低了丙二醛（MDA）水平（P<0.01）;LPS+MO组TLR4和NF-κB mRNA转录水平以及NF-κB蛋白表达水平显著低于LPS组;MO显著抑制了LPS诱导的肠道促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-a）和白细胞介素-6（IL-6）表达水平（P<0.01）。因此,澳洲坚果油具有改善LPS诱导的小鼠急性肠道损伤作用,与提高肠道抗氧化水平和抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

陈皮中川陈皮素的提取分离及改性

以陈皮中川陈皮素的提取、分离纯化以及改性为目的,采用无水乙醇浸提陈皮得浸膏,以氯仿为萃取剂萃取浸膏,得到多甲氧基黄酮混合物,再以硅胶为吸附剂、乙酸乙酯和石油醚的混合液为洗脱剂,采用柱色谱法分离多甲氧基黄酮化合物,经高效液相色谱和气相色谱-质谱检测并与标准品对比,最终确证得到川陈皮素纯品。研究从川陈皮素到5-去甲基川陈皮素的合成路线,优化了改性条件,在浓盐酸与无水乙醇体积比为1∶9条件下,将川陈皮素加热回流反应24 h,可以得到纯度大于97%的5-去甲基川陈皮素。     

粉葛与葛根多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

该研究通过脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型,对粉葛粗多糖（FGC）、葛根粗多糖（GGC）以及粉葛均一多糖（FGJ）的抗炎作用进行比较。用CCK8试剂盒检测FGC、GGC以及FGJ对细胞活力的影响;相关试剂盒检测细胞产生NO、TNF-α、IL-6的分泌情况;蛋白印迹法检测NF-κB、Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达,QPCR检测TNF-α、IL-6的mRNA表达,通过流式检测活性氧的产生。结果显示,在浓度为10、20、40 μg/mL时,FGC、GGC以及FGJ对细胞均没有毒性（p>0.05）。各浓度的FGC、FGJ不能抑制LPS诱导产生的的NO、TNF-α、IL-6（p>0.05）,GGC在浓度为40 μg/mL时,对NO、TNF-α、IL-6的抑制率达到38.46%、52.90%、55.87%,可以抑制细胞内ROS释放,在10、20、40 μg/mL时抑制率达到37.28%、41.05%、54.09%,在浓度为40 μg/mL时,对iNOS、COX-2、p-p65、p-IκBα的抑制率达到29.27%、95.04%、27.18%、28.45%,对Nrf2、HO-1蛋白的表达有促进作用,在浓度40 μg/mL时显著地抑制IL-6与TNF-α的mRNA表达,抑制率达到57.70%、81.68%。结果证明,GGC与FGC、FGJ相比抗炎活性更加明显,并且其抗炎作用是通过NF-κB与Nrf2/HO-1两条通路来实现的。     

川陈皮素对高脂膳食诱导大鼠的降脂减肥及预防脂肪肝形成作用

目的：研究川陈皮素对高脂膳食诱导的大鼠体质量、血脂和肝脏的影响。方法：将56 只雄性SD大鼠随 机分为7 组,即正常组、高脂对照组、阳性对照组（奥利司他和力平之）和川陈皮素低、中、高剂量组（高脂 饲料＋0.02%、0.04%、0.08%川陈皮素）,对正常组饲喂普通饲料,其余各组分别饲喂相应的高脂饲料,连续喂养 6 周后,考察不同时期大鼠血清血脂水平变化,检测大鼠体质量、体内脂肪质量、脏器变化及肝脏组织形态变化。 结果：川陈皮素可以有效抑制高脂膳食大鼠的体质量增长,降低Lee’s指数、食物利用率和脂肪系数;降低血清中 总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平,其中降低TG作用显效较快,降低血清TC和LDL-C作用需要较长时间;同时可降低肝脏 指数、血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平,改善肝脏脂肪变性情况。结论：川陈皮素具有预防肥胖、辅助降血脂 及预防肝脏脂肪变性的作用。     

响应面优化双酶法提取川陈皮素工艺

以柑橘皮为原料,建立紫外分光光度测定方法,研究响应面优化双酶法提取川陈皮素的最佳工艺。利用紫外分光光度法测定柑橘皮中川陈皮素的含量,在单因素实验基础上,探究纤维素酶和果胶酶复配比例、复合酶添加量、水浴温度、酶解时间、乙醇体积分数、料液比对川陈皮素得率的影响,并设计响应面分析优化方法。结果表明影响川陈皮素得率的强弱顺序为:乙醇体积分数>水浴温度>酶解时间>料液比。响应面优化后最佳工艺条件为纤维素酶和果胶酶复配比例1.5∶1、复合酶添加量5%、乙醇体积分数70%、水浴温度61℃、酶解时间2 h、料液比1∶15,所得川陈皮素得率为265.1μg/g。与响应面预测值相比,相对误差为2.3%,说明优化后得到的提取参数准确可靠,是一种适合于柑橘皮中川陈皮素提取的快速、高效方法。      

茶多酚-川陈皮素-羧甲基纤维素钠复合涂膜剂对刺嫩芽的保鲜效果

利用茶多酚、川陈皮素和羧甲基纤维素钠(Sodium carboxymethyl cellulose,CMC-Na)进行复合涂膜的制备,以刺嫩芽为保鲜对象,以感官评价、失重率、硬度、叶绿素、V_C含量、多酚氧化酶活性和丙二醛含量为指标,多方面评定复合涂膜对刺嫩芽的保鲜效果,并分析了可能的保鲜机理。结果表明:复合涂膜组对刺嫩芽的保鲜效果明显优于对照组,同时也明显优于茶多酚涂膜组和川陈皮素涂膜组。复合涂膜剂可有效地抑制刺嫩芽菜体褐变,维持多酚氧化酶和丙二醛处于较低水平,保持菜体组织形态,保证较高的感官品质,延缓其V_C含量和水分的损失。贮藏12 d时,与对照组相比,复合涂膜处理的刺嫩芽V_C含量提高1.4倍,失重率减少31%,综合各保鲜指标分析,复合涂膜可以延长刺嫩芽4~5 d的贮藏时间。     

南极磷虾油对小鼠肠黏膜屏障的保护作用及机制

为探究南极磷虾油对脂多糖所致肠黏膜屏障损伤的预防作用及其机制,选取32只雄性小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组(脂多糖组)、南极磷虾油干预组和鱼油干预组.前两组灌胃橄榄油,后两组分别灌胃400 mg/kg(以体重计)以橄榄油为溶剂稀释的南极磷虾油或鱼油,每日1次.连续干预4周后,正常组小鼠经腹腔注射生理盐水,其余3组注射10 mg/kg(以体重计)脂多糖,6h后处死小鼠.苏木精-伊红染色后,观察小鼠小肠组织病理学变化;测定小鼠血清和小肠中二胺氧化酶活性,蛋白免疫印迹法分析紧密连接蛋白和诱导型一氧化氮合酶蛋白表达;检测髓过氧化物酶和一氧化氮含量,实时荧光定量PCR法检测促炎细胞因子mRNA表达;蛋白免疫印迹法分析TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平.实验结果显示,南极磷虾油预防性干预能显著抑制脂多糖所致小鼠小肠绒毛长度与隐窝深度比值的降低;下调血清二胺氧化酶水平,提高小肠二胺氧化酶活性,增加肠道紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1蛋白表达水平;抑制髓过氧化物酶活性、诱导性一氧化氮合酶蛋白表达和一氧化氮含量升高,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达以及TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平.研究结果表明,南极磷虾油可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路预防脂多糖所致肠黏膜屏障损伤,且其效果优于传统鱼油.     

草珊瑚多糖对经脂多糖刺激的RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用研究

为研究草珊瑚多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用,建立LPS刺激的RAW264.7细胞模型,通过MTT法测定,观察草珊瑚多糖对RAW264.7细胞增殖影响并评价细胞毒性。同时,对草珊瑚多糖抑制模型细胞炎症因子一氧化氮(NO)表达及吞噬活性进行研究。结果表明,草珊瑚多糖可显著抑制RAW264.7细胞增殖水平,其细胞毒性分级为1级或以下。同时,草珊瑚多糖可显著抑制模型细胞NO表达及巨噬细胞吞噬活性。此研究将为深入研究草珊瑚抗炎活性作用机制及草珊瑚资源开发提供理论依据。     

4 种迷迭香化合物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症的抑制作用

目的：研究4 种迷迭香化合物（鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚和迷迭香酸）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法：以LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型,通过比色法、实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot等方法表征迷迭香化合物对活性氧（reactive oxygen species,ROS）、炎症因子以及相关酶类的影响。结果：上述4 种迷迭香化合物对LPS诱导的细胞内ROS相对含量、丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）含量、NO释放量和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）、IL-6 mRNA相对表达量,以及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和环氧合酶2（cyclooxygenase 2,COX-2）蛋白相对表达量的升高有显著抑制作用,对超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）活力有显著保护作用,且具有浓度依赖效应。质量浓度10 μg/mL的鼠尾草酸对LPS诱导的ROS相对含量、NO释放量、TNF-α mRNA相对表达量、MDA含量升高的抑制作用和对SOD和CAT活力的保护作用更好,质量浓度10 μg/mL的迷迭香酚对LPS诱导的IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量、iNOS和COX-2蛋白相对表达量升高的抑制作用更好。结论：4 种迷迭香化合物均具有一定的抗氧化和抗炎作用,能缓解炎症反应,其中水溶性迷迭香酸有效质量浓度高于其他3 种。     

Anti-inflammatory and anti-genotoxic activity of branched chain amino acids (BCAA) in lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 macrophages

Food Science and Biotechnology - The purpose of this study was to evaluate the anti-inflammatory and anti-genotoxic activity of branched-chain amino acids (BCAAs) in lipopolysaccharide (LPS)...     

卵黄高磷蛋白的纯化及其对RAW264.7生长形态的影响

阴离子交换层析纯化卵黄高磷蛋白,最佳条件为以NaAc/HAc缓冲液(20 mmol/L、pH 5.0并含0.3 mol/L NaCl)平衡,0.3 mol/L～0.6 mol/L NaCl缓冲液分步洗脱;产品纯度(以N/P比计)为2.78,回收率57.6％,蛋白质含量85.66％.经PVS刺激的RAW264.7细胞在考察剂量范围内不会向炎症巨噬细胞的形态转变.     

毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的研究

目的：明确毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的调节作用。方法：分别以质量浓度25、50、100、200、400μg/mL的毛蕊花糖对RAW264.7巨噬细胞进行培养,以10μg/mL的脂多糖(LPS)为阳性对照组、不加任何样品的培养基为空白对照组。通过噻唑蓝(MTT)实验、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附法测定细胞因子(IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-γ)的分泌量,评价毛蕊花糖的免疫调节作用。结果：质量浓度为25～400μg/mL的毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7作用24h后,可显著提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且毛蕊花糖溶液质量浓度为200μg/mL时效果最好。结论：毛蕊花糖对小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节活性,是一种良好的免疫增强剂。     

牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的：研究牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导损伤的RAW264.7巨噬细胞的保护作用。方法：实验分为空白组、H2O2损伤组、VC对照组和牡丹花蕊黄酮低、中、高剂量组。应用H2O2建立RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,噻唑蓝法测定细胞存活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中谷胱甘肽和丙二醛含量及过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果：牡丹花蕊黄酮的质量浓度在10～30 μg/mL范围内时,可显著促进RAW264.7巨噬细胞的增殖（P＜0.05）。与H2O2损伤组相比,牡丹花蕊黄酮各剂量组能够提高细胞及细胞培养液中总抗氧化能力,谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物酶、过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽含量,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高细胞内乳酸脱氢酶的水平。结论：牡丹花蕊黄酮可以促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,提高H2O2损伤的RAW264.7巨噬细胞的抗氧化能力,且存在剂量依赖效应。     

鸡蛋中卵黄高磷蛋白对RAW264.7细胞生长及分化的影响

研究了从鸡蛋黄中提取的黄高磷蛋白(PV)(0,50,100,200μg/mL和500μg/mL)对RAW264.7细胞增殖、周期、凋亡的影响,结果发现低浓度PV对RAW264.7细胞有促进增殖和抑制凋亡的作用,当PV质量浓度100μg/mL时效果最好。采用CCK-8法表征增殖活力,结果发现PV质量浓度为100μg/mL时增殖活力高出对照组64%～76%。分析PV作用24 h和48 h后对细胞周期的影响,不同浓度的PV对细胞增殖均有促进作用,与对照组相比低质量浓度PV(50,100、200μg/mL)处理细胞后S期细胞的百分比含量、增殖指数PI值大。凋亡结果表明,50,100,200μg/mL PV组凋亡率显著低于空白对照组,500μg/mL时凋亡率高于空白组。另外,在抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色细胞分化形态学及TRAP活性方面,不同浓度的PV均可显著减少破骨细胞数量,降低TRAP活性(P0.05),且呈浓度依赖性。其中,200μg/mL为最佳抑制质量浓度。PV并非通过抑制RAW264.7细胞生长而是通过显著降低TRAP的活性来抑制RAW264.7细胞分化成为破骨细胞。     

Anti-inflammatory activity of methanolic extracts from edible mushrooms in LPS activated RAW 264.7 macrophages

Nowadays there is a great interest in the use of edible mushrooms as functional food since they are rich in bioactive compounds. Although their immunomostimulant activity has been largely demonstrated, their potential anti-inflammatory activity has been scarcely explored. We have investigated the anti-inflammatory activity of methanolic extracts from different edible mushrooms species: Agaricus bisporus, Boletus edulis, Cantherellus cibarius, Cratarellus cornucopioides, Lactarius deliciosus and Pleurotus ostreatus, in activated macrophages. The species that exhibited higher anti-inflammatory activities were A. bisporus, C. cibarius and L. deliciosus, inducing inhibition of NO production and iNOS, IL-1β and IL6 mRNAs expression in response to LPS stimulation. C. cornucopioides only induced inhibition of NO production and iNOS expression, and the other species did not present anti-inflammatory effects. Therefore, some edible mushrooms species have a potential anti-inflammatory capacity in vitro, suggesting that they could be regarded as a potential source of natural anti-inflammatory agents.     

北五味子多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

北五味子是我国传统中药材,近年来因其具有的护肝、安神等多种功效而得到了广泛地关注和研究。本实验提取北五味子多糖并超滤处理获得不同分子质量的多糖组分Sp1(100 ku)和Sp2(10~100 ku),分别按不同质量浓度对小鼠巨噬细胞系RAW264.7孵育处理,通过检测细胞增殖活性、吞噬能力、NO分泌水平及培养基中细胞因子(细胞白介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α))的含量,并与脂多糖实验组进行对比,评价北五味子多糖在免疫调节方面的作用。结果显示,较低分子质量的Sp2组分活性较强,在500.00μg/m L以上时,可以对小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力、NO分泌水平、IL-1β和TNF-α含量有普遍的促进作用,显现出良好的免疫提高潜力,而较高分子质量的Sp1组分活性较弱。