己酸菌工业扩大培养条件的优化

从优质老窖泥中分离得到的一个高产复合己酸菌系,可用于人工窖泥培养及窖池维护。优化培养条件以获得最大己酸菌芽孢产量,在单因素实验的基础上,采用正交设计方法,确定工业扩大培养条件。研究表明：该菌繁殖的最适条件是：生长初始pH7.0、接种量10%、培养温度35℃、乙醇2.0%、NaAc1.0%、NH4Cl0.05%、CaCO30.8%,培养周期7d,在此培养条件下芽孢数可达4.01亿个/mL水平。     

蛹虫草培养条件的优化

以接种量、培养温度、料水比、培养时间为试验因素研究蛹虫草的适宜培养条件,通过正交试验确定其最佳培养条件为:接种量30mL/瓶,培养温度25℃,料水比1∶1,培养时间40d。     

枯草芽孢杆菌产淀粉酶培养条件的优化研究

通过单因素试验,评价了不同温度、pH、时间、碳源浓度、氮源浓度和摇床转速等6个因素对菌株产淀粉酶含量的影响。结果表明蛋白胨浓度、玉米粉浓度、pH和温度等因素对菌株产酶影响较大,其最佳组合为pH6.5、玉米粉浓度0.5%、蛋白胨浓度为0.5%、培养温度为37℃、培养时间为30h,在此条件下菌株产酶浓度为3.36U/ml,产淀粉酶菌株的培养条件得到了优化。     

螺旋藻培养条件研究

对影响螺旋藻生长的ｐＨ值、营养物质、微量元素及稀土元素等因素进行研究。在最适ｐＨ值范围和优化配方的碳、氮源浓度及比例以及微量元素与稀土元素含量的条件下,获得了比较理想的培养结果。     

乳酸菌高密度培养条件优化研究

该试验通过单因素试验和响应面试验探究了乳酸菌高密度培养过程中碳酸钠缓冲盐添加时间、培养pH值、营养因子添加量以及后发酵时间对菌落总数的影响。结果表明,乳酸菌高密度培养的最优条件为接种量3%,培养温度42 ℃,培养2 h时添加15%碳酸钠缓冲盐,将pH调为6.5,同时添加与原发酵培养基等体积的营养因子（乳清∶番茄汁∶胡萝卜汁∶牛奶=4∶6∶6∶5）后再培养4 h。在此优化条件下,培养液的活菌数较高,为5.68×1011 CFU/mL。     

低温乳酸菌混菌培养条件的优化

以低温乳酸菌乳酸乳球菌和干酪乳杆菌为研究对象,采用单因素实验、Box-Behnken实验设计对低温乳酸菌混菌培养条件进行优化.结果表明:培养温度、初始pH、接种量对低温乳酸菌活菌数影响均显著(,＜0.01),最优条件为:培养温度24.32℃、初始pH6.60、接种量3.20％,在此条件下活菌数的预测极大值为10.32lgCFU/mL,验证实验的活菌数为(10.25±0.02)lgCFU/mL,与理论预测值相比相对误差约为0.99％.     

雅致放射毛霉液体深层培养条件及发酵培养基的优化研究

文中研究了在摇瓶液体培养条件下,不同培养基成分及发酵条件对雅致放射毛霉菌丝体生长的影响,并经正交实验得到其民的培养基组成为：黄豆粉3％,饴糖0．5％,硫酸镁0．2％,磷酸二氢钾0．2％,酵母膏0．1％,在此条件下,28℃,200r/min摇瓶培养64h,毛霉菌丝体生物量（以菌丝体干重表示）可达1.02g/100mL.     

低温乳酸菌混菌培养条件的优化

以低温乳酸菌乳酸乳球菌和干酪乳杆菌为研究对象,采用单因素实验、Box-Behnken实验设计对低温乳酸菌混菌培养条件进行优化。结果表明:培养温度、初始pH、接种量对低温乳酸菌活菌数影响均显著（p<0.01）,最优条件为:培养温度24.32℃、初始pH6.60、接种量3.20%,在此条件下活菌数的预测极大值为10.32lgCFU/mL,验证实验的活菌数为（10.25±0.02）lgCFU/mL,与理论预测值相比相对误差约为0.99%。      

类胡萝卜素产生菌海洋红酵母培养条件优化研究

本文研究了培养条件对海洋红酵母生长的影响。结果表明：海洋红酵母生长和色素产生不需要光照,能以铵盐为主要氨源。适宜其生长的条件为：温度22－28℃,pH4.0-5.0,糖浓度35g/L,氯化钠浓度20－30g/L,种量≥7．5％。这也为反应器培养打下了基础。     

解磷菌株JN-31液体培养条件的优化

在以往工作中筛选得到的一株解磷菌株JN-31,对其进行了最佳液体培养条件的优化研究。研究发现:最佳碳源为葡萄糖25g/L,最佳氮源为豆饼粉7g/L,培养基初始pH值为7.5,进行摇瓶培养时装液量为125mL/500mL,菌体浓度可达到2.9×1010cfu/mL。     

低温环境对球等鞭金藻3011抗氧化系统和二十二碳六烯酸产量的影响

以球等鞭金藻（Isochrysis galbana）3011为对象,通过研究降低培养温度后其超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）、过氧化物酶（peroxidase,POD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）活性以及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde,MDA）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）含量的变化,以阐明低温环境对球等鞭金藻细胞抗氧化系统和DHA含量的影响。用流式细胞术结合荧光染色法测定低温环境对球等鞭金藻细胞内ROS水平的影响;并采用气相色谱法检测球等鞭金藻细胞内DHA含量。结果表明：在21、18、15 ℃低温环境处理下,球等鞭金藻细胞SOD、CAT和POD活性均随培养时间延长而呈现先升高后降低的趋势;温度越低,峰值出现越早,且峰值越大,峰后酶活性下降越快;GSH含量的变化趋势与上述酶活性的变化相似,MDA含量则持续增加;ROS水平随着温度的降低而呈现出较为复杂的变化,15 ℃和18 ℃诱导16 h出现ROS水平爆发,20 h时达到峰值,分别为（14.11±0.11）%和（14.74±0.58）%（P＜0.05）;经18 ℃低温诱导24 h后,球等鞭金藻细胞内DHA含量为0.105 mg/g,比对照组高0.06 mg/g。因此,低温环境可以作为提高代谢物产量的诱导子,使球等鞭金藻细胞产生主动防御反应,引起清除活性氧相关的酶活性的升高,同时也提高了DHA产量。     

Zn2+对球等鞭金藻3011细胞膜电位和膜通透性的影响

目的:用亲脂性阴离子荧光染料双(1,3-二巴比妥酸)-三次甲基氧烯洛尔和碘化丙啶标记球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana 3011),研究Isochrysis galbana 3011受Zn2+作用时膜电位和膜通透性的变化。方法:对处理藻液进行流式细胞技术检测和荧光显微镜镜检,通过对比实验设计,实验数据使用SPSS17.0统计软件进行方差分析。结果:5μg/L Zn2+作用4min可使Isochrysis galbana 3011细胞内荧光强度明显增强,并促使膜的通透性发生剧烈变化,与对照组比较具有统计学意义。结论:找到一种快速动态测定Isochrysis galbana 3011细胞膜状态的方法,发现5μg/L的Zn2+能引起Isochrysis galbana 3011细胞膜的部分去极化,并改变膜的通透性,Zn2+的吸收有可能与钠通道联动有关。     

低温诱导球等鞭金藻3011脂肪酸去饱和酶基因片段的筛选及mRNA表达分析

本实验通过设计特异引物序列,对经低温诱导处理的球等鞭金藻3011的脂肪酸去饱和酶基因片段进行筛选,以实时荧光定量聚合酶链式反应检测酶的表达量,探索低温对该多不饱和脂肪酸脱饱和酶基因表达量的影响。结果表明：用prime5设计包括内参基因在内的14 条引物,其中7 条引物具有特异性扩增,根据扩增效果对其扩增体系进行优化。结果表明：Des4、Des5、Des6、Des8、Des9和Des12 mRNA相对最大表达量分别为7.71、11.33、42.58、22.02、73.91和16.01。随温度的降低均呈现先增加后降低的趋势。根据SPSS 19.0统计分析,6 个基因在其mRNA相对表达量最大的诱导时间时,18 ℃的mRNA相对表达量与其在12、15、21 ℃ 3 个温度条件下的相对表达量相比具有极显著差异（P＜0.01）。18 ℃条件下诱导24 h可以有效增加Des9基因在球等鞭金藻3011中的表达。此研究结果为人为调控微藻的多不饱和脂肪酸含量提供了一条可行的方法。     

营养盐对球等鞭金藻生长及多糖等生化成分含量的影响

通过研究营养盐浓度对球等鞭金藻生长及其细胞生化成分含量的影响，探讨了球等鞭金藻细胞生长与其细胞内多糖、叶绿素、蛋白质营养成分的关系。结果表明，所选用的4种营养盐在一定的浓度范围内均对球等鞭金藻的生长和细胞生化成分有很大的影响，这4种营养盐的适宜浓度依次为NaNO_3-N10mg／L、FeCl_3-Fe0.10mg／L、KH_2PO_4-P0.6mg／L、Na_2SiO_3-Si0.3mg／L。     

球等鞭金藻多糖的微波萃取工艺

采用微波法,通过单因素试验研究pH值、微波功率、萃取温度和萃取时间对球等鞭金藻多糖提取的影响。在此基础上,通过正交试验进一步优化多糖的微波提取工艺。最后,比较微波提取法和热水浸提法制备的球等鞭金藻多糖样品的红外光谱,并测定样品中蛋白质和多糖含量。单因素试验结果表明,pH值、微波功率、萃取温度和萃取时间均能显著影响球等鞭金藻多糖的提取。正交试验结果表明,微波法提取球等鞭金藻多糖的最佳工艺为pH9、微波功率600W、萃取温度90℃、萃取时间20min。微波提取法和热水浸提法制备的多糖产率分别为96.8mg/g和47.7mg/g。其中,前者蛋白质和多糖含量分别为1.08%和43.6%,后者中蛋白质和多糖含量依次为1.18%和22.1%。微波法与热水浸提法制备的多糖具有相似的红外光谱,表明微波提取法并不会破坏多糖结构。综上所述,在球等鞭金藻多糖提取过程中,微波法明显优于热水浸提法。     

球等鞭金藻胞内和胞外多糖的提取工艺

采用热水浸提法,通过一系列单因素试验,研究提取时间、提取pH 值、提取温度和液料比对球等鞭金藻胞内和胞外多糖提取的影响。在此基础上,通过正交试验进一步优化胞内和胞外多糖的提取工艺。最后,采用适宜提取工艺制备胞内和胞外粗多糖样品,并测定该样品中蛋白质和多糖含量。单因素试验结果表明,提取时间、提取pH 值和提取温度均能显著影响胞内和胞外多糖的提取。对胞内粗多糖提取率而言,提取时间180min、提取pH9 和提取温度70℃为最适宜的提取条件;当提取时间300min、提取pH10 和提取温度80℃时,更利于胞外粗多糖的提取。液料比对胞内和胞外粗多糖提取的影响较小,20:1(mL/g)为多糖提取合适的液料比;正交试验结果表明,胞内(胞外)多糖的适宜提取工艺为提取时间、提取pH 值、提取温度和液料比分别为180min(240min)、pH8(9)、70℃和15:1。粗多糖样品的蛋白质和多糖含量分别为1.18%(0.82%)和 22.1%(18.6%),很低的蛋白质含量和较高的多糖含量表明采用该提取工艺获得的粗多糖样品纯度较高,利于样品的后续分离纯化。     

氮源对等鞭金藻生长和脂肪酸组成的影响

研究了在培养基中添加不同浓度的NaNO3、NH4 Cl、NH2 CONH2 对等鞭金藻生长和脂肪酸组成的影响。结果表明 ,当不在培养基中添加氮源时 ,等鞭金藻生长缓慢。但C16∶0 ,C18∶0 和多不饱和脂肪酸 (PUFAs)占总脂肪酸的比例最高。氮浓度在 0 9～ 7 0mmol/L之间 ,等鞭金藻的生长随着NH4 Cl浓度的增加而下降 ,随着NH2 CONH2 浓度的增加而升高 ,而受NaNO3浓度变化的影响不显著。以NaNO3或NH2 CONH2 为氮源 ,DHA占总脂肪酸的比例随着其浓度的增加先上升后下降 ,最适浓度为 3 5mmol/L。以NH4 Cl或NH2 CONH2 为氮源 ,PUFAs占总脂肪酸的比例随着氮浓度的增加而下降 ,且等鞭金藻DHA占干重的比例在 1 8mmol/L的浓度时达到最高 ,分别为1 8%和 1 6% ;以NO- 3为氮源 ,在浓度为 3 5mmol/L时DHA含量最高 ,为 2 2 %。在相同氮浓度下 ,DHA占干重的比例以NaNO3为氮源最高 ,以NH2 CONH2 为氮源时最低。     

球等鞭金藻胞内和胞外多糖的分离纯化及其抑菌活性

采用分级沉淀、Sephadex G-75凝胶柱层析和DEAE-52离子交换柱层析对球等鞭金藻胞内粗多糖(IPS)进行分离;对胞外粗多糖(IEPS)则进行Sephadex G-100凝胶柱层析分离。在此基础上,分析所获多糖组分对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和变形杆菌等细菌的抑菌活性。同时,通过紫外光谱和红外光谱测定,比较IPS和IEPS结构的异同。结果表明：IPS和IEPS均具有抑菌活性,前者抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长,后者抑制大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的生长;IPS经DEAE-52纤维素柱层析分离,获得2个多糖组分：IPSⅠ和IPSⅡ。IEPS经Sephadex G-100凝胶柱层析分离,获得3个多糖组分：IEPSA、IEPSB和IEPSC。活性检测表明,IPSⅠ和IPSⅡ抑制枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长;IEPSA、IEPSB和IEPSC抑制大肠杆菌的生长;紫外光谱表明,IPS和IEPS均不含核酸、游离或裸露的蛋白质和色素;IPS和IEPS的红外光谱比较相似,以半乳糖为构架,均含有酰氨取代基,但不同之处在于,后者不含硫酸取代基。     

L-丙氨酸转化菌发酵条件的优化

产L-天冬氨酸-β-脱羧酶(L-aspartate-β-decarboxylase,Asd)菌株以L-天冬氨酸(L-aspartic acid,L-Asp)为底物转化生产L-丙氨酸,通过单因素及正交设计试验对睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D培养基组成及发酵条件进行优化.结果表明,最佳培养基组成:富马酸1.0％、L-Asp ...