利用基因敲除技术调节酵母代谢产SO2含量的研究

二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能，亚硫酸盐还原酶（METIO编码）在啤酒酵母硫代谢过程中起重要作用。本文利用同源重组技术，采用醋酸锂转化法，将一段目的基因转入到酵母体内，从而获得一株亚硫酸盐还原酶基因突变的工业酿酒酵母。突变株通过驯养，对比发酵栓试验，结果表明在发酵结束时，突变菌株的SO2产量是出发菌株的1．5倍。     

利用同源重组技术调节啤酒中SO2含量研究

二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能,亚硫酸盐还原酶(MET10编码)在啤酒酵母硫代谢过程中起重要作用。利用同源重组技术,采用醋酸锂转化法,将一段目的基因转入到酵母体内,从而获得一株亚硫酸盐还原酶基因突变的工业酿酒酵母。突变株通过驯养,对比发酵栓试验,结果表明在发酵结束时,突变菌株的SO2产量是出发菌株的1.5倍。     

高产SO_2啤酒酵母菌株抗氧化性能的研究

对高产SO_2啤酒酵母突变株M8在发酵不同时期的SO_2和H_2S生成量,以及抗氧化性能进行了研究。啤酒发酵实验结果表明,突变株M8各代菌株的SO_2生成量在发酵第5d达到最高峰(平均22.17 mg/L);突变株M-20的累计H_2S生成量比原株下降了62.5%。0℃贮酒7d,突变株M-20发酵的啤酒的SO_2生成量比原株S -5提高了13.1%,DPPH自由基清除率提高了12.4%,TBA值降低了4.6%,啤酒的风味稳定性有所改善。     

谈 SO_2在啤酒中的作用与变化

SO_2 存在于所有的啤酒中。它由酵母产生,有时也在酿造过程中或直接在成品酒中添加。本文主要探讨了 SO_2 在掩饰啤酒不良风味和保护啤酒免受氧化及微生物损坏中所起的作用。     

丝状真菌基因敲除技术研究进展

丝状真菌在自然界分布广泛，与人类的生产、生活密切相关。近年来，对于其基因功能的研究取得了较大的进展，一系列转化和基因操作技术已在不同的丝状真菌中得到运用。许多对于工业、农业和医药卫生具有重要意义的丝状真菌已经完成或正在进行全基因组序列测定。作者简述了丝状真菌基因敲除的历史，重点介绍了近年来基因敲除技术在丝状真菌研究中的进展，并对冀在丝状真菌基因功能研究、工业菌株改良等方面进行了展望。     

乳酸菌基因敲除技术的研究进展

乳酸菌是革兰氏阳性菌,广泛用于食品、医药、轻工业及饲料工业等行业。对乳酸菌进行遗传操作是调节、优化其代谢途径的基础。通过基因敲除技术改造乳酸菌基因组,可以判断基因组中未知基因所编码产物的功能,有目的、有选择地使乳酸菌生产有益的异源基因产物。基因敲除技术已成为当前乳酸菌分子生物学研究的热点。文中对几种乳酸菌基因敲除策略研究进展及影响敲除效率的因素进行了综述,分析存在的问题并初步探讨展望了乳酸菌敲除技术的未来发展趋势。     

几种酒类酿造酵母产酒精以外的糖消耗的研究

以葡萄酒1#酵母、葡萄酒6#生产酵母和啤酒酵母为研究对象,采用3,5-二硝基水杨酸光度法和比重瓶法分别测还原糖和酒精,对酒精以外的糖消耗进行研究.结果表明,酒类生产酵母在酒精发酵进入减速阶段初时达到峰值,对于控制压榨酒的风味具有指导意义.     

通过SO_2和反-2-壬烯醛间的作用来提高碑酒风味稳定性

本文论述了啤酒中老化风味醛的形成过程,以及 SO_2在消除啤酒老化风味醛,提高啤酒风味稳定性方面的机理。SO_2对啤酒风味稳定性的影响主要是通过抗氧化作用和反=2=壬烯醛的结合,也可能和其它老化风味醛结合。啤酒在货架寿命期间只要总 SO_2超过2mg/L,啤酒风味不会受到 SO_2的保护作用。这样一般要求啤酒的起始 SO_2含量在5-15mg/L,才能确保在货架寿命期间 SO_2的含量超过2mg/L。但是也应注意 SO_2的含量不宜太高,含量过高,对人和酒的口感均不利。美国限制啤酒中 SO_2含量不得超过10mg/L,世界卫生组织也不允许过高的 SO_2含量,所以包装前 SO_2,含量宜控制在5～9mg/L。如果啤酒本身 SO_2含量不足,可在装酒前外加SO_2,补充之,但要通过酒的分析而后确定添加量。     

啤酒酵母敲除fksl基因对啤酒风味稳定性的影晌

以啤酒酵母工业菌株G-03为模板,扩增得到铜抗性基因cup1和β-葡聚糖合成酶基因fks1。fks1连接pMD-18T Vector得到重组质粒pTK,重组质粒pTK和cup1经BglⅡ、SalⅠ酶切后连接得到重组质粒pKC。以pKC为模板,PCR得到以fks1为整合位点包含cup1的基因片段fks1::cup1。片段转化啤酒酵母工业菌株G-03,通过硫酸铜抗性筛选得到一株啤酒酵母工程菌G-03/C。工程菌的生长速率、死灭温度和絮凝性发生改变。连续发酵3代工程菌常规发酵指标与原菌无较大差异,老化指标TBA降低65.6%,SI系数和RSV分别提高192.7%、26.6%。      

啤酒酵母敲除fks1基因对啤酒风味稳定性的影响

以啤酒酵母工业菌株G-03为模板,扩增得到铜抗性基因cupl和β-葡聚糖合成酶基因fks1.fks1连接pMD-18T Vector得到重组质粒pTK,重组质粒pTK和cupl经BglⅡ、SalⅠ酶切后连接得到重组质粒pKC.以pKC为模板,PCR得到以fks1为整合位点包含cup1的基因片段fks1::cup1.片段转化啤酒酵母工业菌株G-03,通过硫酸铜抗性筛选得到一株啤酒酵母工程菌G-03/C.工程菌的生长速率、死灭温度和絮凝性发生改变.连续发酵3代工程菌常规发酵指标与原菌无较大差异,老化指标TBA降低65.6%,SI系数和RSV分别提高192.7%、26.6%.     

葡萄采后贮运中SO_2伤害的研究进展

葡萄的贮藏保鲜对我国葡萄产业的发展至关重要。文中从葡萄贮藏保鲜中SO_2的应用、葡萄对SO-2的吸收及代谢、发生SO_2伤害后表观及生理变化、影响葡萄SO_2伤害的因素及减小SO_2伤害的技术研究等几方面对葡萄采后贮运中SO_2伤害的研究进行了分析和讨论,为葡萄的贮藏保鲜研究与应用提供借鉴。     

基因敲除技术及其在微生物育种中的应用

基因敲除是自20世纪80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是研究基因功能的直接手段,而且在微生物育种方面发挥了巨大的作用。论述了基因敲除的基本原理、几种常用技术及该项技术在微生物育种方面的应用。分析存在的问题并展望了相关技术诸多领域的发展趋势。     

蛋氨酸、半胱氨酸及苏氨酸对啤酒酵母产二氧化硫和乙醛的影响

为探究啤酒酵母中SO_2和乙醛产量的影响因素,以遗传背景相似但SO_2与乙醛产量差别较大的菌株D-A-14和M14为对象,研究在发酵过程中外添加与硫代谢相关的3种氨基酸(蛋氨酸、半胱氨酸和苏氨酸)对菌株产SO_2及乙醛的影响。结果表明,蛋氨酸能明显降低菌株M14总SO_2和乙醛产量,而半胱氨酸对两者产量影响均较小;同时200 mg/L苏氨酸显著增加2种菌株的总SO_2产量,增加水平均达40%以上,有效增强发酵液中抗氧化能力。Pearson相关性分析表明,两者产量的变化存在着正相关性(r=0. 502)。研究3种氨基酸对啤酒酵母产SO_2以及乙醛的调整水平,可为解决啤酒老化问题提供理论基础和解决方案。     

利用蛋白酶发酵液替代SO_2改进玉米淀粉生产浸泡工艺研究

在确定了地衣芽孢杆菌蛋白酶摇瓶发酵工艺各项参数的基础上,采用改良的实验室生产淀粉方法,将处于产蛋白酶活性高峰期的发酵液添加到玉米浸泡水中,探讨了利用蛋白酶发酵液替代SO_2降解包裹玉米淀粉蛋白质的可行性和工艺条件。结果表明,当玉米在含有0.1%的SO_2(和0.5%的乳酸)的浸泡液中浸泡18h后,加入20%的蛋白酶发酵液继续浸泡6h,淀粉得率为67.79%。与传统工艺相比,淀粉得率提高了9.5%,SO_2含量降低了0.1%,总的玉米浸泡时间由36h缩短至24h。     

黄酒酵母ADH2、ALD2和ALD6基因敲除对黄酒中乙醛代谢的影响

以工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体2a-u3(MATa ura3)为出发菌株,研究分别敲除乙醛代谢相关酶的编码基因ADH2、ALD2和ALD6对乙醛代谢的影响。采用融合PCR技术分别构建乙醇脱氢酶编码基因ADH2敲除组件"ADH2S-URA3-ADH2X"和乙醛脱氢酶编码基因ALD2和ALD6敲除组件"ALD2S-URA3-ALD2X"和"ALD6S-URA3-ALD6X",转化N85尿嘧啶缺陷型单倍体菌株后,以尿嘧啶缺陷型的恢复为筛选标记,分别获得ADH2、ALD2和ALD6基因缺失菌株2a-A2(Δadh2)、2a-D2(Δald2)和2a-D6(Δald6)。分别将获得的工程菌与亲本菌株以及前期构建的丙酮酸脱羧酶基因PDC5缺失菌株2a-P5(Δpdc5)进行实验室规模的黄酒发酵实验。结果表明,与亲本菌株2a相比,工程菌2a-A2发酵液中乙醛含量降低了7.14%,而2a-P5发酵液中乙醛含量降低了32.68%,说明工业黄酒酵母乙醛的生成存在糖代谢途径,并且乙醛主要由丙酮酸脱羧而来;工程菌2a-D2和2a-D6发酵液中乙醛含量与亲本相比分别增加了144.91%和88.87%,说明乙醛脱氢酶是黄酒中控制乙醛降解的关键酶,而且ALD2基因在乙醛转化为乙酸过程中发挥更关键的作用。     

长双歧杆菌C16 bif黏附基因敲除菌株的构建

长双歧杆菌是定植于人体肠道中的优势菌株,与人体肠道健康密切相关.黏附是长双歧杆菌定植于肠道的前提,研究长双歧杆菌的黏附机制尤为重要.bif黏附基因作为长双歧杆菌的一类胞外黏附因子,其敲除后黏附效力是否丧失尚未明确.本试验利用同源重组技术,以长双歧杆菌为研究对象,构建bif黏附基因敲除突变株,验证该基因的黏附作用.首先以...     

芽胞杆菌基因敲除技术及其在工农业应用中的研究进展

芽胞杆菌具较强的环境适应能力、抗逆性、分泌能力等优良性状,在工农业生产上具有广阔的应用前景。基因敲除技术是遗传改造芽胞杆菌的重要手段。然而,对于工农业生产中具有许多重要应用价值的芽胞杆菌,目前仍缺乏有效的基因敲除技术。近年来,研究人员在开发适用范围较广泛的芽胞杆菌基因敲除技术方面取得了较显著的进展。该文在简要介绍基因敲除原理的基础上,重点阐述了可在不同芽胞杆菌中操作的基因敲除技术的研究进展,归纳和总结这些方法的局限性,为选择不同基因敲除方法开展芽胞杆菌工农业菌株遗传育种工作提供建议。最后,笔者结合自身的研究工作,展望开发新一代芽胞杆菌基因敲除技术的发展趋势。     

啤酒发酵过程中酵母代谢形成SO_2的机理及变化规律的研究

对啤酒发酵过程中酵母代谢形成SO2的机理进行了探讨,并对发酵过程中SO2的变化进行了跟踪检测。研究结果表明,发酵过程中生成的SO2主要来源于酵母合成蛋氨酸时吸收还原麦汁中的硫酸根。酵母代谢形成SO2受到各种氨基酸的调节,尤其是蛋氨酸。发酵过程中SO2的含量呈先增加后缓慢降低最后维持稳定的趋势。     

基于PCR方法敲除黄酒酵母精氨酸酶基因的工程菌构建

用一种高效快速的免克隆方法-长侧翼同源PCR（LFH-PCR）,构建基因敲除组件,然后通过化学转化方法把敲除组件转入黄酒酵母细胞中,利用同源重组机制精确敲除精氨酸酶基因（CAR1）,构建了黄酒酵母工程菌株。结果表明,敲除CAR1基因的工程菌与出发菌株相比,酒液中尿素的含量降低了72%,氨基甲酸乙酯含量降低了38%,并且该菌株的遗传稳定性好,发酵性能与出发菌株基本一致。      

利用啤酒废酵母制备高核酸酵母抽提物的应用研究

文章是专门针对目前国内外市场上对富含I+G的抽提物的需求越来越大而专门研制的高核酸型啤酒酵母抽提物。采用分步酶解啤酒酵母制取高核酸酵母抽提物,得出了较优的酶解工艺条件。抽提酶酶解最适条件:酵母底物浓度10%,0.04%酵母悬浮液量的外加抽提酶量,22h的酶解时间,55℃酶解,pH值为6.5。核酸酶酶解最适条件:酵母底物浓度10%,0.02%酵母悬浮液量的外加核酸酶量,6h的酶解时间,70℃酶解,pH值为5.0。最后,酵母抽提物的呈味核苷酸(I+G)含量由原来的3%～4%提高到10%～12%。