抗急非淋M_2和M_5型白血病单抗对骨髓粒-单核细胞集落形成(CFU-GM)的影响

为了使单抗用于骨髓净化和导向药物的研究,应用分泌抗急非淋M_2和M_5型单抗1D_1和1A_1,观察对正常骨髓粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。结果实验组与对照组比较无显著性差异,说明单抗对CFU-GM没有影响,不损伤正常骨髓造血干细胞,为M_2和M_5型单抗用于骨髓净化和导向药物的研究提供实验依据。     

急非淋M_2型白血病单克隆抗体与高三尖杉酯碱偶合物的制备及体外对白血病细胞的杀伤作用

用羟基磷灰石、DEAE－Sephacel和SephacrylS－300纯化了抗急非淋M2型白血病MCAb1D1，纯度为99．9％。用直接交联方法将McAb1D1与HHT仍联，克分子比1：40。该偶合物保持了抗体和药物活性，对急非淋M2型白血病靶细胞有选择性杀伤作用，而对急非淋M1型白血病细胞和Hela细胞无明显杀伤作用。     

急非淋M2型白血病单克隆抗体与高三尖杉酯碱偶合物的制备…

用羟基磷灰石，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－３００纯化了抗急非淋Ｍ２型白血病ＭｃＡｂ１Ｄ１，纯度为９９．９％，用直接交联方法将ＭｃＡｂ１Ｄ１与ＨＨＴ偶联，克分子比１：４０。该偶合物保持了抗体和药物活性，对急非淋Ｍ２型白血病靶细胞有选择性杀伤作用，而对急非淋Ｍ１型白血病细胞的Ｈｅｌａ细胞无明显杀伤作用。     

流行性出血热病毒L99株(家鼠型)与国内外其它毒株抗原性的比较

流行性出血热家鼠型（Ⅱ型）病毒L99株分别在小白鼠脑腔和金黄地鼠肾细胞传代适应，再初步纯化，所选出的毒株具有广谱抗原性和较高的毒力滴度。应用鼠脑或细胞毒种感染金黄地鼠肾细胞制成灭活疫苗免疫动物，检测血清中和抗体反应及对野鼠型（Ⅰ型）和家鼠型（Ⅱ型）强毒攻击的保护力，均证明L99疫苗有双向的免疫效果。L99活毒免疫动物血清与不同来源的Ⅰ、Ⅱ型病毒交叉中和反应亦证明L99株对两型病毒有明显的交叉反应，表明L99株病毒对两型病毒具有双向抗原性。     

分泌抗HBsAg-抗HRP双特异单克隆抗体杂交-杂交瘤的建株

用分泌抗-HBs Ag单克隆抗体的杂交瘤细胞的8-氮杂鸟嘌呤(8-AG)耐受株作为亲本细胞,与辣根过氧化物酶(HRP)免疫的BALB/c小鼠脾细胞进行第2次融合,从382个克隆上清中筛选出一株分泌抗-HBs Ag-抗-HRP双特异抗体的阳性孔。经多次克隆纯化建立3株杂交-杂交瘤,命名为Bs33、Bs38和Bs39,其抗体均属Ig G_1型。细胞染色体平均为113条。细胞反复冻存、复苏、传代仍稳定分泌双特异抗体。     

抗轮状病毒LLR株G10血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗轮状病毒(RV)LLR株G10血清型特异性单克隆抗体,并鉴定其特性。方法以纯化的RVLLR株(血清型为G10)为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术筛选分泌G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。采用层析法纯化单抗,常规免疫学方法鉴定单抗的特性。结果经筛选获得5G5、1H1和7F6共3株可稳定分泌高效价且具有G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。3株细胞分泌的单抗分别为IgG2a/κ、IgG2a/κ和IgG1/κ型;腹水效价均可达1.024×106;分别识别两个抗原位点;相对亲和力依次为1H1﹥7F6﹥5G5;5G5和1H1(细胞上清)均与G1～G4和G6血清型RV抗原无交叉反应;3株杂交瘤细胞分泌的单抗均识别相对分子质量约为34000的VP7蛋白,且均有不同程度的中和活性。结论已成功制备了抗RVLLR株G10血清型特异性单抗,该单抗可用于G10血清型RV的分型检测或LLR毒株的鉴别。     

人肝癌特异性γ-GT Ⅱ单克隆抗体的研究

利用杂交瘤技术获5株分泌鼠抗人肝癌特异性γ－GTⅡ单克隆抗体细胞株，经核型分析，证明所建杂交瘤细胞系融合细胞。对其分泌的MCAb进行生物学特性鉴定，各McAb滴度不一，有的高达10－9，有的低至10－2左右。5种McAb均为IgG型，只与纯化的γ－GTⅡ起反应。有2种McAb有相同的位点，另外3种有不同的位点。     

抗人红细胞表面抗原glycophorin A杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术,用纯化人红细胞表面抗原glycophorin A“N”型免疫纯系BALB/c小鼠,用glycophorin A“M”型作为固相抗原,用EIA间接筛选出识别“M”、“N”血凝抗原以外的抗glycophorin A的抗体,进而利用Coombs原理,加入抗免疫球蛋白,筛选出非凝集型抗glycophorin A抗体,得到61株非凝集型抗glycophorin A杂交瘤,其中12株有限稀释法克隆4次后得到5株稳定分泌非凝集型抗体的杂交瘤并进行初步鉴定。单抗上清血凝效价可达1:20～50,腹水血凝效价为1:800～1:1 600。     

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白单克隆抗体,并进行鉴定。方法用差速离心纯化的IBV四川分离株Sczy3免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。利用IBV鼠高免血清建立间接ELISA,筛选杂交瘤细胞。强阳性孔经有限稀释法亚克隆,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水。用鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定单抗的亚型,Western blot法分析单抗的反应原性,ELISA法分析单抗的特异性及其与不同IBV毒株的交叉反应性。结果经连续4次亚克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗IBV Sczy3株单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C8C1和2C10E7,其腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600。2株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgM亚型;均可特异性识别S1蛋白;2株单抗只与IBV发生特异性反应,与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9亚型和AIV H5抗原均不反应,与其他5种基因型的10株IBV毒株均可产生交叉反应。结论成功制备了2株IBV S1蛋白单克隆抗体,为IBV的检测、抗原表位筛选及致病机理的研究等提供了材料。     

抗KOD聚合酶单克隆抗体的制备(英文)

单克隆抗体具有高度的均一性和专一性。抗KOD聚合酶单克隆抗体,可以特异性结合于KOD聚合酶,抑制PCR反应前常温状态下的多聚酶活性,显著提高PCR反应的特异性。为了提高KOD聚合酶PCR反应的特异性,以KOD聚合酶为抗原,制备了两株抗KOD聚合酶的单克隆抗体。以大肠杆菌表达的重组蛋白KOD聚合酶为抗原免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过HAT选择培养、ELISA检测和有限稀释法克隆,建立了2株能稳定分泌抗KOD聚合酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1F5与3G6,对应的抗体亚型分别是IgG1和IgG2a。染色体计数结果分别是85~90和83~86。1F5与3G6的细胞上清和腹水的ELISA效价分别为1∶28,1∶29和1∶211,1∶211。间接免疫荧光证实制备的单克隆抗体的特异性良好。该结果为进一步建立高特异性的PCR方法奠定了良好的基础。     

抗支原体共同抗原单抗的筛选及应用

利用猪鼻 (mhy)、肺炎 (mp)支原体作为免疫原 ,采用杂交瘤技术建立 7株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。所分泌的抗体用ELISA法检测与Mo、Ma、Mhy、Al及Mp 5种支原体的反应性 ,其中甲H5和丁D3细胞所分泌的抗体与 5种支原体均发生反应。表明这两种抗体是针对 5种支原体共同抗原的 ;以丁D3抗体作为一抗 ,采用间接荧光法分别检测 5种支原体感染的Vero细胞均为强阳性 ,其敏感性高于培养法 ,与DNA染色法相当 (2 0 0个 /ml) ;以甲H5抗体为包被抗体 ,丁D3抗体为酶标抗体 ,采用双抗体夹心法检测培养上清中支原体敏感性为 12 5ng/ml。用两种方法检测 2 0份支原体阳性细胞株 ,10份阴性细胞株标本 ,结果间接荧光法显示 2 0份阳性标本全部为阳性 ,10份阴性标本 1份为阳性 ;双抗体夹心法 2 0份阳性标本中 10份为阳性 ,10份阴性标本全部为阴性     

玉米赤霉烯酮抗独特型单抗的制备及特异性分析

目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5。方法将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化。间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性。结果共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度最高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好。结论已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在"内影像"关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术。     

稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定

目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。     

Acute Myelogenous Leukemia Cells Secrete Factors that Stimulate Cellular LDL Uptake via Autocrine and Paracrine Mechanisms

Leukemic cells isolated from most patients with acute myelogenous leukemia (AML) have higher low density lipoprotein (LDL) uptake than normal mononuclear blood cells. Little is known, however, about the mechanism behind the elevated LDL uptake. We investigated if AML cells secrete factors that stimulate cellular LDL uptake. Mononuclear blood cells were isolated from peripheral blood from 42 patients with AML at diagnosis. Cellular LDL uptake was determined from the degradation rate of ¹²⁵I-labelled LDL. Conditioned media from AML cells stimulated the LDL degradation in the leukemic cell lines KG1 and HL60, and in isolated AML cells. The stimulatory effect correlated with the LDL degradation in the AML cells directly after isolation from blood. Conditioned media also autostimulated LDL degradation in the AML cells themselves. Concentrations of IL-6 and IL-8 in AML cell conditioned media correlated with the LDL degradation in AML cells directly after isolation from blood. Addition of R-TNF-α, but not IL-6 or IL-8, stimulated LDL degradation in HL60, KG1, and AML cells. The LDL degradation in AML cells could be inhibited by a LDL receptor blocking antibody. AML cells secrete factors that stimulate LDL uptake in a paracrine and autocrine pattern which open up therapeutic possibilities to inhibit the uptake of LDL by administration of antibodies to these factors.     

应用光敏生物素标记探针检测杂交瘤细胞中小鼠白血病病毒

采用BamHⅠ酶切和琼脂糖凝胶电泳技术，从重组质粒pSF11中回收5kb小鼠白血病病毒（MuLv）DNA片段，用光敏生物素标记制备DNA探针，采用斑点杂交法检测杂交癌细胞，McAb纯品以及SP2／0细胞中的MuLv。结果表明，此探针特异性好，灵敏度可达25pg。在检测的13株杂交瘤细胞和2株SP2／0细胞中分别有5株和1株为MuLv阳性，在McAb纯品中未查出MuLv。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的研究

应用流行性出血热病毒(EHFV)Z_(10)株制备的疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与BALB/c小白鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,获得10株能分泌ENFV特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其McAbs小鼠腹水荧光抗体滴度达1:2000～1:51200。经免疫印迹试验及ELISA夹心法证明1 0株McAbs为抗EHFV核蛋白(NP)的McAb,均不具有中和抗体活性,有低滴度的血凝抑制活性;经间接免疫荧光试验(IFAT)证明,2株为组特异性的McAb,5株为亚组特异性的McAb,3株为型特异性的McAb。实验用冻存免疫脾细胞进行杂交获得成功,为杂交瘤细胞的研究提供了经验。     

At Embryo Implantation Site IL-35 Secreted by Trophoblast,Polarizing T Cells towards IL-35+ IL-10+ IL-4+ Th2-Type Cells,Could Favour Fetal Allograft Tolerance and Pregnancy Success

We investigated the role of rhIL-35, at low concentrations compatible with those produced by human trophoblast cells (less than 1 ng/mL), on human T helper (Th) cell functions and the presence of decidual IL-35-producing Th cells in human pregnancy. We found that human trophoblast cells produced IL-35 but not IL-4 or IL-10. RhIL-35, at concentrations produced by human trophoblasts, polarized T cells towards IL-35+, IL-10+, IL-4+ Th2-type cells and to Foxp3+ EBI3+ p35+ T reg cells producing IL-35 but not IL-10 and IL-4. Moreover, rhIL-35 at low concentrations did not suppress the proliferation of Th cells but stimulated IL-4 and IL-10 production by established Th clones. In particular, Th1-type clones acquired the capacity to produce IL-4. In addition, purified human trophoblast cell supernatants containing IL-35 upregulated IL-4 and IL-10 production by Th clones. Finally, IL-35+, IL-10+, IL-4+ Th2-type cells, which were found to be induced by low concentrations of IL-35 compatible with those produced by human trophoblasts, are exclusively present in the decidua of a successful pregnancy and at the embryo implantation site, suggesting their stringent dependence on trophoblast cells. Thus, the proximity of Th cells to IL-35-producing trophoblasts could be the determining factor for the differentiation of IL-35+, IL-10+, IL-4+ Th2-type cells that are crucial for human pregnancy success.