麦角酰胺产生菌原生质体的紫外诱变育种

为了提高在一般条件下不易产生分生孢子的雀稗麦角菌的产碱率,对原生质体诱变育种的条件和方法进行了探讨。实验表明,对麦角酰胺产生菌的原生质体用紫外线照射5min、7min9、min进行诱变处理,可获得较稳定的高产突变株。麦角酰胺的产率由原始菌株的58mg.L-1提高到459mg.L-1,增加了约7倍,连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,说明用原生质体进行诱变处理,对提高麦角酰胺的产率是可行的。     

原生质体紫外诱变选育达托霉素高产菌株

研究了达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌D-30原生质体制备及再生的条件。结果显示,D-30原生质体制备及再生的最适条件为:在种子培养基中添加0.6%的甘氨酸,当种子培养30h后,用浓度为2mg·mL-1的溶菌酶破壁,酶解温度为32℃,酶解时间为75min。在最适条件下制得的原生质体经紫外诱变处理后培养,最终筛选得到高产菌株D-35,该菌株的平均发酵单位较出发菌株提高了87.9%。     

赤霉素产生菌原生质体理化诱变-定向筛选模型的建立与应用

针对赤霉素工业生产菌株皆为不产生孢子的多核多细胞菌丝型,通过酶解手段溶去赤霉素菌丝体的细胞壁,使其成为单一游离的原生质体,在此基础上建立赤霉素产生菌原生质体抗药性致死突变标志诱变筛选模型,以解除高浓度反应底物及内源赤霉素对其产生菌生物合成的反馈抑制和阻遏,提高赤霉素生物合成酶的活力,从而获得赤霉素高产菌株。应用所建立的赤霉素诱变筛选模型,进行产生菌原生质体理化诱变-定向筛选,成功得到N7298等多株原生质体再生的抗药性突变高产菌株,其摇瓶效价比出发菌株N提高23.4%,在20m3罐生产水平提高24.1%。     

原生质体紫外诱变技术选育烟酰胺高产菌株

采用紫外线和氯化锂复合诱变技术,对烟酰胺产生菌Rhodococcus.equi的原生质体进行了诱变育种。原生质体制备和再生的最佳条件为:甘氨酸浓度2.6%,菌龄36 h,酶浓度2.0 mg/mL,酶解温度32℃,酶解时间40 min,原生质体的形成率达到94.6%。复合诱变的最佳条件:紫外线照射80 s,氯化锂浓度0.6%。最终获得一稳定高产3-氰基吡啶水合酶的菌株Rhodococcus.equi LY-PM09,其产酶酶活性为1 247 U/mL,比出发菌株提高了91.3%。     

麦角酰胺产生茵原生质体的紫外诱变育种

为了提高在一般条件下不易产生分生孢子的雀稗麦角茵的产碱率，对原生质体诱变育种的条件和方法进行了探讨。实验表明，对麦角酰胺产生茵的原生质体用紫外线照射5min、7min、9min进行诱变处理，可获得较稳定的高产突变株。麦角酰胺的产率由原始菌株的58mg·L^-1提高到459mg·L^-1，增加了约7倍，连续传代培养可以得到稳定的高产菌株，说明用原生质体进行诱变处理，对提高麦角酰胺的产率是可行的。     

简述纳他霉素生产菌种选育最常用的几种方法

纳他霉素生产中菌种选育的方法主要有自然分离、诱变育种、原生质体育种、基因工程育种等。在生产单位中运用最多的诱变育种。     

井冈霉素高产菌种的选育

井冈霉素是一种在井冈山地区发现的微生物菌株所产生的农用抗生素 ,对水稻纹枯病有显著的防治效果 ,药效达 90 %以上。虽然从井冈霉素发现迄今已有 30年 ,但由于其具有高效、低毒 ,对环境安全 ,以及尚未发现抗药性 ,因而该产品仍拥有一个稳定的市场。但是多年以来井冈霉素的发酵生产水平一直徘徊在 1 0 0 0 0～ 1 2 0 0 0r/mL(以A组份计 ,下同 ) ,我们以本公司的井冈生产菌种为出发菌种 ,用紫外线进行诱变处理 ,筛选出了发酵效价稳定的高产菌株UV 1 99,摇瓶发酵效价可达到 2 0 0 1 5r/mL(补足摇瓶蒸发水份后测得 ) ,比出发菌株 1 4 1 5 8r…     

一种快速诱变筛选雷帕霉素生产菌的方法

研究了一种复合诱变获得雷帕霉素生产菌——吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)高产突变株的方法。采用低剂量紫外诱变复合新型常压室温等离子体(ARTP)诱变技术构建雷帕霉素生产菌的诱变育种体系,获得高产雷帕霉素生产菌突变株,经两次复筛,效价较出发菌株提高18.4%。该方法大幅度减少了筛选量,正突变率高达70.59%,可以较短时间内提高雷帕霉素发酵单位,降低生产成本。     

棘白霉素B脱酰基酶产生菌转化条件的优化研究

为提高棘白霉素B脱酰基酶产生菌的转化率,通过紫外诱变复合Cu2+抗性处理筛选转化高产菌种,利用均匀设计方法优化菌种的转化工艺。结果表明,筛选得到的突变株132#的棘白霉素B转化率比出发菌株提高了22.6%,优化后的转化条件为:底物浓度2 400μg·mL-1,转化时间56h,转化温度30℃,发酵培养基pH值6.0。132#菌株在优化转化条件下的转化率较出发菌株在原始转化条件下提高了57.3%。优化的转化条件更有利于高产菌株的转化,转化率得到大幅提高,也为其工业化应用打下基础。     

原生质体诱变筛选阿维菌素高产菌株

阿维菌素是阿维链霉菌次级代谢产生的具有抗寄生虫活性的抗生素,菌种的改良是提高阿维菌素产量的关键。通过原生质体诱变,以L-异亮氨酸作为筛选模型来筛选阿维菌素高产菌株。首先制备阿维链霉菌原生质体,之后原生质体细胞在搅拌状态下进行紫外诱变,最后在含有0.5%L-异亮氨酸抗性平板上进行培养,得到了一株比出发菌株阿维菌素B1a效价提高35.4%的新菌株。     

长波紫外线(NUV)辐照原生质体选育埃博霉素高产株

获得高产优质菌株,提高埃博霉素发酵效价与成品纯度,降低成品单个杂质含量。采用长波紫外线(NUV)辐照原生质体,选育埃博霉素产生菌-粘细菌纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)。获得一株长波紫外线(NUV)辐照原生质体再生高产株,经生产罐应用后,发酵单位较出发菌株提高1.2倍,经提纯后,埃博霉素A杂质含量下降20%,成品收率提高8%,纯度提高3.5%。该方法正突变率高,诱变谱广,操作安全,简便,为生物科学发展开辟了一条新途径。     

复合诱变法筛选达托霉素高产菌株

以达托霉素产生菌HK402为出发菌株进行氦氖激光辐照-亚硝基胍复合诱变,最终获得一株达托霉素高产菌株14-10-98。该菌株遗传稳定性好,发酵单位比出发菌株高35%,比单用氦氖激光辐照诱变得到的高产菌株14-8-102高8%,比单用亚硝基胍诱变得到的高产菌株14-9-196高13%。     

美伐他汀产生菌的原生质体诱变育种

以美伐他汀产生菌SIPI-8915为出发菌,研究了影响原生质体形成和再生的各种因素并选出最佳条件,其再生频率达到23.5%;并对原生质体进行紫外诱变育种,筛选到变异株.该菌株摇瓶发酵效价比对照提高30%,传代稳定好.     

去甲基金霉素高产菌株选育及发酵工艺优化

去甲基金霉素生产菌金黄色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)经紫外诱变得到菌株5-3,经诱变的菌株产量比原有菌株生产水平提高了28%。通过发酵培养基优化及发酵培养条件优化实验,其生产能力累积提高,诱变后高产菌株用新发酵配方发酵,比原始配方发酵水平提高了50%。优化后菌种及发酵工艺用于发酵生产,生产水平稳定。     

紫外诱变季也蒙毕赤酵母原生质体筛选木糖醇高产菌株

目的通过对季也蒙毕赤酵母原生质体进行紫外诱变,筛选遗传性稳定的木糖醇高产菌株。方法制备季也蒙毕赤酵母DQ11的原生质体,计算原生质体生成率及再生率,并对制备过程中的酶浓度(0.5%、1.0%、1.5%和2.0%)、酶解温度(26、28、30、32和34℃)及酶解时间(1、2、3、4和5 h)进行优化。对采用最佳酶解条件制备的原生质体进行紫外诱变,分别检测诱变30、60、90、120和150 s时原生质体的致死率,经重复筛选,采用高效液相色谱法测定菌株发酵液的木糖醇含量,并检测筛选出的木糖醇高产菌株的遗传稳定性。结果最佳酶解条件为:酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间3 h,该条件下制备的原生质体经紫外诱变90 s(最佳诱变时间)后,获得1株高产木糖醇诱变菌株YZ-57,其发酵液的木糖醇含量为9.78 g/L,比出发菌株DQ11提高了186%,且具有良好的遗传稳定性。结论季也蒙毕赤酵母原生质体经紫外诱变,成功获得一株季也蒙毕赤酵母木糖醇高产菌株YZ-57,且具有良好的遗传稳定性。     

林可霉素产生菌无活性突变株的选育

1引言 本文介绍了盐酸林可霉素产生菌无活性突变株的选育和原生质体融合的方法以及实验结果,运用uv、uv+Licl、DES、NTG等方法,对60#菌种进行诱变获得了无活性突变株.运用诱变方法获得了带稳定抗SM标记的菌株914#,将914#和8811#进行原生质体融合,获得了遗传性稳定的融合子.     

60Co-γ对Cl.beijerinckii原生质体的辐照诱变

以产丁醇菌Cl.beijerinckii为出发菌株,将其原生质体化后进行60Co-γ辐照诱变,筛选出了一株稳定高产的变异株.原生质体的最优制备条件为:将培养至15 h的细胞添加1 g·L-1甘氨酸和0.3 U·L-1青霉素培养2 h后,37℃下,2×104 U·L-1溶菌酶作用8 h脱壁.经平板计数,原生质体形成率可达99.82%,原生质体再生率达10.12%.采用60Co-γ射线进行辐照诱变,当辐照剂量率5 Gy·min-1,辐照剂量为500 Gy时,原生质体致死率可达99.3%.经反复筛选,获得一株丁醇高产菌株R3,该菌具有较高的遗传稳定性.在P2半合成液体培养基中,37℃下静置培养72 h,总溶剂产量较出发菌株提高81.46%,丁醇产量提高85.41%.     

ARTP-DES复合诱变结合前体耐受性选育达托霉素高产菌株

为提高玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus）AN-126的达托霉素（Daptomycin）产量，对菌株AN-126进行ARTP-DES复合诱变，并结合癸酸钠耐受性筛选，最终获得一株达托霉素高产菌株RR-447，摇瓶产量为101.41 mg/L，是出发菌株的2.44倍。传代实验表明，该菌株高产性能稳定遗传。对突变前后菌株的形态特征以及基因指纹图谱进行分析，结果显示突变菌株与出发菌株在形态学特征有明显差异，且高产菌株RR-447 基因组DNA在1.5 kb~2.0 kb之间存在一条特异性条带。通过在5L发酵罐中流加前体物质癸酸钠，菌株RR-447达托霉素产量达到521.39 mg/L。研究结果表明，ARTP-DES复合诱变结合癸酸钠耐受性是选育达托霉素高产菌株的一种有效育种手段，为达托霉素工业微生物育种以及其他菌株改良提供了技术参考。     

用原生质体法诱变选育林可霉素高产菌株

去壁后的微生物原生质体外层仅存原生质体膜,在诱变过程中,直接与诱变剂接触,诱变剂迅速内溶并与核作用.弥补了常规诱变育种表型延迟和严重的遗传分离现象的缺点,我们以林可霉素生产菌G4为出发菌株,首先制备原生质体,再通过对原生质体进行紫外诱变,经过平皿再生,再经过摇瓶初筛、复筛,得到一株生产性能比出发菌株提高3.2%的突变株Y19.     

选育纤维素乙醇生产的高效产酶工程菌技术的研究进展

综述了近年来选育高效产纤维素酶工程菌取得的最新理论研究及工艺进展,并就复合理化诱变获取高效产酶菌,以及利用原生质体融合、原生质体诱变、基因工程等技术对各种产纤维素酶、半纤维素酶菌株进行遗传改造,对纤维素酶高效产酶工程菌的选育进展进行了总结,进一步展望了选育高产纤维素酶菌株的研究方向。