RCA技术联合免疫反应检测低丰度蛋白质的研究

目的:建立一种检测微量蛋白质的滚环扩增技术(rolling cjtion,RCA).方法:以血管内皮生长因子为研究对象,利用链亲和素做桥接,将免疫反应和RCA技术进行有效的结合,构建一种新型的蛋白质检测方法.结果:通过优化实验条件,对血管内皮生长因子检测的灵敏度达到10fM,大大超过传统的ELISA方法.结论:RCA技术联合免疫反应能够高特异性、高灵敏度地检测低丰度蛋白质,具有广阔的临床应用前景.     

RCA技术联合DNA芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的:应用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术以DNA芯片为载体建立一种对结核分枝杆菌耐药基因单碱基突变的快速检测方法.方法:根据结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因序列,设计针对该基因常见突变位点的锁式探针,及固定于基因芯片上的捕获探针.针对临床结核分枝杆菌样本的基因组DNA,PCR扩增含有rpoB基因常见突变位点的特异性DNA片段.将与突变型特异性互补结合并环化的锁式探针与芯片上固定的捕获探针进行杂交,并运用滚环扩增技术,将含有生物素标记的dUTP掺入扩增产物,最后通过与亲和素标记的纳米金反应,并银染增强显色.同时与临床样本的测序结果比较.结果:通过优化反应条件,能特异性的检测出结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的单碱基突变,通过对临床样本的检测,结果与测序结果一致.结论:该方法结合了DNA芯片和滚环扩增技术,能够快速有效的检测出耐药结核的单碱基突变,具有高特异性、高灵敏度.     

血管内皮生长因子在激光诱导视网膜下新生血管形成中的作用及其抗体的影响

目的：探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothial growth factor,VEGF)在激光诱导兔视网膜下新生血管形成中的作用，观察其抗体对新生血管的影响。方法：高强度氪激光光凝有色家兔视网膜1、3、7、14d后，制备眼球冰冻切片检查眼底病理变化，用组织原位杂交法观察VEGFmRNA表达时相和部位的变化。VEGF抗体治疗组2只眼于光凝后10min玻璃体内注射5μgVEGF抗体，14d后行眼底荧光造影并与对侧眼对照观察荧光渗漏变化。结果（1）正常对照家兔视网膜中未见VEGFmRNA的表达；（2）激光光凝后1-3d，邻近伤口的视网膜节细胞层和内核层VEGFmRNA表达明显增加；（3）光凝后3d，光凝斑附近的视网膜下有新生血管样结构出现；（4）VEGF抗体治疗组荧光染料渗漏程度明显降低。结论：VEGFmRNA的在激光光凝后的视网膜中表达增多，且与光凝斑周围的新生血管化存在时空对应关系，提示VEGF在视网膜下新生血管形成过程中具有重要的作用。VEGF抗体对新生血管形成具有明显的抑制作用。     

适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度

通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50～200倍;对人腺病毒41型（Ad41）细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法（immune clumping）与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1～2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。     

生物传感器在蛋白质检测中的应用分析

生物传感器是利用蛋白质、酶、核酸等这些活性物质之间的分子识别功能,把被检测的物质的构象变化、浓度变化等生物的微观过程转变成可量化的可视的电信号、荧光信号等物理化学信号,从而达到检测蛋白质、核酸等分子的目的。对于生物传感器检测的设计,选择最适合的与待测物特异性识别的敏感元件是非常重要的,这些直接决定了灵敏度高低和传感器选择性好坏,核酸适体-蛋白质、酶-基质和抗原-抗体都是非常好的待选组合。本文主要研究了蛋白质与生物传感器以及其在检测之间的关系、分析与研究等方面。     

丹参酮ⅡA增效大鼠骨髓源性内皮祖细胞VEGF、SDF-1表达

目的：研究在丹参酮ⅡA的辅助下,骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）VEGF与SDF-1表达是否能增强,从而促进细胞归巢。方法：Percoll密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导培养,并进行形态学、免疫学（免疫细胞化学染色）、功能学（Dil-acLDL与FITC-UEA-1双荧光染色）鉴定。将鉴定为EPCs的细胞分为单纯EPCs组（对照组）、EPCs＋丹参酮ⅡA组（加药组）。细胞培养第9d,Western blot与实时荧光定量PCR检测各组VEGF、SDF-1基因与蛋白表达。结果：EPCs＋丹参酮IIA组VEGF、SDF-1基因与蛋白表达均高于EPCs组（p均〈0.05）。结论：丹参酮ⅡA可上调大鼠骨髓源性内皮祖细胞VEGF及SDF-1表达,从而可能在缺血环境中更好促进EPCs归巢,更有效促进血管修复与再生。     

雷帕霉素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：观察雷帕霉素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,探讨其可能的抑制新生血管的作用机制。方法：采用四唑盐比色试验（MTT）法检测不同浓度（0.1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,20ng/ml）的雷帕霉素对血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖的抑制作用。结果：不同浓度的雷帕霉素均能抑制由VEGF诱导的HUVEC增殖。结论：雷帕霉素能抑制HUVEC的增殖,且呈剂量依赖。雷帕霉素通过抑制血管内皮细胞的增殖来抑制新生血管的形成。     

人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达

目的：构建含有人二型大麻素受体（CB2）基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法：首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1（＋）-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP。将获得的pIRES2-EGFP-CB2重组子转染HEK293细胞,应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况,RT-PCR和报告基因检测CB2的表达情况。结果：酶切和测序结果验证真核表达载体pIRES2-EGFP-GB2构建成功。可在荧光显微镜下观察到转染HEK293细胞表达的绿色荧光;RT-PCR和双荧光素酶报告基因法检测证明CB2蛋白在真核细胞中成功表达;CB2受体激动剂JWH-015能显著逆转腺苷酸环化酶激动剂forskolin诱发的荧光素酶活性增加。结论：成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-CB2,为进一步研究CB2基因的生理学和病理生理学功能及调控机制奠定了实验基础。     

用图像处理技术提取植入β半乳糖苷酶的细胞

应用数字图像处理技术探讨了定量检测植入β-半乳糖苷酶细胞的方法。得出以下结论：一是彩色图像分割中常用的HSV颜色模型方法,较难检测出植入少量β-半乳糖苷酶的细胞;常用的绿色特征提取方法（2G-R-B方法）,也不适应于β-半乳糖苷酶的检测。二是所提出的G-R方法是植入β-半乳糖苷酶细胞特征检测的有效方法,该方法不仅可以有效地提取植入β-半乳糖苷酶较多的细胞,而且同样可以检测出植入β-半乳糖苷酶较少的细胞,并且处理过程简单,处理速度快。     

纳米金基因芯片技术快速检测丝状真菌的研究

目的：建立并评价一种快速检测和鉴定丝状真菌的方法。方法：利用通用引物一次PCR法扩增待检丝状真菌核糖体基因内部间隔区2序列,扩增产物与基因芯片上特异性探针杂交,杂交信号通过纳米金标记和银染反应放大形成裸眼可见的显色信息来判读检测结果。结果：通用PCR扩增方法成功扩增出11种受试菌株的靶DNA,所设计选用的各探针特异性强、可靠性好。所有模拟样品均获得正确的鉴定。结论：该技术方法操作简单、快速、不需要特殊设备,能部分满足临床检测通量的基本要求,具有很好的临床应用前景。     

高效液相色谱法测定头孢噻吩钠含量和有关物质

建立高效液相色谱法（HPLC）测定头孢噻吩钠含量和有关物质。色谱条件以C18为固定相,色谱柱：（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为0.207mol/L醋酸钠溶液（用冰醋酸调pH值至5.9）-乙醇-乙腈（82：2：16）,流速为：1.0mL/min;检测波长：254nm：柱温;40℃。结果：头孢噻吩钠含量在55.8μg/mL至464.4μg/mL呈良好线性关系,r=0.9999：平均回收率100.2%;最低检测限为3ng（1ng/μL×3μL）。本法简单、准确,重现性、分离效果好,能较好的进行孢噻吩钠含量和有关物质测定。     

人体创口工具残留物的扫描电镜能谱检验法

本文通过设置合适的参数,使用扫描电镜X射线能谱GSR(即FEATURE)软件检验人体附着微小可疑残留物,借以形成人体致伤工具微量残留物检验方法,为人体损伤致伤物推断研究建立重要的技术方法.结果表明使用GSR(FEATURE)软件可定量检测到人体创口内微量工具残留物；通过对人体创伤工具残留物颗粒成分进行分析,可以全面解决人体残留致伤工具成份分析问题,为人体损伤致伤物推断研究建立关键理论技术基础;GSR(FEATURE)软件对于建立法医微量物证研究方法具有重要意义.     

一种基于预编码的异构网下行干扰协调方法

在通用移动通信系统（Universal Mobile Telecommunications System,UMTS）异构网络中,理论分析了宏基站对微微（Pico）小区边缘用户的下行干扰问题。在传统空白帧（ABS）方法的基础上,提出了一种干扰避免策略,其主要思想是通过联合时域ABS策略和空域基于码本限制的策略提高传统ABS策略的系统性能,即在ABS子帧上,宏基站并不是完全不发送数据,而是采用码本受限的预编码进行传输。限制的码本可以根据宏小区自身的负载动态进行更改,并通过广播传递给低功率节点（Low Power Node,LPN）,LPN根据得到的信息进行边缘用户的调度。仿真结果表明,提出的方法在最差5%用户吞吐率比ABS方法略有下降的情况下,使用户平均吞吐量得到了提升。     

慢性间歇性缺氧对大鼠性腺轴的影响

目的：制作可应用于常压慢性间歇性缺氧研究的动物模型,探讨慢性间歇性缺氧对性腺轴影响。方法：大鼠分别给予空气（对照组,UC组）、间断低氧4周（慢性间歇性缺氧组,CIH组）及复氧4周（复氧组,RH组）处理后用放射免疫法测定血清睾酮（T）、促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平。结果：与UC组、RH组比较,CIH组的T、FSH、LH,UC组和RH组无明显改变。结论：慢性间歇性缺氧致使大鼠性腺轴功能异常,反馈调节紊乱,复氧能使其恢复正常。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定人血浆中花生四烯酸乙醇胺浓度

目的：建立血浆中花生四烯酸乙醇胺（Anandamide）的柱前衍生化高效液相色谱（HPLC）测定方法。方法：取血浆样品1mL碳酸氢钠碱化,无水甲苯提取,衍生化试剂DBD-COCL衍生,进样HPLC测定,采用外标法。色谱柱为Agilent C18（250×4.6mm,5μm）,流动相为50mmol.L^-1醋酸钠水溶液-乙腈,采用梯度洗脱,流速1.0ml.min^-1,激发波长为336nm,发射波长为560nm。结果：血浆中Anandamide线性关系良好,日内日间RSD〈10%,范围1-30ng/ml,血浆中花生四烯酸乙醇胺最低检测限为0.50-0.85ng（S/N=3）。结果：该方法样品处理过程简便,重复性好,符合生物样品测定要求,并适用于临床血样中anandamide浓度的测定。     

构建可运营可管理的物联网

IBM提出的"智慧地球"被奥巴马政府认为是振兴经济、确定美国全球竞争优势的新战略。在中国,三大电信运营商相继成立了专门的物联网研究机构,推出一批成熟的物联网应用,但在物联网的组网和运营方面还没有成熟的提案。本文从运营和管理的角度,提出可运营可管理的物联网概念、架构和运营管理模式。     

D2D辅助的协作中继NOMA系统中TSRS策略及其中断性能分析

该文研究了D2D辅助的协作中继NOMA（DC-NOMA）网络,在中继用户（RU）转发信息的第二时隙,利用RU到蜂窝中心用户（CCU）的D2D通信链路传输新的信号。为了提高传输可靠性,设计了新的信号检测策略,通过完全利用边缘信息消除了用户间的干扰。基于新的信号检测策略,提出了一种两阶段中继选择策略（TSRS）。在满足蜂窝边缘用户（CEU）可靠接收的中继集合中,选择使CCU成功解码概率最大的中继。为了评估所提出的DC-NOMA方案,推导了每个用户的确切中断概率且通过仿真得到验证。仿真结果表明,在高信噪比区域,该文所提出的基于新的信号检测策略的DC-NOMA在TSRS方案下的中断性能优于部分中继选择方案（PRSS）和传统的DC-NOMA。特别地,增大中继数量可有效提高DC-NOMA系统的中断性能。      

基于SVM和HOG的人脸检测算法

本文提出了一种基于支持向量机和方向梯度直方图的正面人脸检测方法。支持向量机通过学习方向梯度直方图特征来选取支持向量,然后根据这些支持向量构建最优分类面。实验使用的训练样本和测试样本从CMU的PIE多姿态和多光照人脸数据库中选取,样本大小被标准化为20＆#215;20像素。检测系统选用的分类器是支持向量机,其核函数是线性的。选用的特征是Navneet Dalal和Bill Triggs在行人检测问题上提出的方向梯度直方图。训练好的分类器在测试集合上的检出率为92%。在CMU＋MIT正面人脸测试集合上也取得了较好的结果。实验结果表明,本文提出的方法在人脸检测问题上是比较有效的。     

基于叠加式传感器的多普勒雷达多目标联合检测与估计

多目标检测与估计是多普勒雷达的基本任务。当信噪比较低时,为确保检测到目标需降低门限而产生了大量虚警,基于数据的多假设跟踪（Multi-Hypothesis Tracking, MHT）和联合概率数据关联（Joint Probabilistic Data Association, JPDA）方法因计算复杂度过高而失效,基于原始信号的随机有限集（Random Finite Set,RFS）滤波器可有效解决该问题。多普勒雷达回波信号以叠加的方式受到多个目标影响,其多目标检测与估计问题属于叠加式传感器的典型应用。本文在叠加式多伯努利（Multi-Bernoulli, MBR）滤波器基础上利用具有准确势估计的独立同分布群（Independent and Identically Distributed Cluster, IIDC）RFS对新生目标建模,并采用辅助粒子滤波器（Auxiliary Particle Filter, APF）实现了多目标联合检测与状态估计。仿真结果表明,混合MBR和集势概率假设密度（Cardinalized Probability Hypothesis Density,CPHD）滤波器对多普勒雷达多目标的检测估计性能优于MBR滤波器,且减小了计算复杂度。      

3，3’，5，5’-四甲基联苯胺-H2O2-HRP差分脉冲伏安法测定HRP及其标记物的研究

目的：研究3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（3,3’,5,5’tetramethylbenaidine,TMB）-H2O2-辣根过氧化酶（h㈣eradjshpemxidase,HRP）体系中HRP及其标记物含量的电化学检测方法,并探讨了反应机制。方法：HRP催化H202氧化TMB生成偶氮化合物,在磷酸盐缓冲液中川差分脉冲伏安法检测到0,IV左右产生灵敏的电流峰,据此可检测HRP含量。结果：测定HRP线性范尉为1．1×10^-13g/ml至5．0×10^-11g／mE,检测限为8．7×10^-13g／ml。结论：建立了一种简单、低成本的检测HRP及其标记物的方法。