超声微泡介导野生型P53基因转染鼠视网膜母细胞瘤的实验研究

目的:探讨超声微泡造影剂在一定强度的超声波照射下介导野生型p53(wtp53)基因转染荷瘤小鼠的可行性,为实现外源基因高效,定向的转移目的奠定基础。方法:将12只BAlB/C(nu/nu)裸小鼠双眼玻璃体腔接种HXO-Rb44细胞,造模成功后,将动物随机分为2组,第1组于尾静脉注入含质粒的微泡造影剂;第2组尾静脉注射质粒与微泡的混合液,并立即以0.5W/cm2〔1〕的超声波辐照小鼠眼球60s,工作时间控制为20%。转染7天后,处死动物,摘除眼球,RT-PCR检测wtp53基因的表达情况。结果:超声照射组动物的肿瘤组织中均检测到wtp53的mRNA表达,而未照射组动物肿瘤组织中未检测到mRNA的表达。结论:超声微泡能使外源基因wtp53高效的转染小鼠RB肿瘤组织。     

脂质体联合超声介导质粒R-Caspase3转染宫颈癌细胞的实验研究

目的：探讨超声联合脂质体介导质粒R-Caspase3转染宫颈癌细胞的可行性。方法：①以一定声强作用于Ca Ski细胞不同时间,找出对细胞抑制率在10%的时间点;②将该时间点的声强与脂质体联合作用于CaSki细胞,并将Ca Ski细胞分成5组,进行实验：（1）单纯细胞组;（2）超声＋质粒组;（3）超声＋质粒＋脂质体组;（4）质粒＋脂质体组;（5）单纯质粒组。结果：1.以脉冲超声（声强：0.8W/cm2;频率：1.7MHz;占空比：10%）辐照细胞20s,细胞死亡率在10%左右;2.第3组较第4组转染效率有所提高,而这两组又明显高于其他三组。结论：超声联合脂质体能促进质粒转染宫颈癌细胞。     

慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞有效性的试验研究

目的:观察慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白(lenti-EGFP)通过两种途径体内转染大鼠角膜基质细胞的有效性,为角膜疾病尤其是准分子激光术后角膜Haze形成的基因治疗提供实验基础.方法:Lenti-EGFP通过角膜基质注射和刮除角膜上皮敷贴带lenti-EGFP的棉片两种不同方法体内转染大鼠角膜基质细胞,转染后定期...     

重组人骨形态发生蛋白9和2体外诱导成骨的活性分析

利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4／HisMax—BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO—dhfr-细胞,以含有100μg／ml博来霉素的1MDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达rhBMP-9的6株单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-9表达水平,最高可达1．13μg/24h／10^6cells。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,冻干法浓缩得到100μm/ml的rhBMP-9。用浓度100μg／ml的rhBMP-9和rhBMP-2分别刺激培养C3H10,各项成骨指标显示rhBMP-9具有-定的体外诱导成骨能力,但不及rhBMP-2。     

重组RANK蛋白抑制破骨细胞活性的实验研究

目的研究重组RANK蛋白在体外实验中对破骨细胞的抑制作用。方法成骨细胞与RAW264.7细胞以4∶1比例混合培养6d,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定后,加入3种浓度(10-4g/L、10-5g/L、10-6g/L)重组RANK蛋白,并设空白对照。3d后观察破骨细胞数目和形态,计数骨磨片吸收陷窝。结果混合培养6d后,体系中可见成熟破骨细胞出现。加重组RANK蛋白3d后,与对照组相比,各药物组TRAP阳性细胞个数、骨磨片吸收陷窝计数均明显减少。结论体外实验中重组RANK蛋白可以显著抑制破骨细胞活性及吸收功能。     

人参皂苷Rg1协同rhBMP-2对人牙髓干细胞成牙分化作用研究

目的：探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2（rhBMP-2）及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞（DPSCs）成牙分化的影响。方法：酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测和实时荧光定量RT—PCR测定牙本质涎磷蛋白1（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）mRNA的表达以检测不同浓度人参皂苷Rgt（0．1,0．5,2．5,5,10,20μmol／L）及rhBMP-2（25,50,100,200rig／ha）单独及联合应用对DPSCs成牙分化的影响。结果：人参皂苷Rg1（2．5,5和10μmol／L）组的ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,5μmol／L组ALP活性明显高于其它浓度组（P〈0．001）;浓度为50,100,200mg/ml的rhBMP-2其ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,100ng／ml rhBMP-2组ALP活性最强。联合应用人参皂苷Rg1（5μmol／L）和rhBMP-2（100ng／ml）DSPP和DMP1 mRNA的表达明显高于单独应用组（P〈0．001）。结论：人参皂苷Rg1可促进体外培养的DPSCs成牙本质分化,人参皂苷：Rg1协同rhBMP-2能明显增强DISCs成牙本质分化。