人PSCA真核表达载体的构建及表达

目的构建含有信号肽及FLAG标签的人前列腺干细胞抗原(PSCA)真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得SIG-FLAG基因片段及人PSCA基因片段,插入到真核表达载体pIRES-neo中。构建的重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及RT-PCR方法检测其表达情况。结果PCR扩增出的SIG-FLAG及PSCA基因测序正确,酶切鉴定证明重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA构建成功;检测结果显示重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA,且在293T细胞中能有效表达,为后续转人PSCA基因细胞系的构建工作奠定了基础。     

人DC-SIGN真核表达载体的构建及表达

目的构建含有FLAG标签的人DC—SIGN真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得含有FLAG标签的人DC—SIGN分子基因,将其插入到真核表达载体pIRES—neo中。构建的重组质粒pIRES—neO—FLAG—DC—SIGN转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及WesternBlot检测其表达情况。结果含FLAG标签的人DC—SIGN基因测序正确,PCR和酶切鉴定证明FLAG—DC—SIGN基因已成功连入真核表达载体pIRES—neo中;检测结果显示重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN,且在293T细胞中能有效表达,为后续DC靶向性疫苗研究奠定了基础。     

人miR-34a靶基因的生物信息学分析及载体构建

目的对人miR-34a(hsa-miR-34a)下游靶基因进行预测,并构建含自噬相关基因靶结合序列的GFP报告基因载体。方法使用TargetScan Release 5.1和RNA22软件分析hsa-miR-34a可能的靶基因,并利用Gominer软件对靶基因功能进行分析。根据预测结果,合成含自噬相关基因hsa-miR-34a靶序列的寡核苷酸,以pEGFPC2为载体构建系列质粒,并检测各载体的真核表达情况。结果预测结果显示hsa-miR-34a共有2904个下游靶基因,功能涵盖生物过程、细胞组分、分子功能三大类,其中与自噬作用直接相关的靶基因有beclin 1和sestrin 2。构建含beclin 1和sestrin 2作用位点的GFP载体共5个,质粒转染Hela细胞后在荧光显微镜下可见绿色荧光。结论成功构建hsa-miR-34a下游自噬相关基因靶位点序列GFP报告基因载体,为进一步研究hsa-miR-34a对自噬的调控作用奠定基础。     

Δ(1-9)alα10人白细胞介素11衍生物的重组表达与性质鉴定研究

重组白细胞介素 11(ＩＬ - 11)全长 185个氨基酸 ,是一种多功能生长因子 ,在巨核系生成 ,免疫调控以及粘膜保护等方面起着重要作用 ,经大肠杆菌表达的重组人白细胞介素 11已被批准上市 ,用于治疗癌症病人化疗后引起的血小板减少症。蛋白结构模拟实验 ,发现天然ＩＬ - 11Ｎ端 9个氨基酸的去除可能更稳定、不影响其生物活性 ,且有增加功能基团暴露的作用。由于ＩＬ - 11分子是一个强碱性蛋白 ,等点电大于 11,大量工作结果表明只有以融合形式才能在大肠杆菌内稳定表达 ,为了获得的多肽Ｎ端不含任何外源氨基酸 ,以避免产生新的抗原性 ,国外多采…     

基于JK触发器的12归1计数器的设计与实现

触发器是数字电路的基本逻辑单元之一，也是构成各种时序电路的最基本逻辑单元。文中给出了基于JK触发器来设计十二归一计数器的设计和实现方法，并通过EWB软件进行了仿真。     

靶向YB-1的microRNA表达载体的构建及其对MB-MDA-231细胞增殖的影响

目的：构建靶向YB-1基因的microRNA表达载体,研究其对乳腺癌细胞MB-MDA231增殖的影响。方法：采用microRNA靶基因预测软件预测可能作用于YB-1基因的micro RNA,构建其过表达载体,利用Lipofectamine2000转染细胞MB-MDA231,荧光显微镜下评估转染效果,real-time ...     

人G250真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

目的构建人G250真核表达载体,建立稳定表达人G250的小鼠黑色素瘤细胞系。方法采用PCR方法扩增出人G250基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo-sig中,并加入酶切位点和FLAG标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-sig-FLAG-G250。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。RT-PCR及免疫荧光检测人G250在B16细胞中的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-sig-FLAG-G250重组质粒构建正确,最终建立的表达人G250基因的B16细胞系阳性率接近100%。结论成功构建了真核表达载体pIRES-neo-sig-FLAG-G250,建立的稳定转染人G250小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达G250基因。该稳定转染细胞系的建立为G250在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。     

人YB-1的高效原核表达及其标准蛋白与抗血清的制备

目的：构建YB1-GST表达系统,建立经济高效YB-1蛋白制备方法并制备其多抗。方法：将YB-1编码序列亚克隆至表达载体pGEX-6P-1;转化表达菌并确定可溶性表达最佳条件;采用GST亲和层析与层析柱上PSP酶切融合蛋白获取无标签蛋白的YB-1,经超滤浓缩及Western blot鉴定后,进-步真空冷冻于燥,制备YB...     

母亲还原叶酸载体1基因80G/A多态性与子女唐氏综合症易感性关系的meta分析

目的:探讨母亲还原叶酸载体1(RFC1)基因80G/A多态性与子女唐氏综合症(DS)易感性的相关性.方法:计算机检索PubMed、MEDLINE 、Web of Science、CNKI、CBM数据库,收集从建库至2012年9月间关于母亲RFC1基因80G/A多态性与子女DS易感性相关性的病例对照研究,对符合纳入标准的文献进行Meta分析.结果:共纳入7个研究,包括病例625例,对照767例.Meta分析结果显示:母亲RFC1基因80G/A多态性与子女DS易感性的相关性在各比较模型中差异无统计学意义[A Vs.G:OR=0.85,95％CI(0.73,1.00);AA Vs.GG:OR=0.73,95％CI(0.53,0.99)；AA Vs.AG+ GG:OR=0.82,95％CI(0.63,1.06)；AA+ AG Vs.GG:OR=0.81,95％CI(0.64,1.03)].基于人种的亚组分析结果显示,两者相关性无统计学意义.结论:目前的研究结果显示,母亲RFC1基因80G/A多态性与子女DS易感性无明显相关性.     

Hsa—miR-200a真核表达载体的构建及鉴定

目的：通过构建及鉴定miR-200a的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-miR-200a,为进一步研究miR-200a的功能奠定实验基础。方法：RT-PCR扩增pre—miR-200a基因序列,连接于表达载体pcDNA3．1（＋）中,对重组质粒双酶切鉴定并测序验证。结果：pcDNA3．1（＋）-miR-200a真核表达载体经酶切及测序鉴定正确。结论：pcDNA3．1（＋）-miR-200a真核表达载体构建成功,为下一步深入研究miR-200a的生物学功能和验证miR-200a的靶基因提供有效工具。     

Very Low Pressure Magnetron Reactive Ion Etching of GaN and Al<Subscript><Emphasis Type="Italic">x</Emphasis></Subscript>Ga<Subscript>1−<Emphasis Type="Italic">x</Emphasis></Subscript>N Using Dichlorofluoromethane (Halocarbon 12)

In this work we report on the magnetron reactive ion etch (MRIE) technology for gallium nitride (GaN) and aluminum gallium nitride (Al _x Ga_1−x N) using dichlorodifluoromethane (CCl₂F₂), commonly known as halocarbon 12, with etch rates greater than 1,000 and 840 ?/min, respectively. Magnetic confinement of a very low pressure (10⁻⁴ Torr range) radio frequency (RF) discharge generates high-density plasmas, with low sheath voltages at the bounding surfaces, and very high dissociation of the source gas. Furthermore, the very low pressure of the etch process is characterized by long mean free paths so that sputtering contamination is reduced. MRIE chemistry has been monitored in situ by means of mass spectroscopy. Finally, we report on the successful fabrication of an indium gallium nitride (In _x Ga_1−x N) blue light emitting diode (LED), whose fabrication sequence included the MRIE etching of GaN in CCl₂F₂.