靶向YB-1的microRNA表达载体的构建及其对MB-MDA-231细胞增殖的影响

目的：构建靶向YB-1基因的microRNA表达载体,研究其对乳腺癌细胞MB-MDA231增殖的影响。方法：采用microRNA靶基因预测软件预测可能作用于YB-1基因的micro RNA,构建其过表达载体,利用Lipofectamine2000转染细胞MB-MDA231,荧光显微镜下评估转染效果,real-time ...     

人二型大麻受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其真核表达

目的：构建含有人二型大麻素受体（CB2）基因的真核表达载体,并实现其在HEK293细胞的表达。方法：首先采用PCR方法从含有CB2基因的质粒pcDNA3.1（＋）-CB2中扩增获得人的CB2基因,再采用基因重组技术将CB2的DNA片段插入真核表达载体pIRES2-EGFP。将获得的pIRES2-EGFP-CB2重组子转染HEK293细胞,应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况,RT-PCR和报告基因检测CB2的表达情况。结果：酶切和测序结果验证真核表达载体pIRES2-EGFP-GB2构建成功。可在荧光显微镜下观察到转染HEK293细胞表达的绿色荧光;RT-PCR和双荧光素酶报告基因法检测证明CB2蛋白在真核细胞中成功表达;CB2受体激动剂JWH-015能显著逆转腺苷酸环化酶激动剂forskolin诱发的荧光素酶活性增加。结论：成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-CB2,为进一步研究CB2基因的生理学和病理生理学功能及调控机制奠定了实验基础。     

人白细胞介素12双亚基共表达pVAX1-IRES-hIL12载体的构建与表达

目的构建下游可以共表达人白细胞介素12(hIL12)双亚基的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-hIL12。方法通过搭桥PCR获得人白细胞介素12P35及P40双亚基的融合基因P35-F2A-P40,插入DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293-T细胞,ELISA检测融合基因的表达。结果酶切鉴定和序列分析表明融合基因与设计完全一致,融合基因在体外细胞培养液检测中获得分泌表达。结论该载体的成功构建可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。     

人DC-SIGN真核表达载体的构建及表达

目的构建含有FLAG标签的人DC—SIGN真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得含有FLAG标签的人DC—SIGN分子基因,将其插入到真核表达载体pIRES—neo中。构建的重组质粒pIRES—neO—FLAG—DC—SIGN转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及WesternBlot检测其表达情况。结果含FLAG标签的人DC—SIGN基因测序正确,PCR和酶切鉴定证明FLAG—DC—SIGN基因已成功连入真核表达载体pIRES—neo中;检测结果显示重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES—neo—FLAG—DC—SIGN,且在293T细胞中能有效表达,为后续DC靶向性疫苗研究奠定了基础。     

Hsa—miR-200a真核表达载体的构建及鉴定

目的：通过构建及鉴定miR-200a的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-miR-200a,为进一步研究miR-200a的功能奠定实验基础。方法：RT-PCR扩增pre—miR-200a基因序列,连接于表达载体pcDNA3．1（＋）中,对重组质粒双酶切鉴定并测序验证。结果：pcDNA3．1（＋）-miR-200a真核表达载体经酶切及测序鉴定正确。结论：pcDNA3．1（＋）-miR-200a真核表达载体构建成功,为下一步深入研究miR-200a的生物学功能和验证miR-200a的靶基因提供有效工具。     

人PSCA真核表达载体的构建及表达

目的构建含有信号肽及FLAG标签的人前列腺干细胞抗原(PSCA)真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得SIG-FLAG基因片段及人PSCA基因片段,插入到真核表达载体pIRES-neo中。构建的重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及RT-PCR方法检测其表达情况。结果PCR扩增出的SIG-FLAG及PSCA基因测序正确,酶切鉴定证明重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA构建成功;检测结果显示重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA,且在293T细胞中能有效表达,为后续转人PSCA基因细胞系的构建工作奠定了基础。     

显微镜技术在植物细胞自噬研究中的应用

细胞自噬是真核生物对细胞内物质进行循环利用的重要途径.在植物中已发现的细胞自噬有两种形式,即微自噬和巨自噬.自噬在植物体的生长发育、免疫应答、胁迫反应、衰老等过程中具有非常重要的作用.显微镜技术是研究细胞自噬的重要手段,与生物化学和分子生物学技术相结合,荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜,电子显微镜等技术的相互印证,大大地推动了对细胞自噬过程和机理的研究.本文扼要概述了显微镜技术在植物细胞自噬研究中的应用.     

人G250真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

目的构建人G250真核表达载体,建立稳定表达人G250的小鼠黑色素瘤细胞系。方法采用PCR方法扩增出人G250基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo-sig中,并加入酶切位点和FLAG标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-sig-FLAG-G250。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。RT-PCR及免疫荧光检测人G250在B16细胞中的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-sig-FLAG-G250重组质粒构建正确,最终建立的表达人G250基因的B16细胞系阳性率接近100%。结论成功构建了真核表达载体pIRES-neo-sig-FLAG-G250,建立的稳定转染人G250小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达G250基因。该稳定转染细胞系的建立为G250在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。     

带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶蛋白启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达

为了探讨家蚕Bombyxmori丝素蛋白重链信号肽序列在中部丝腺组织中是否具有功能活性,根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,构建了带有丝素重链基因fib-H信号肽的家蚕丝胶-1(ser-1)启动子(ser-HS),用ser-HS驱动DsRed基因构建了分泌型瞬时表达载体pSK-SerHS-DsRed-polyA。转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed。家蚕注射载体后,可在中部丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed已分泌到丝腺腔内。据此提出克隆的fib-H信号肽序列在家蚕中部丝腺组织中具有信号肽的功能。     

带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶蛋白启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达

为了探讨家蚕Bombyxmori丝素蛋白重链信号肽序列在中部丝腺组织中是否具有功能活性,根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,构建了带有丝素重链基因fib-H信号肽的家蚕丝胶-1(ser-1)启动子(ser-HS),用ser-HS驱动DsRed基因构建了分泌型瞬时表达载体pSK-SerHS-DsRed-polyA。转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed。家蚕注射载体后,可在中部丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed已分泌到丝腺腔内。据此提出克隆的fib-H信号肽序列在家蚕中部丝腺组织中具有信号肽的功能。     

基于DSP的两帧差分和改进半因果弱小目标检测

针对工业现场镁熔液中弱小目标实时检测的难题,提出一种基于DSP的两帧差分和改进半因果支持域相结合的弱小目标检测新方法。该方法以DSP图像处理平台为核心,DSP集成开发软件Code Composer Studio 3.3为辅助,首先采用改进的半因果支持域模型对两帧原始图像进行背景预测,背景预测图像与原始图像相减得到残差图像;其次残差图采用两帧差分和自适应阈值分割处理得到二值图像;最后对二值图像形态学处理,获得真实弱小目标。实验结果表明：在相同实验条件下,该方法对序列图像的检测性能与已有文献进行对比,可以快速有效地检测到弱小目标,同时检测到的目标面积增大1.3倍,预处理时间减少34%,检测总时间减少20%,为工业现场镁熔液弱小目标实时检测奠定了基础。     

Characteristics of body-tied triple-gate pMOSFETs

Body-tied triple-gate pMOSFETs were fabricated using bulk Si wafers and characterized. Process steps to implement the devices are explained briefly. Device characteristics of the triple-gate pMOSFETs were compared with those of the conventional planar channel device. While maintaining low off-leakage currents and threshold voltages similar to those of planar pMOSFETs in the parallel arrayed 30 000 transistors, the body-tied triple-gate MOSFETs showed about 74 mV/dec of subthreshold swing (92 mV/dec for conventional devices) and a drain-induced barrier lowering of 34 mV/V (92 mV/V for conventional devices). It was also addressed that I/sub SUB//I/sub D/ of the body-tied triple-gate is lower than that of the planar channel device.     

乙型肝炎病毒前-S2蛋白反式激活蛋白1基因的克隆化研究

目的应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒（HBV）前-S2蛋白反式激活新型靶基因，进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法以HBV前-S2蛋白表达质粒pcDNA3．1（-）-PreS2转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为平行对照，提取总RNA进行基因表达谱芯片分析。并克隆HBV前-S2反式激活作用的新的靶基因。结果获得该新基因的全长序列，并测序证实，因其可以被前-S2蛋白反式激活，故命名为前S2反式激活蛋白1（PS2TP1），已在GenBank中注册，注册号：AY561706。PS2TP1基因的编码序列全长为1113个核苷酸（nt），编码产物由370个氨基酸残基（aa）组成。结论HBV前-S2蛋白具有反式激活功能，调节宿主细胞某些基因的表达，从而改变宿主正常的应答水平，引起病变。     

Study on Wusan Granule Anti-tumor Related Target Gene Screened by cDNA Microarray

Wusan Granule, the Ⅲ new drug, is composed of such traditional Chinese medicines as Radix Polygorri Multiflori Praeparata, Radix Noginseng and the like. In 2001, State Drug Administration of China approved clinical trial for Wusan Granule. Wusan Granule possesses the superiority of safety and effectiveness. Its main functions are to supplement Qi and nourish Yin, and to dissipate mass. The animal experiment showing the recipe for Wusan Granule can not only suppress Lewis lung carcinom…     

Study on Wusan Granule Anti-tumor Related Target Gene Screened by eDNA Microarray

To screen Wusan Granule anti-tumor related target gene using cDNA microarray technique, both mRNA from Lewis lung carcinoma tissues treated by Wusan Granule and untreated control are reversibly transcribed to prepare cDNA probes which are labeled by Cy5 and Cy3. Then, the probes are hybridized to the mice cDNA microarray type MGEC-20S. After hybridization, the cDNA microarray is scanned by ScanArray 3 000 scanner and the data is analyzed by ImaGene 3 software to screen the differentially expressed genes. There are 45 differentially expressed genes including 18 known genes and 27 unknown genes between the two groups, and among them, 20 elevated genes and 25 reduced genes are identified. Additionally, the genes related to invasion and metastasis of malignant carcinomas are down-regulated and the genes related to apoptosis are up-regulated. The cDNA microarray technique is a high-throughput approach to screen the Wusan Granule anti-tumor related target genes, which allow us to explore the molecular biological mechanism on a genomic scale.     

临床血清循环miRNAs定量技术的建立

目的建立可靠的临床血清(浆)循环miRNAs定量技术。方法常规收集血清(浆)标本,mirVana PARIS试剂盒法抽提血清(浆)总RNA,采用DNaseI消化总RNA提取液,以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过TaqMan实时荧光定量PCR对U6及靶miRNAs进行检测。结果10份新鲜血浆总RNA浓度介于3.5～35.4ng/μl之间。对常规收集的400μl临床血清标本中U6、miR-16、miR-224均能实现特异扩增及定量,相应的平均Ct值约为30、25及32。6份不同留置时间血清标本总RNA浓度分别10.24和4.46ng/μl,定量PCR结果显示其中相应miR-16和miR-224的丰度却相对稳定。结论血清(浆)总RNA抽提及循环miRNAs定量切实可行。     

循环冗余校验在数据采集系统中的应用

在激光光幕坐标靶的测试中,采用FPGA作为坐标数的数据采集和存储装置,为了克服其占用资源多、扩展性不强等特点,采用FPGA处理I/O数据,并通过并行算法的CRC校验与主控FPGA交换I/O信息的方法实现数据的存储。为了保证并行I/O数据传输的可靠性,用Verilog实现了并行算法CRC-32校验编码,给出了正确的仿真结果。在实际应用中,该校验器速度快,占用资源少,该方法实现了对数据的有效传输,具有I/O扩展的高度灵活性,为大面积坐标靶的实现提供可靠的理论基础。     

大气层外弹道式目标表面温度场的有限元分析

获取目标表面温度场是进行红外特征分析的重要前提.根据大气层外弹道式目标温度场的轴对称分布特点,在柱坐标系内建立了二维瞬态热传递的有限元模型.模型中的自然边界条件包括太阳辐射、地球辐射、地球反照辐射和空间辐射.最后应用ANSYS软件计算了一种大气层外弹道式目标的表面温度场分布,数值计算表明:在目标飞行全程中,其表面温度在白天和夜晚分别约为34K和14K.该模型对于大气层外弹道式目标的红外探测、隐身和成像仿真具有重要价值.     

空间目标动态红外图像的计算机生成

介绍了大气层外空间目标动态红外图像仿真的实现。对空间目标进行了几何建模和运动特性建模。在此基础上,着重研究了空间目标的红外辐射特性,简化了通常使用的计算航天器温度的节点网络法,建立了空间目标外表面的红外热辐射模型,并将计算结果量化,形成灰度值。最后,利用计算机图形学的方法生成了动态红外图像。     

焦距固定红外探测系统定标实验

辐射定标数据在目标辐射特性数据测量和仿真试验应用中均有重要作用。首先对焦距固定红外探测系统外场定标方法进行了初步分析。采用近距离直接扩展源法、远距离扩展面源法和平行光管定标法对焦距固定红外探测系统进行了定标实验研究。实验发现:近距离直接扩展源法对旋转的红外探测系统不适用;远距离扩展面源法对路径辐射、路径透过率和环境辐射修正较为困难;平行光管定标法操作较为麻烦,但考虑目标特性数据的有效性和实用性,需考虑平行光管定标。文中对焦距固定红外探测系统辐射外场定标技术改造研究、红外目标特性测量系统研制具有较大的参考意义。