核桃蛋白酶法水解工艺条件研究

研究了核桃蛋白酶法水解的工艺条件,结果表明:蛋白酶种类对核桃蛋白水解作用影响较大,Alcalase 2.4L、Neutrase 0.8L对核桃蛋白水解作用较强;Alcalase 2.4L较适宜的酶解条件为酶与底物浓度比1000U/g,pH 8.0,温度60℃;Neutrase 0.8L较适合的水解条件为酶浓度为2000U/g,pH 6.0,温度45℃;Alcalase 2.4L、Neutrase 0.8L复合酶可以对核桃蛋白进行连续水解,并能提高核桃蛋白的水解度,产物肽链长度趋近于5。     

草鱼源抗氧化肽的响应面法优化制备及活性评价

用5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Neutrase 1.5MG、菠萝蛋白酶、PTN6.0及Alcalase 2.4L)分别酶解草鱼肉糜制备抗氧化肽,发现酶解产物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除力最强的分别是木瓜蛋白酶(IC50=2.66±0.41mg/mL)、Alcalase 2.4L(IC50=1.81±0.44mg/mL)及PTN6.0(IC50=8.57±0.32mg/mL)的酶解产物.将此三种酶进行复配,进一步用响应面分析法优化得到抗氧化肽的最佳制备条件为:酶浓度[E/S]=0.68 × 103U/g蛋白,酶解时间为3.83h,酶解温度为51.41℃,模型预测该条件下羟自由基清除力的IC50值为146.22μg/mL,而实际测定值为155.89±11.21μg/mL,与预测值吻合,且在最优条件下所得的酶解物具有较强的小鼠离体肝脂质过氧化抑制力及还原力.     

花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

复合酶解制备核桃多肽工艺条件的优化

采用复合酶酶解核桃蛋白,以水解度为考察指标,研究了底物质量浓度、复合酶配比、加酶量、pH、酶解温度、酶解时间对酶解的影响,并采用响应面法优化了Alcalase2.4L与胰蛋白酶复合酶解核桃蛋白的工艺参数。最佳酶解条件为:底物质量浓度40 g/L,Alcalase2.4L与胰蛋白酶的复合配比3∶1,pH7.4,酶解温度60.46℃,加酶量5.71%,酶解时间5.05 h。最佳条件下核桃蛋白水解度可达14.54%。     

复合酶解裂壶藻渣制备抗氧化肽的工艺研究

以提取油脂后的裂壶藻渣为原料采用蛋白酶进行酶解,以水解度、蛋白回收率及产物抗氧化活性为指标,确定最佳复合酶解工艺。结果表明,在p H为7.5,水解温度为50℃,料水比为1∶12(w/w),加酶量为0.5%(E/S,w/w)条件下,采用复合蛋白酶与Alcalase 2.4 L复配方式(1∶1,w/w)酶解裂壶藻渣6 h后的产物水解效果与抗氧化活性均优于其他单酶或复合酶解产物。在此条件下,酶解产物的水解度为11.15%,蛋白回收率为70.82%,羟自由基半抑制浓度IC50为1.656 mg/m L,还原力为1.417(浓度3 mg/m L),具有较好抗氧化活性。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白的酶解及超滤分离

采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S和Neutrase酶解罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白,探讨了超滤对酶解液分子质量分布和氨基酸组成的影响。结果表明,Alcalase2.4L、PTN6.0S酶解产物的蛋白质回收率、肽得率和水解度均较高,Alcalase2.4L∶PTN6.0S为1∶2添加时酶解效果最好,蛋白回收率为96.37%,水解度为13.24%,肽得率为83.13%。经超滤处理后,3000 u以下分子质量的肽段达到97.73%,比超滤前增加了5.37%,总氨基酸含量由84076.12 mg/100 g增加到97234.79 mg/100 g。     

酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性产物的研究

研究以高产低值的中国毛虾为原料,通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从风味酶、复合酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L等10种常用蛋白酶中筛选出Alcalase2.4L作为酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交实验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行SephadexG-15凝胶色谱分离(1.6cm×68cm),测定分子量分布并收集各吸收峰。结果表明:Alcalase2.4L在温度55℃、pH9.0、酶底物浓度比[E/S]为12.0AU/g、时间3h的水解条件下,酶解物对羟自由基清除率为84.6%,水解度为26.28%,平均肽链长为3.81。Alcalase2.4L酶解物凝胶色谱分离得到一个较强羟自由基清除活性的组分分子量范围是2259～869,IC50为0.385mg/mL,肽链长度在22.4～7.7之间。     

酶法制备燕麦麸蛋白ACE抑制肽的研究

采用碱溶酸沉法制备了燕麦麸蛋白,并利用7种商业化蛋白酶对其进行酶解以考察生产ACE抑制肽的效果,结果表明Alcalase为最适用酶。优化了Alcalase水解燕麦麸蛋白的工艺条件,在[S]=5.0%,E/S=1.33%,pH7.5,温度60℃条件下酶解90min,酶解产物的ACE抑制活性最强(IC50=0.291mg/mL),此时水解度为11.0%,产物的相对分子质量主要集中在880Da以下。     

杏仁蛋白水解物对血管紧张素转化酶抑制作用的研究

分别采用Protamex、Alcalase、Neutrase、Flavourzyme、Proleather FG-F、木瓜蛋白酶水解杏仁蛋白,利用高效液相色谱法测定水解物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性,以水解度(DH)和水解产物对ACE的抑制率为指标对酶解过程进行分析,并研究水解物的体外消化稳定性。结果表明,Proleather FG-F 和Alcalase 对杏仁蛋白有较好的水解效果,其水解物对ACE 抑制率较高,IC50 分别为1.24mg/ml 和0.98mg/ml。模拟胃肠消化实验结果表明,在消化酶的作用下杏仁蛋白水解物仍具有较强的ACE 抑制活性。