CpG-ODN对伤寒Ty21a疫苗诱导的细胞免疫应答的作用

目的探讨CpG-ODN对伤寒Ty2la疫苗诱导的细胞免疫应答的作用。方法分别用含10、30及50μgCpG-ODN的伤寒Ty21a疫苗免疫小鼠,各剂量组分别于第0、14和28d灌胃免疫3次,末次免疫后1周,采集小鼠脾细胞。流式细胞仪检测脾细胞MHC-Ⅱ类分子和CD40分子的表达;培养脾细胞,用ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-10的水平。结果不同剂量CpG-ODN的疫苗免疫组脾细胞CD40和MHC-Ⅱ类分子的表达水平均高于阳性对照组,且随着CpG-ODN剂量的增加,表达增强。加入不同剂量CpG-ODN的疫苗免疫组脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-10的水平均升高,且IL-10随着IFN-γ分泌水平的增加而降低。结论CpG-ODN可提高伤寒Ty21a疫苗诱导的Th1型免疫应答水平。     

氢氧化铝佐剂对肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的影响

目的评价氢氧化铝佐剂对肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法用含铝佐剂及无佐剂EV71灭活疫苗免疫BALB/c小鼠,并设生理盐水对照组。于加强免疫后7 d采血,进行小鼠脾单个核细胞(Mononuclear cell,MNC)的分离及CD8+T细胞的去除,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测经EV71疫苗原液或VP2-36刺激后的小鼠脾MNC分泌IFNγ水平;应用液相芯片技术(LUMINEX)检测经EV71疫苗原液刺激后的小鼠脾MNC分泌IL-2、IL-4、IL-5、IL-6和IL-10水平;采用体外微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体效价。结果 BALB/c小鼠经2次免疫后,铝佐剂疫苗组小鼠脾MNC的IFNγSFC值显著高于无佐剂疫苗组(P均<0.05);铝佐剂疫苗组分泌IL-6和IL-10水平显著高于无佐剂疫苗组(P均<0.05);铝佐剂与无佐剂疫苗组小鼠血清EV71中和抗体阳转率均达到100%,铝佐剂疫苗组诱导的中和抗体效价显著高于无佐剂疫苗组(P<0.01)。结论 EV71灭活疫苗可诱导BALB/c小鼠产生特异性IFNγ、IL-2、IL-6和IL-10应答,铝佐剂可同时增强EV71灭活疫苗的Th1和Th2类免疫应答。     

乙型肝炎表面抗原联合rmIL-12诱导的小鼠细胞免疫应答

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合重组鼠白介素-12(rmIL-12)对免疫小鼠诱导细胞免疫应答的影响。方法以不同给药方式、不同剂量的HBsAg联合rmIL-12免疫C57BL/6J小鼠,ELISA法检测小鼠血清及脾淋巴细胞中IFNγ及IL-4的水平。结果HBsAg+rmIL-12高剂量组免疫的C57BL/6J小鼠,其脾淋巴细胞IFNγ水平明显高于BALB/c小鼠;3种不同给药方式均可诱导C57BL/6J小鼠血清和脾细胞IFNγ水平明显升高,三者之间差异无统计学意义;HBsAg+rmIL-12高、中、低剂量组免疫C57BL/6J小鼠血清可诱导IFNγ水平明显升高,且呈剂量依赖性,脾细胞IFNγ水平在中、低剂量组均未产生效应,高剂量组明显升高,而对IL-4无明显影响。结论rmIL-12可显著增强HBsAg诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型,对于发展治疗性乙肝疫苗具有潜在的应用价值。     

结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答

目的检测结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平。方法将BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,分别进行免疫,免疫8周后处死小鼠,分离血清,ELISA间接法测定血清特异性抗PPDIgG抗体的水平,流式细胞分析仪检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化。脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平。结果H37Ra免疫小鼠血清中抗PPDIgG抗体、脾脏CD3+T细胞和CD4+T细胞的百分率、脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组,但与BCG组差异无显著意义。各组间脾脏CD8+T细胞、CD4+T/CD8+T比值差异均无显著意义。结论H37Ra免疫小鼠后,可以产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答,有望成为结核疫苗的候选抗原。     

肠道病毒71型灭活疫苗免疫原性比较

目的探讨新上市国产肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答特性。方法分别用我国3家企业生产的EV71灭活疫苗(V1、V2、V3)按0、14 d程序免疫BALB/c小鼠,采用体外微量中和试验检测血清单剂和2剂免疫后14 d的EV71中和抗体效价,ELISA法检测2剂免疫后14 d的小鼠脾单个核细胞(mononuclear cells,MNC)分泌细胞因子水平。结果 3家EV71疫苗1剂免疫后即可诱导90%以上小鼠产生EV71中和抗体阳转,V1疫苗组诱导的中和抗体效价显著高于V2和V3疫苗组,GMT分别为627.1、25.9和75.3(P0.01);2剂免疫后中和抗体阳转率均为100%,V1和V3疫苗组抗体效价相近,GMT分别为1 752.9和2 013.5(P0.05),均显著高于V2疫苗组(GMT为228.2,P0.001)。3家疫苗均可诱导BALB/c小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答,但细胞因子种类具有差异,V1和V3疫苗组诱导小鼠分泌IFNγ的水平显著高于V2疫苗组(P0.05);3个疫苗组间IL-2分泌水平差异无统计学意义(P0.05),IL-4和IL-5分泌水平与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);V2疫苗组诱导小鼠分泌的IL-6水平显著高于V3疫苗组(P0.01);V3疫苗组诱导小鼠分泌的IL-10水平显著高于V1和V2疫苗组(P0.05)。结论 3家EV71疫苗均可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,但呈现出不同的免疫应答特征。     

耻垢分枝杆菌与卡介苗作为载体在鼠结核病治疗中的作用比较

目的比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(BCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用。方法分别以不同剂量的MS和BCG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用。以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS/IL-12重组BCG治疗6次,于第6次治疗后7d处死小鼠,检测肺、脾荷菌量、血清IL-12和IFN-γ水平、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平及肺、脾组织中颗粒溶素表达,并观察小鼠肺组织病理改变。结果重组MS和重组BCG组器官荷菌量明显低于MS和BCG组;重组MS和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于MS和BCG组,MS和BCG组明显高于生理盐水组;重组MS和重组BCG组脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平明显高于其他组;MS与BCG组比较,重组MS与重组BCG比较,荷菌量、病理变化、肺、脾中的IL-12和IFN-γ水平差异均无显著意义;淋巴细胞中的IFN-γ和TNF-α水平,MS与BCG组差异有显著意义,而重组MS与重组BCG组差异无显著意义;重组MS和重组BCG组在肺、脾中均有颗粒溶素表达;MS所致病变比相同剂量BCG轻。结论MS与BCG一样,可将要表达的基因靶向递送到相应的组织,并诱导特异性细胞免疫,同时其在体内的副作用低于BCG,因此可作为良好的有机载体。     

冻干甲型肝炎减毒活疫苗诱导的人体特异性免疫应答

目的观察人体接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)后产生的特异性免疫应答。方法选择16名血清甲型肝炎抗体阴性的健康志愿者,接种1针冻干甲型肝炎减毒活疫苗,接种前和接种后2、4、8、12、156周(3年)采血,采用ELISA检测血清抗HAVIgG抗体;采用流式细胞术检测全血各淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分率及表达细胞因子IFN-γ和IL-4的阳性细胞百分率;采用ELISPOT法检测外周血淋巴细胞分泌IFN-γ的斑点形成细胞(SFC)。结果接种疫苗后2周,表达IL-4的阳性细胞百分率与接种前相比显著升高;接种后4周,CD4+淋巴细胞亚群百分率与接种前相比显著升高;接种后8周,抗体100%阳转;接种后3年,抗体和分泌IFN-γ的SFC有一项以上阳性者占85.7%(12/14)。结论接种冻干甲型肝炎减毒活疫苗,能诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。     

IFN-γ、IL-32、IL-1β在慢性阻塞性肺疾病中的临床意义

目的探讨干扰素-γ、白介素-32和白细胞介素-1β在慢性阻塞性肺疾病患者血清中的表达及临床意义。方法 ELISA法检测健康对照组、COPD稳定组、AECOPD组血清中IFN-γ、IL-32和IL-1β的浓度。结果 AECOPD组的IFN-γ、IL-32和IL-1β的浓度水平显著高于健康对照组、COPD稳定组(P<0.01)。COPD稳定组较健康对照组的IL-32、IL-1β的浓度水平均显著升高(P均<0.05);COPD稳定组较健康对照组的IFN-γ水平无显著性差异(P>0.05)。结论 IFN-γ、IL-1β、IL-32反馈环可能参与了COPD患者急性加重的炎症反应。     

小鼠接种重组乙型肝炎疫苗引起的细胞因子释放反应

目的观察小鼠接种重组乙型肝炎疫苗(rHB)后,脾T淋巴细胞释放细胞因子的免疫反应。方法80只BALB/c小鼠随机分为4组,1组小鼠接种5μg佐剂,2、3、4组小鼠分别腹腔接种0·65、1·25和5·0μg的rHB,其中一半小鼠2周后加强免疫1次。分别在初次免疫后4周和加强免疫后2周,分离小鼠脾T淋巴细胞,体外用rHB刺激,检测释放IL-2及IFN-γ的水平。结果单次免疫后和加强免疫后各组IL-2和IFN-γ均显著升高,且有随剂量增加而升高的趋势。结论小鼠接种rHB后,脾T淋巴细胞分泌IL-2及IFN-γ显著增加,并与接种剂量密切相关。     

二代测序法分析儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液中Th1/Th2的平衡

目的应用二代测序技术(next-generation sequencing,NGS)检测肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中,Th1细胞因子IFNγ、Th2细胞因子IL-4的表达水平及免疫应答的平衡变化趋势。方法提取支气管异物、MPP轻症及重症患儿BALF样本,应用NGS技术中转录组测序技术进行深度测序,根据基因表达量检测IFNγ、IL-4表达水平,并计算IL-4/IFNγ比值;采用Real-time q PCR法对样本的IFNγ、IL-4、IL-4/IFNγ相关趋势进行验证。结果 MPP轻症患儿BALF中IL-4、IFNγ表达水平及IL-4/IFNγ比值均较支气管异物对照组升高,MPP重症患儿BALF中IL-4、IFNγ水平较轻症组和支气管异物对照组升高,IL-4/IFNγ比值较支气管异物对照组升高,较轻症组有所下降。结论在MPP患儿免疫反应中,MPP轻症及重症患儿BALF中两类细胞因子均有所升高,IL-4/IFNγ比值变化趋势表明Th1/Th2存在失衡现象,MPP轻症组、重症组与支气管异物对照组相比,平衡向Th2移动,因此,平衡以Th2反应占优势为主。     

LFA-1基因对胶原诱导小鼠关节炎关节局部引流淋巴结T细胞活性的影响

目的探讨淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)在类风湿性关节炎形成中的作用。方法采用Ⅱ型胶原诱导小鼠关节炎模型,观察LFA-1基因敲除小鼠引流淋巴结T细胞增殖和细胞因子水平。结果LFA-1基因敲除小鼠在应用Ⅱ型胶原免疫后,引流淋巴结和关节局部Th1型细胞因子IFN-γ和IL-12p40mRNA水平明显低于野生型对照小鼠,Th2型细胞因子IL-4mRNA水平无明显变化。LFA-1基因敲除小鼠引流淋巴结来源的CD4+T细胞在体外受Ⅱ型胶原刺激后,其特异性增殖和细胞因子IFN-γ的产生也明显低于野生型对照小鼠。结论LFA-1基因缺失抑制了辅助性T细胞的活化和向Th1方向的分化,进而抑制关节炎的发生。     

非肥胖型糖尿病小鼠胸腺异位基因及MHC-Ⅱ类分子的表达

目的研究非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胸腺异位基因及MHC-Ⅱ类分子表达水平,探讨胸腺异位基因及MHC-Ⅱ类分子在中枢免疫耐受中的作用。方法对NOD小鼠用GA-PAP试剂盒检测血糖;尿糖试纸检测尿糖;ELISA间接法检测IAA的含量;光镜观察胰岛的组织学改变情况;MTT法检测胸腺T淋巴细胞功能;ELISA夹心法检测胸腺细胞IL-4、IFN-γ分泌水平;流式细胞术检测胸腺细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平;RT-PCR法检测胸腺异位基因的表达水平。结果NOD小鼠血糖水平与正常BALB/c小鼠差异无显著意义,尿糖水平均为阴性;NOD小鼠自身抗体水平与正常BALB/c小鼠差异无显著意义;与对照组相比,NOD小鼠胰岛数量减少,分布稀疏,胰岛细胞数亦减少,同时有大量炎细胞浸润;NOD小鼠胸腺细胞对ConA刺激的应答水平与正常BALB/c小鼠差异无显著意义;NOD小鼠胸腺细胞IFN-γ的分泌与正常BALB/c小鼠差异无显著意义,而IL-4的分泌能力明显低于正常BALB/c小鼠;NOD小鼠胸腺内Insulin水平显著减少,而GAD67和PLP水平无显著变化;NOD小鼠MHC-Ⅱ类分子的表达水平明显下降。结论NOD小鼠在糖尿病发病前期存在着胸腺异位基因及MHC-Ⅱ类分子表达缺陷,表明胸腺异位基因及MHC-Ⅱ类分子在中枢免疫耐受中起着重要作用。     

重组人IL-12真核表达载体的基因佐剂功能

目的探讨重组人IL-12真核表达载体(pcDNA6-p70)对核酸疫苗(HCMV pp65基因重组腺病毒,Adeno-pp65)的基因佐剂功能。方法pcDNA6-p70与Adeno-pp65共免疫BALB/c小鼠,每2周1次,共4次,同时设立Adeno-pp65对照组及生理盐水对照组。于初次免疫后第6周末尾静脉取血,第9周处死小鼠,分离脾细胞,分别检测细胞内细胞因子水平、CTL杀伤活性、特异性淋巴细胞增生和IFN-γ水平,并观察pcDNA6-p70对小鼠的安全性。结果共免疫组HCMV特异性CD4/IFN-γ、CD8/IFN-γ双标记阳性细胞的百分率均高于Adeno-pp65组及生理盐水对照组,差异均有显著意义;其CTL杀伤活性、HCMV特异性淋巴细胞增生水平及脾淋巴细胞特异性IFN-γ释放水平均高于Adeno-pp65组和生理盐水对照组,差异均有显著意义。pcDNA6-p70肌肉注射昆明小鼠,其体温、体重及一般情况与对照组差异均无显著意义。结论pcDNA6-p70与Adeno-pp65共免疫可提高核酸疫苗的免疫效果,且具有较好的安全性。     

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)诱导小鼠体液及细胞免疫应答

目的评估甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫学效果。方法用甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)分别经腹腔免疫BALBc小鼠后,用ELISA法检测血清中抗HAVIgG、TNFα、IFNγ和IL2;用流式细胞仪对全血中T细胞亚群分类;3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖。结果减毒活疫苗组在初免后诱导的体液和细胞免疫水平均低于灭活疫苗组,加强免疫后,与灭活疫苗相当。灭活疫苗组IFNγ的峰值出现时间较减毒活疫苗组晚,但水平较高。结论两种疫苗均可诱导体液和细胞免疫应答,减毒活疫苗进行加强免疫后可诱导更好的系统免疫应答。     

Oral Administration of Bovine Milk from Cows Hyperimmunized with Intestinal Bacterin Stimulates Lamina Propria T Lymphocytes to Produce Th1-Biased Cytokines in Mice

The goal of this study was to examine the effects of oral administration of bovine milk from cows hyperimmunized with a proprietary bacterin (immune milk “Sustaina”) on mucosal immunity in the intestine of adult mice. C57BL/6 mice were orally given immune or control milk for two weeks, and then lymphocyte population and the cytokine production in lamina propria of colon in normal mice and mice induced colitis by dextran sulphate sodium (DSS) were detected. We found that the levels of IFN-γ and IL-10 increased, but the levels of IL-17A and IL-4, decreased in lamina propria of colon in immune milk-fed mice as compared with those in control milk-fed mice. Interestingly, oral administration of immune milk partially improved the acute colitis induced by DSS. The levels of TNF-α and IFN-γ increased, but IL-6, IL-17A and IL-4 decreased in lamina propria (LP) of colon in immune milk-fed mice with DSS-induced colitis. Our results suggest that immune milk may stimulate CD4⁺ T cells to polarize towards a Th1 type response, but contrarily suppress Th17 and Th2 cells responses in large intestinal LP of mice. The results indicate that this kind of immune milk has is able to promote the maintainance of intestinal homeostasis and enhance protection against infection, and could alleviate the symptoms of acute colitis in mice.