筛选诱导烟草对烟草花叶病毒产生系统抗性的真菌

真菌产生的代谢产物可激活烟草体内抗病防御相兲酶的表达,诱导烟草产生系统抗性,增强烟草对病毒的抗性。本研究对38种植物病原真菌及45种分离自（恩施、襄樊）土壤、烟叶中的真菌进行了过敏性反应实验和系统抗性实验。结果表明,筛选出了对烟草花叶病毒抗性较强的真菌。在烟草上产生过敏反应的菌株有32个;系统抗性实验中对烟草花叶病毒抑制率较高的菌株有16个,其中,油茶炭疽菌、棉花黄萎病菌、esf-13、esf-3、小麦赤霉、立枯丝核菌、E1、esf-6、xfpf-6等菌株的抗性较高,枯斑抑制率均大于70%,最高可达96.44%。抗性较高的真菌可开发为烟草病毒病诱抗剂。     

烟草增香细菌的筛选及其作用效果

为研究烟草增香细菌对烟叶吸食品质的影响,以云南主要烟草种植区的根际土壤和新鲜烟叶为微生物分离源,对菌株产酶和降解功能进行筛选,并对烟丝发酵样感官质量和香味成分进行分析。结果表明,从供试云南微生物分离源样品中分离、筛选到一株可同时产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶,并可降解β-胡萝卜素的复合功能型菌株YN14;与对照相比,菌株YN14发酵样的烟气细腻度有改善,香气质和香气量均有增加,甜感有增加,刺激减小;GC/MS分析结果也表明,YN14发酵样烟气中香味物质含量明显增加。菌株YN14经鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）细菌。综上所述,芽孢杆菌YN14具产多种酶和降解功能,并可明显改善烟草吸食品质。     

烟草秸秆废弃物中纤维素降解菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

为筛选出具有解磷释钾能力的高效纤维素降解菌,从烟草秸秆中分离出21株纤维素降解菌,并通过解磷释钾能力测定、刚果红染色比较透明圈直径和菌落直径比值大小、羧甲基纤维素酶活性与滤纸酶活性测定,筛选出1株具有高效降解纤维素和解磷释钾功能的菌株。经形态学和分子生物学鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为Bacillus subtilis SL-3A。采用单因素试验分别对培养基组分和培养条件进行优化结果表明,SL-3A产纤维素酶较佳条件:蛋白胨为氮源、羧甲基纤维素钠为碳源,C/N比为2∶1;接种体积分数为8%,发酵培养温度为37℃,初始pH为7,发酵培养转速为200 r/min。在培养基配方和培养条件优化后,其CMCase与FPase分别为169.25 U和44.99 U。SL-3A菌株经液态发酵15 d时烟草秸秆降解率为20.85%。烟草秸秆堆肥初步试验结果显示,秸秆粗纤维降解率34.62%,有效磷含量增加0.13%,有效钾含量增加2.12%。     

烟草疫霉生防细菌的筛选及鉴定

为获得防治烟草黑胫病的生防菌株,通过对峙平板法,从烟田土壤中分离出1株对烟草疫霉具有很好抑菌作用的细菌B40-3.培养3 d后,该菌株对烟草疫霉抑菌带宽度为0.9 cm,抑菌圈半径为2.3 cm,并对其余12种植物病原真菌有很好抑制作用.该菌株在LB液体培养基中,37 ℃,210 rpm条件下培养40 h,OD值达到最大值.依传统生理生化反应鉴定,B40-3属于枯草芽孢杆菌.     

苯甲酸降解菌的分离鉴定及其对烤烟幼苗生长的影响

为降低烟草连作对烟叶产量和品质以及烟草生长发育带来的不良影响,通过平板筛选和摇床复筛,从烤烟根系分泌物中筛选出一株能高效降解苯甲酸的菌株。结果表明,根据rDNA-ITS的扩增及序列分析、培养特征及形态特征观察初步鉴定该菌株为黄曲霉(Aspergillus flavus);该菌株培养15 d内,在0~800 μmol/L苯甲酸浓度范围内能够正常生长,800~1600 μmol/L苯甲酸浓度范围内生长受到一定程度抑制;该降解菌在以苯甲酸为唯一碳源的800 μmol/L浓度LBA培养基中菌株干重、降解率均达到最大,菌株干重为0.765 g,降解率为19.98%;菌株在培养至第9天时降解速率达到最快,为8.5 mg/d;烤烟幼苗生长过程中施加降解菌液能在一定程度上降低根系分泌物的抑制作用。该降解菌株在盆栽试验中能够降低根系分泌物对烤烟的自毒作用,使微生物菌株降解烤烟自毒物质来克服连作障碍成为可能。     

烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)细胞壁降解酶活性分析及其致病作用

为揭示烟草靶斑病菌细胞壁降解酶的致病机理,进行了烟草靶斑病菌细胞壁降解酶活性变化、产酶条件及对叶片损伤作用的研究.结果表明:烟草靶斑病菌在烟草活体内、外均可产生果胶酶及纤维素酶,其中烟草组织活体外以多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)活性最高,而在烟草活体内羧甲基纤维素酶(Cx)和β-葡萄糖苷酶活性最高,且强致病力菌株的产酶能力强于弱致病力菌株;产酶条件研究表明,培养10d产生的Cx和β-葡萄糖苷酶的活性最强,而培养12d产生的PG、PMG、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)和果胶甲基反式消除酶(PMTE)的活性最强;最适宜产生CWDEs的条件为250下,pH5～6连续黑暗的静止培养环境;烟草靶斑病菌产生的细胞壁降解酶可导致烟草叶片明显受损,其损伤作用大小表现为混合酶明显高于单一酶,且果胶酶对烟草叶片的损伤作用高于纤维素酶.     

烟碱降解菌的筛选与初步鉴定

为分离具有高效降解烟碱能力的菌株,以湖南省浏阳县烟草土壤为菌株来源,使用选择性培养基进行初筛和复筛,并对高效降解菌株做菌落形态、个体形态和生理生化鉴定。通过试验,初筛到13株能降解烟碱的菌株,复筛得到降解烟碱活性最高的细菌菌株F4。它能在以烟碱为唯一碳源和氮源的培养基中生长良好,在液体烟碱培养基中培养14 d,能将培养液中的烟碱降解87.51%。根据形态特征和理化分析结果,初步鉴定该菌为肠杆菌科摩根氏菌属摩氏摩根氏菌亚种(Morganella fulton morganella morganii subsp)。      

烟草根结线虫病生防菌株TB-68的鉴定及室内防效测定

为寻求新的烟草根结线虫生防资源,通过形态学特征和16S rDNA分析对前期分离到的1株根结线虫生防细菌TB-68菌株进行种类鉴定,并通过室内离体活性测定和盆栽试验研究了TB-68菌株对烟草根结线虫病的防治效果.鉴定和研究结果显示,TB-68菌株为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),该菌株发酵滤液原...     

烟草甲幼虫高毒力病原真菌的筛选

为筛选出对烟草甲2龄幼虫具有较好防治效果的病原真菌,在实验室条件下,采用浸渍法测定5株蜡蚧轮枝菌和5株球孢白僵菌对烟草甲2龄幼虫的毒力,筛选出2株对烟草甲2龄幼虫具有高毒力的白僵菌菌株Bb05和Bbr81,将2株菌株配置成不同浓度的孢子悬浮液,测定其毒力并对Bb05菌株的侵染过程进行观察。结果表明,接种孢子浓度1.0×10⁸mL^-1条件下,菌株Bb05处理烟草甲的累积死亡率最高,达77.78%,LT₅₀为8.18 d;菌株Bbr81处理烟草甲的累积死亡率为74.44%,LT₅₀为7.60 d。用不同浓度孢子悬浮液处理烟草甲2龄幼虫后,其累积死亡率随孢子浓度和接种时间的增加而增加,Bb05菌株的LC₅₀为8.3×10⁷ mL^-1,菌株Bbr81的LC₅₀为1.2×10⁷ mL^-1。筛选所得的2个菌株对烟草甲虫2龄幼虫的毒力较高,具有一定的开发应用潜力。     

湖北省烟草靶斑病病原鉴定及其菌丝融合群遗传分化研究

2020—2021年湖北烟区爆发新型烟草叶部病害,本研究对病原菌进行分离培养、形态观察、镜检菌丝和科赫法则验证,并提取30个菌株的DNA使用通用引物ITS1/ITS4进行rDNA-ITS序列的PCR扩增,及MEGA-X软件进行基因序列比对及系统发育树构建,同时以Rs1F2/Rs2R1为引物,进行30个菌株的rDNA-ITS基因的PCR专化性鉴定。结果表明,该病害病原菌为立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kühn）,30个菌株序列都隶属于R. solani AG-3融合群且均具有AG-3融合群所特有的504 bp片段。因此,确定该病害为烟草靶斑病。这是首次从湖北省烟草产区分离鉴定到该病菌。     

广西烟草内生细菌的动态分布及其对烟草疫霉的拮抗作用

从广西百色市的9个烟草品种中分离出470株内生细菌菌株,经常规细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析,获得的菌株分别属于肠杆菌属(Enterobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、寡养单胞菌属(Stenotro-phomnas)和假单胞菌属(Pseudomonas),其中土壤杆菌属和肠杆菌属为烟草内生细菌中的优势种群。烟草内生细菌的类群和数量随烟草种植地点、品种、器官和生育期的不同而不同。烟草内生细菌在根部数量最多,其次是茎和叶。内生细菌的总量从缓苗期到旺长期增加,之后显著下降。从470株烟草内生细菌菌株中筛选出对烟草疫霉有拮抗作用的菌株56株,其中芽孢杆菌菌株Y10的抑制效果最好,抑制率达91.48%,室内盆栽防治效果为68.72%。     

烟草CYP82E4v1基因调控降烟碱的生物合成

为明确烟草烟碱去甲基酶基因CYP82E4v1在降烟碱生物合成中的调控作用,通过农杆菌介导,将含CYP82E4v1超量表达的植物表达载体pLF-35S-CYP和干涉表达的植物表达载体pLF-35S-CYPi分别遗传转化烟草品种K326,共获得转基因植株61株,其中超量表达植株42株,干涉表达植株19株。HPLC测定表明,超量表达植株降烟碱含量比对照烟草品种K326高88.9%,而干涉表达植株降烟碱含量比对照烟草低61.1%,表明CYP82E4v1的超量表达能提高烟草降烟碱含量,该基因的表达受到抑制时降烟碱合成受阻。Real-Time PCR分析结果表明,超量表达植株中CYP82E4v1基因的表达为对照烟草的20倍以上,在干涉表达植株中其表达量仅为对照烟草的6%。同时,在干涉表达植株中其他降烟碱合成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑制。此外,在构建植物表达载体时,引入衰老基因SAG12启动子驱动重组酶基因FLP的"Gene-deletor"表达元件,在烟草叶片发育后期以清除转基因植株中外源GUS∷NPT II基因,从而获得了降烟碱含量低且不含筛选标记基因的转基因烟草植株。     

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。     

烟草内生细菌对烟草病害的拮抗和防治作用

利用烟草内生细菌进行了防治烟草黑胫病的试验,获得了对烟草黑胫病有较好防效的内生细菌菌株118、57、93等,其防效分别达69.23%、61.53%和65.38%。其中118菌株具有较广的抗菌谱,对几种主要的烟草病害的病原菌均有拮抗作用,对烟草疫霉菌有明显的拮抗作用,而且对烟草有促生效果,鲜重增产率为13.10%。     

云南省烟草疫霉生理小种的初步鉴定

病菌生理小种在不同地区的分布有各自特点, 研究各地的生理小种特点可有的放矢安排品种, 达到防病、抗病的目的。就云南省烟草黑胫病病原进行了分离纯化, 采用根部创伤接种法对部分病原进行了致病性测定与生理小种鉴定。结果表明, 2004年分离的39株烟草黑胫病菌株致病率为22.22%~100.00%, 平均发病率为93.73%, 病情指数2.8~86.1。2005年分离的45株烟草黑胫病菌株致病率为66.67%~100.00%, 平均发病率为96.05%, 病情指数16.7~97.2。2006-2008年对55个地方代表菌株进行生理小种鉴别, 发现55个菌株在不同烟草品种上存在致病力分化, 对同一品种致病力存在差异;确定有50个菌株为0号生理小种, 占供试菌系的90.91%, 说明云南省烟草黑胫病菌优势菌为0号生理小种, 在本次鉴定的供试菌株中未发现1、2、3号生理小种。     

烟草黑胫病拮抗菌XF10的筛选与鉴定

为丰富烟草黑胫病拮抗细菌菌株资源,有效利用生物防治方法控制烟草黑胫病,在烟草黑胫病发病严重地块的健株根际周围选取土壤样品300份,通过喷施病原指示菌快速初筛、平板对峙培养复筛等方法获得了对烟草黑胫病菌有明显拮抗作用的生防菌株XF10。该菌株菌落为圆形,表面光滑凸起,边缘整齐,可产生橙色色素。经形态特征观察、生理生化特性观察、BIOLOG自动微生物鉴定系统鉴定和16S rDNA序列分析,结果显示:该菌株与假单孢菌属的多个绿针假单胞菌序列的同源性达到99%,为假单孢菌属绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)。XF10菌株的菌液以及胞外代谢产物粗提液对烟草黑胫病菌的抑制率均达80%以上,且该菌株的挥发性代谢产物能有效抑制烟草黑胫病菌菌丝生长,抑制率为86%。     

无致病力青枯菌株对烟草青枯病的控制作用

为进一步揭示无致病力菌株对烟草青枯病的控病机理,以无致病力青枯菌株为材料,针对烟草青枯病进行了温室控病及田间小区试验,并通过抗药性标记测定其抗药性突变菌株在烟株体内的定殖状况,同时分析处理后烟株体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化。结果显示:无致病力菌株Tbw1-7-3在温室盆栽条件下对青枯病的相对防效达89.4%,其田间防效在发病初期10~20 d与药剂农用链霉素处理间无明显差异,且其抗药性突变株在烟株根表和体内可短暂定殖。同时菌株Tbw1-7-3能提高寄主中PAL、POD和PPO 3种酶活性及促进病程相关蛋白(PRP)的积累。无致病力菌株对烟草青枯病具有较好的控制作用,以菌株Tbw1-7-3的防效最优。田间试验也显示Tbw1-7-3菌株在发病初期具有良好的控病效果。无致病力青枯菌株的控病机理可能兼有占位效应及诱导抗病性。      

云南烟草香气研究

烟草的香气对评价烟草的等级起着重要用,现代研究表明烤烟中具有香气的物质共12类,328种化合物。不同等级的烟草在定性上相似,在定量上有差异,不同的调制方法对烟草香气也产生明显的影响。目前烟草中香气成份的研究主要集中在棕化反应产物和类胡萝卜素、类西柏烷和赖白当类的降解产物。C·R·ENELL等总结了这类降解     

烟草灰霉病复合生防细菌的筛选

采用平板对峙法和孢子萌发法,测定470株烟草内生细菌对烟草灰霉病菌的抑菌活性,初筛出抑菌作用较强的27株菌株;利用烟叶组织法进行复筛,获得防治效果超过50%的12株菌株,属于芽孢杆菌属或假单胞菌属;测试了7株生防菌之间的亲和性,除菌株Y98外,其他菌株之间均表现亲和;根据菌株亲和性及生防效果,选择5株生防菌株进行混配,测定其对烟草灰霉病的防治效果,发现芽孢杆菌菌株Y11与假单胞菌菌株Y141在其比例为2:1时的防效较好,且高于单菌株处理。      

邻苯二甲酸二丁酯降解菌对烟草青枯病的抑制作用

为有效防治烟草青枯病,采用细胞培养和毛细管法研究了烟草化感自毒物质邻苯二甲酸二丁酯对青枯菌的影响及趋化诱导效应,同时采用梯度训化法筛选邻苯二甲酸二丁酯降解菌,并通过盆栽试验测定了邻苯二甲酸二丁酯降解菌处理后的烟草青枯病发病率。结果表明,邻苯二甲酸二丁酯对青枯菌具有趋化诱导作用,并且在低浓度条件下能促进青枯菌生长;筛选的邻苯二甲酸二丁酯降解菌(Acinetobacter sp. Ed2)在土壤中对邻苯二甲酸二丁酯降解效率为51.17%;土壤中添加邻苯二甲酸二丁酯的处理(T1),与对照(CK)相比青枯菌数量显著提高59.89%;经邻苯二甲酸二丁酯降解菌Ed2处理(T2)后,与对照和T1处理相比,土壤中青枯菌数量分别降低84.63%和90.38%,青枯病发病率分别降低52.23%和136.42%。因此,利用邻苯二甲酸二丁酯降解菌消耗土壤中的邻苯二甲酸二丁酯,既减少青枯菌的营养供给,又截断邻苯二甲酸二丁酯对青枯菌的趋化诱导作用,从而显著降低了青枯病发病率。