液液萃取结合气质联用技术测定山药酒中萜烯类化合物

通过对顶空固相微萃取(headspace-solid phase microextraction,HS-SPME)、同时蒸馏萃取(simultaneous distillation-extraction,SDE)和液液萃取(liquid-liquid extraction, LLE)3种提取方式的选择、优化,建立了液液萃取结合气相色谱-质谱对山药酒中萜烯类化合物的分析方法。经方法学评估,各萜类化合物线性良好(R~2≥0.993 6),定量限为1.86～89.88μg/L,相对标准偏差小于1.7%,加标回收率为92.68%～103.21%。采用该方法对市售3类山药酒进行分析,准确定量了10种萜烯类化合物,包括5种单萜类化合物、3种倍半萜类化合物以及二萜类化合物和三萜类化合物各1种;各类山药酒中萜烯类化合物组成相近,含量存在差异,与原料产地和加工工艺具有一定的相关性,含量较丰富的长叶松烯、(-)-龙脑、香茅醇和角鲨烯等赋予了山药酒独特的风味及保健功效,为深入研究山药酒的活性成分提供数据支撑。     

董酒中萜烯类物质的研究

应用正相色谱技术串联气相色谱-质谱法(GC-MS)检测董酒中萜烯类化合物。通过液液萃取(LLE)分离得到董酒中性/碱性组分。中性/碱性组分过硅胶柱,并分别用戊烷-乙醚混合液(体积比分别为100∶0、95∶5、90∶10、80∶20、70∶30和50∶50)和甲醇洗脱后得到7个组分,应用GC-MS对各个组分进行分析。通过质谱谱库检索、标准品的保留指数(RI)比对以及参考文献的保留指数(RIL)比对分析,共鉴定出52种萜烯类化合物。通过峰面积百分比分析,发现p-茴香醛浓度最高(27.21%),其次是白菖油萜(11.31%),δ-杜松烯(7.38%),卡拉烯(5.11%),樟脑(4.13%),(-)-龙脑(3.65%),α-雪松烯(3.29%)等。这些萜烯类化合物很少在白酒中检测到,推测其来源于制曲过程中添加的中草药。     

麦麸中烷基间苯二酚诱导HepG2细胞自噬和凋亡

采用制备色谱从麦麸中制备烷基间苯二酚同系物(alkylresorcinols,ARs),研究其诱导HepG2细胞自噬和凋亡作用。结果表明:经液相色谱-质谱确认制得的烷基间苯二酚为C19:0、C21:0同系混合物;细胞毒性实验结果显示,10～320 μg/m L的ARs能显著抑制Hep G2细胞生长(P<0.05、P<0.01、P<0.001),且呈剂量依赖效应;与对照组相比,160 μg/m L ARs作用24 h,Hep G2细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),剪切型Caspase3、Bax/Bcl-2蛋白表达高度显著升高(P<0.001),Beclin-1、LC3II蛋白表达极显著升高(P<0.01),p62蛋白表达极显著降低(P<0.01)。这些结果表明,ARs可以诱导Hep G2细胞自噬,激活Caspase通路诱导Hep G2细胞凋亡,抑制Hep G2细胞生长。     

阿魏酸对CT-26的细胞凋亡和细胞自噬相关通路的影响

为了深入明晰酚酸类物质阿魏酸的具体功能机理,以其对CT-26细胞自噬、凋亡、细胞增殖和迁移为评价手段,考察阿魏酸对细胞生理活性的影响,阐明酚酸类物质阿魏酸具体作用机理,为中草药中有效成分阿魏酸的具体功效提供实验数据和理论依据。研究中采用不同浓度梯度的阿魏酸处理CT-26细胞,考察阿魏酸对CT-26细胞生理活性的影响。在一定浓度范围内,阿魏酸能够抑制CT-26细胞的增殖、提高细胞自噬水平,同时在一定程度上抑制CT-26细胞的迁移能力。进一步的研究表明,阿魏酸通过促进凋亡通路上游的caspase3蛋白剪切为Cleaved caspase3,进而调控凋亡关键蛋白Bcl-2和BCL2-Associated X蛋白(Bax)的比值,最终促进了结肠癌细胞凋亡,以此保护细胞的正常生理活动。阿魏酸可通过促进细胞自噬并调控凋亡通路Bcl-2来抑制细胞活性,进而促进细胞凋亡。研究结果为明确中草药中有效成分阿魏酸的生物活性物质作用提供了实验数据。     

牛肉宰后成熟过程中细胞自噬的变化分析

本研究分析宰后牛肉成熟14 d过程中细胞自噬的变化规律及其与牛肉品质间的关系。牛肉宰后成熟过程中,肉色方面,L^*值随成熟时间延长而升高,a^*值、b^*值均呈现先升高后降低的趋势;嫩度随成熟时间延长不断提高,剪切力与肌间线蛋白（Desmin）表达量均呈现下降趋势（P<0.05）;保水性随成熟时间的延长而下降,贮藏损失率和蒸煮损失率上升（P<0.05）。进一步对自噬相关蛋白进行研究,牛肉宰后成熟过程中,Beclin-1与微管相关蛋白1轻链3作为细胞自噬发生的标志性蛋白,其表达量均呈先升高后降低的趋势,并在12 h达到最大。调控自噬的AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,m TOR）-酵母Atg1同源蛋白激酶（UNC-51 like kinase 1,ULK1）通路作为一条重要的能量代谢通路,在缺血缺氧环境下能够诱导细胞自噬的发生。本研究结果表明,牛肉宰后成熟过程中AMPK、p-AMPK^Thr172、ULK1的蛋白表达量均呈先升高后降低的趋势,并在12 h达到最大,m TOR表达量则持续下降（P<0.05）,说明细胞自噬在宰后0～12 h增强。相关性分析结果显示,宰后自噬相关蛋白表达水平与牛肉的肉色呈负相关,与蒸煮损失、剪切力、Desmin蛋白相对表达量呈正相关（P<0.05）。综上所述,宰后牛肉成熟336 h过程中可能通过AMPK-m TOR-ULK1通路激活细胞自噬进而对牛肉品质起到一定的调控作用。     

蓝莓渣多酚对肝星状细胞的增殖与自噬作用

为了提高蓝莓全资源利用率,降低其加工副产物对环境的危害。通过高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)分析超高压提取、超声提取和溶剂提取技术对蓝莓渣多酚(BRP)组分及含量的影响。以活化的HSC-T6细胞为模型,通过噻唑蓝法和乳酸脱氢酶法检测BRP对HSC-T6细胞存活率和细胞毒性的影响,透射电镜和吖啶橙染色法观察BRP对HSC-T6细胞自噬的诱导作用,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BRP对HSC-T6细胞自噬相关蛋白的表达量,酶联免疫法(ELISA)分析HSC-T6细胞的纤维化程度。结果表明:BRP中有14种组分,3种提取方法中的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷占比最高,分别为57.530%,58.703%,54.830%。3种提取方法所得BRP的组分种类相同,而含量存在较大差异。超高压提取法所得BRP含量显著高于常规溶剂法和超声辅助提取法(P<0.05)。BRP能显著抑制HSC-T6细胞增殖(P<0.05),且在一定浓度范围呈现时间-剂量效应关系;通过上调自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-II表达,下调p62蛋白表达,诱导细胞发生自噬;同时BRP显著下调HSC-T6细胞中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TNF-β1的分泌量(P<0.05)。结论:超高压萃取的BRP组分总含量最高,生物活性功能最强,BRP可通过抑制活化的HSC-T6细胞增殖,诱导细胞自噬从而发挥其抗纤维化效果。     

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定药香型白酒中萜烯类化合物

应用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术定量药香型白酒中的痕量萜烯类化合物。实验考察萃取头、样品酒精度、萃取温度和萃取时间对萜烯类化合物萃取效果的影响。最优顶空固相微萃取条件为将酒样稀释到酒精度10%,采用50/30μm碳分子筛/聚二乙烯苯/聚二甲基硅氧烷(DVB/CAR/PDMS)萃取头在60℃条件下萃取45min。该方法具有良好的线性,所有化合物的线性相关系数良好,R2≥0.9921,检测限为0.01～3.62μg/L,定量限为0.03～12.05μg/L,相对标准偏差小于15%,加标回收率为81.01%～118.94%。用该方法对药香型白酒的成品酒、原酒中的萜烯类化合物进行测定,共定量41种挥发萜烯类化合物,结果发现大曲香醅原酒中的萜烯总含量要多于小曲酒醅原酒中萜烯总含量,D-樟脑等17萜烯只在大曲香醅原酒中检测到,在小曲酒醅原酒中没有检测到,排除蒸馏时酸、热等带来的影响,推测这17种萜烯主要来源于大曲香醅,相反卡拉烯只在小曲酒醅原酒中检测到,推测其来源于小曲酒醅。顶空固相微萃取适合药香型白酒中的萜烯类化合物定量分析。     

不同脂肪酸对自噬作用的研究进展

脂肪酸是机体赖以生存的物质之一。自噬是细胞的一种自我保护程序,也是与凋亡、焦亡、坏死等并列的细胞程序性死亡。对不同种类脂肪酸与自噬之间的关联及脂肪酸对自噬调控的方式进行综述,以期为部分疾病的治疗开辟新的途径。     

蒜氨酸通过激活自噬改善HepG2细胞脂质的积聚

研究蒜氨酸对棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚的影响,并探讨蒜氨酸的作用机制与自噬的关系。利用CCK8法测定细胞活性,采用尼罗红染色法观察细胞内脂质堆积情况,并使用ELISA试剂盒法检测甘油三酯和总胆固醇含量,采用WesternBlot测定自噬标志蛋白含量。结果显示,与空白组相比,阳性对照组中HepG2细胞的总胆固醇和甘油三酯含量显著增加,分别增加约1.69和1.36倍;而在蒜氨酸在40～160μmol/L浓度范围作用下,细胞脂滴减少,总胆固醇和甘油三酯显著降低,且呈现剂量依赖性,在160μmol/L浓度的蒜氨酸作用下总胆固醇和甘油三酯含量均极显著下降,分别降低了37.52%和33.33%。同时,蒜氨酸在80～160μmol/L浓度范围内显著增加自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例,分别增加了23.87%和66.13%。因此得出,蒜氨酸改善了棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚,并可能通过激活细胞自噬的活性起到改善细胞脂质积聚的作用。     

新疆葡萄酒对大鼠肝脏功能及肝细胞自噬的影响

该实验为了探讨新疆葡萄酒对肝脏及肝细胞自噬的影响,将雄性SD大鼠随机分为6组：空白组(1)、酒精组(2)、吐哈盆地干白葡萄酒组(3)、天山北麓干红葡萄酒组(4)、伊犁河谷干红葡萄酒组(5)、焉耆盆地干红葡萄酒组(6),用新疆不同产区葡萄酒灌胃雄性SD大鼠8周后,检测6组大鼠体重变化和肝脏系数、肝脏组织病理形态学变化、血清中谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)含量,并通过Western blotting检测肝脏组织中自噬相关蛋白LC3、p62表达水平。结果表明,与空白组相比,3、4、5、6葡萄酒组大鼠体重增长趋势较缓,酒精组大鼠体重增长趋势最缓,与酒精组相比,3、4、5、6葡萄酒组肝脏系数显著降低(P<0.05),肝脏未见明显病变,大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、AST、ALT、血尿素氮(bl...     

天然产物通过细胞自噬调节抑制癌症的研究进展

传统的化疗手段在抑制肿瘤细胞生长的同时也会损伤到正常细胞,所以其临床治疗效果受到很大限制。新型天然产物抗癌化合物基于其安全性和有效性,将会成为人工合成化合物的替代物。临床前和临床研究已经证实一些植物天然产物（如白藜芦醇、姜黄素、人参皂苷等）具有抗癌潜力。本文综述具有代表性的天然产物如何通过靶向细胞内自噬通路诱导肿瘤细胞死亡及其涉及到的信号通路,为其进一步开发应用于原发性和转移性肿瘤的治疗提供新的思路。     

盐酸哈尔酚骆驼蓬碱对人肝癌细胞生长的影响与自噬诱导作用的研究

目的探讨低剂量盐酸哈尔酚骆驼蓬碱(harmol hydrochloride dihydrate,HHD)对肝癌细胞株HepG2生长的影响及其自噬诱导作用。方法用不同浓度的HHD作用于肝癌细胞株HepG2 24 h后四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用蛋白质印迹(western blotting, WB)的方法检测LC-3Ⅱ表达水平。结果 MTT检测结果显示不同浓度的HHD作用于HepG2细胞24h后,细胞活力随HHD浓度升高而降低,差异均有统计学意义(P0.05)。0、0.005、0.01 mg/mL HHD作用于HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P0.05)。0.01 mg/mL的HHD处理HepG2细胞24 h后,凋亡小体的形成明显增多(P0.05)。Western blotting法检测发现0.01 mg/mL HHD作用细胞24 h后自噬标记蛋白LC-3Ⅱ表达显著升高。结论 HHD抑制肝癌细胞株HepG2在体外生长,其诱导细胞自噬可能是抑制作用机制之一。     

α-蒎烯的发酵动力学模型

以α-蒎烯生产菌株YJM28为供试菌株,对其发酵动力学特征进行了研究。通过对Logistic等方程进行了最优参数估计和非线性拟合,得出了α-蒎烯的发酵动力学模型及相关参数。并且对动力学模型的拟合曲线分析可知,发酵实验值与模型预测值能够较好的吻合,说明所建立的发酵动力学模型能够较好的反应α-蒎烯的发酵过程。      

保健食品中非法添加物二氢吡啶类化合物诱导的肝细胞毒性与作用机制研究

目的 探究二氢吡啶类化合物所致肝细胞毒性及分子机制。方法 以不同浓度(0、3、10、30、100μmol/L)的尼莫地平作用于人肝癌细胞HepG2 24h,测定肝损伤指标ALT、AST活力,并利用Western blot检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、氧化应激通路、凋亡蛋白、自噬相关通路蛋白的表达;以不同浓度(0、3、10、30、100μmol/L)的氯维地平、硝苯地平、尼群地平、西尼地平、阿雷地平及马尼地平作用HepG2细胞24h,利用Western blot检测细胞中自噬相关通路蛋白的表达。结果 100μmol/L的尼莫地平可上调ALT和AST活力、激活MAPK通路蛋白的表达、抑制核因子E2相关因子2(Nrf2)及下游解毒蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的表达、增加LC3Ⅱ/LCⅠ、降低SQSTM1表达;氯维地平在3μmol/L时引起细胞自噬,其他六种二氢吡啶类化合物均在100μmol/L时使细胞发生自噬。结论 尼莫地平所致的肝细胞毒性机制中自噬的发生可能是由MAPK通路介导的,其中ERK通路促进HepG2细胞自噬的作用相对最强。此外,其他六种二氢吡啶类化合物氯维地平、硝苯地平、尼群地平、西尼地平、阿雷地平及马尼地平均可引起自噬。     

反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响

目的研究反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,加入不同剂量(0、10、20、50和100μmol/L)的反油酸,24 h后收集细胞,采用透射电镜观察细胞自噬小体;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(western blot)方法检测细胞自噬相关的基因和蛋白表达水平。结果透射电镜观察细胞结构发现,50和100μmol/L反油酸可使细胞内出现自噬小体,并可以引起细胞活力下降,差异均有统计学意义(P0.01);100μmol/L反油酸作用24和48 h后,细胞活力明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞中细胞色素C(cytochrome c,cyt-c)基因mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);随着反油酸浓度的升高,细胞浆中cyt-c蛋白表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P0.05)。但是不同剂量的反油酸对SH-SY5Y细胞自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)基因、Beclin1基因、p62基因、自噬相关基因5(atg5)、自噬相关基因12(atg12)mRNA水平表达差异无统计学意义(P0.05);但与对照组比较,50和100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞LC3B和Beclin1蛋白表达水平逐渐上调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论反油酸可以引起人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞活力下降,可能与其引起细胞自噬小体形成,上调自噬相关蛋白表达水平,促进线粒体cyt-c蛋白释放入细胞浆有关。     

多糖对肿瘤细胞自噬调控作用的研究进展

近年来,多糖因其抗肿瘤活性而逐渐成为众学者的研究热点。自噬是一种高度保守的自我降解过程,是将受损细胞器及大分子物质通过溶酶体降解并再利用的过程。自噬与肿瘤、神经退行性疾病等多种疾病的发生密切相关。肿瘤细胞中存在着自噬的异常,调控自噬可以作为治疗此类疾病的重要途径。多糖能否通过影响肿瘤细胞自噬达到抗肿瘤的目的,成为了目前多糖抗肿瘤研究的热点。本文综述了近十年国内外关于多糖对肿瘤细胞自噬调控作用的研究,主要从多糖对肿瘤细胞自噬相关信号通路的影响及多糖与肿瘤细胞自噬关系两大方面进行阐述,旨在为多糖对肿瘤细胞自噬调控作用的研究提供参考依据。     

大豆肽对力竭运动大鼠血流动力学及心肌自噬水平的影响

目的:观察大豆肽对力竭运动大鼠心脏血流动力学及心肌自噬水平的影响,探讨其保护心脏作用的抑制自噬机制。方法:将50只大鼠随机分为:正常对照组(灌胃蒸馏水,不进行强迫运动)、力竭运动模型组(灌胃蒸馏水,并强迫游泳至力竭)、大豆肽高、中、低剂量组(分别灌胃大豆肽500、250及125 mg/kg,并强迫游泳至力竭)。测定麻醉后大鼠左心室LVEDP、LV dp/dt max、LV dp/dt min、LVSP、MABP及HR等参数;取大鼠心尖组织进行HE染色,观察病理组织学改变;取大鼠心肌组织,采用RT-PCR和Western blot法检测心肌组织LC3、Beclin-1及Atg7等因子mRNA和蛋白表达水平。结果:与模型组相比,大豆肽高剂量500 mg可显著降低力竭运动大鼠LVEDP,升高LV dp/dt max、LV dp/dt min、LVSP及MABP,亦可明显改善力竭运动大鼠心肌组织的病理学变化,下调心肌组织LC3、Beclin-1及Atg7 mRNA和蛋白表达水平。结论:大豆肽具有改善力竭运动大鼠心功能和血流动力学的作用,其机制可能与抑制细胞自噬相关。     

α-蒎烯对杂拟谷盗成虫的控制作用

研究了植物挥发性有机化合物α-蒎烯对重要储粮害虫杂拟谷盗成虫的控制作用。结果表明,α-蒎烯对杂拟谷盗成虫具有较强的驱避、触杀和熏蒸作用。其驱避作用随着处理时间延长和处理剂量的增加而增强,在α-蒎烯与乙醇按体积比1.6∶1处理剂量下处理72 h后驱避率达到90.91%,驱避活性达到Ⅴ级。其触杀作用随着处理时间延长和处理浓度增加而显著增强,α-蒎烯在3.00μL/cm2处理浓度下处理48 h后触杀作用校正死亡率即达到100%。α-蒎烯在10、20、40、80μL/L处理浓度的熏蒸作用平均校正死亡率分别达到94.96%、99.16%、100%和100%。     

尼古丁诱导人肠道上皮细胞自噬水平的研究

  目的  探讨尼古丁对人肠道上皮细胞自噬水平的影响和可能的分子机制。  方法  正常培养人肠道上皮细胞, 采用不同浓度(0、2.5、5、10μM)尼古丁处理细胞24h。倒置显微镜观察细胞形态变化; 通过CCK8法检测肠道上皮细胞的增殖情况; 通过Western blot检测自噬标志物LC3、beclin1和p62变化; 通过透射电子显微镜(TEM)检测自噬小体形成情况; 通过GFPLC3转染后激光共聚焦显微镜检测自噬斑点形成情况。同时, 也检测了内质网应和mTOR/AMPK/Akt信号通路变化。  结果  细胞增殖随着尼古丁浓度的增加受到明显抑制, 2.5μM尼古丁对细胞形态和增殖无显著影响。尼古丁能够上调LC3B-II和beclin1蛋白表达水平, 同时下调P62的表达, 且成浓度依赖性。TEM和激光共聚焦显示尼古丁作用后, 肠道上皮细胞自噬体数量显著增加。  结论  低浓度的尼古丁能够诱导肠道上皮细胞的自噬, 且对细胞增殖无影响, 机制与内质网应激和mTOR/Akt信号通路激活相关。      

运动补剂对不同运动方式下骨骼肌自噬的影响

通过建立跑台运动和负重游泳运动的小鼠模型,分析研制的运动补剂对小鼠骨骼肌自噬相关基因LC3、Atg7、Atg9和Beclin1的影响。运动补剂采用玛咖提取物、燕麦提取物、亨育宾提取物、L-精氨酸-α-酮戊二酸盐和蛋白等营养物质制备,经灌胃的方式使小鼠服用,之后检测跑台运动和负重游泳运动后骨骼肌自噬相关基因的表达水平.与安静组相比,跑台运动组和负重游泳运动组小鼠在不服用运动补剂的时候均可以提高小鼠骨骼肌细胞的自噬水平(P0.05),其中负重游泳运动提升自噬水平更明显。而在摄入运动补剂后,小鼠骨骼肌自噬水平再次提高,其中负重游泳运动配合运动补剂的方式上升最为明显(P0.01)。证明我们所制备的运动补剂对提高小鼠骨骼肌细胞自噬水平存在上调作用,而与无氧运动组合后提升效果更明显。