贝莱斯芽孢杆菌YE-1的逆境耐受能力及安全性分析

该研究分析了拮抗黄曲霉的贝莱斯芽孢杆菌YE-1的逆境耐受能力及安全性,以期为其被进一步开发应用提供理论基础。通过测定菌株在不同温度（40、50、60、70、80℃）、不同质量分数Na Cl(1%、2%、3%、4%、5%、6%、7.5%)、人工胃液（1、2、3 h）、人工肠液（2、4、6 h）下的存活率及药物处理对应的抑菌圈直径,分析菌株的逆境耐受能力和药敏性,结果发现：贝莱斯芽孢杆菌YE-1经80℃处理20 min存活率为33.60%;质量分数7.5%的氯化钠处理2 h存活率为19.75%;人工胃液处理3 h存活率为33.57%;人工肠液处理6 h存活率为64.24%;对大多数药物敏感。菌株具有一定的逆境耐受能力和药敏性。通过对小鼠灌胃三种剂量（107、108、109 CFU/m L）菌液,灌胃体积20 mL/kg·bw,分析菌株的体内安全性,结果发现：菌株灌胃14 d对小鼠行为、体质量、食物摄入量、生化指标、血液学指标、脏器指数和组织病理学均无不良影响。综上,贝莱斯芽孢杆菌YE-1具有一定的逆境耐受能力和安全性,可以进一步开发应用。     

贝莱斯芽孢杆菌粗提物对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

本研究旨在探究贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)粗提物对食源性病原菌-金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,PJ-1)的抑菌机制.以贝莱斯芽孢杆菌为原材料,用不同极性的有机溶剂萃取得到不同组分,采用牛津杯法筛选对PJ-1有良好抑菌活性的组分,运用气相色谱-质谱(GC-MS)对...     

一株贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜力评价

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)为芽孢杆菌属新型细菌。采用梯度稀释法及抑菌圈法进行菌株的分离和筛选,综合形态观察和16S rDNA序列比对对分离的菌株进行鉴定。通过高盐、胆盐、pH、模拟胃肠液、温度和抗生素等耐受性测定,结合体外抗氧化能力、抑菌活性以及溶血和动物饲喂试验,对分离菌株进行益生潜力评价。结果显示,从农家酱中分离出一株菌PJP10,初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。该菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)和黑曲霉(Aspergillus niger)等拮抗效果显著,可以耐受8%NaCl、0.5%胆盐、100℃水浴、pH 2和模拟胃肠道的环境,对于头孢类、阿奇霉素等14种常用抗生素敏感。同时菌株PJP10无菌发酵液具有较好的抗氧化活性,对ABTS阳离子和DPPH自由基的清除率分别为(95.66±3.1)%和(44.84±2.2)%,Fe³⁺     

贝莱斯芽孢杆菌F85对烟草炭疽病的生防作用研究

为明确贝莱斯芽孢杆菌对烟草炭疽病的生防作用,通过贝莱斯芽孢杆菌BacillusvelezensisF85和烟草炭疽病菌Colletotrichum fructicola共培养试验,测定了不同浓度的F85无菌发酵滤液（0.5%～20%）对C. fructicola的菌丝生长、分生孢子萌发及附着胞形成的影响,评价了F85对活体叶片的烟草炭疽病的防治效果。结果表明：（1）贝莱斯芽孢杆菌F85对C. fructicola、C. kahawae、C. karstii、C. siamense均表现出较好的拮抗作用,具有广谱抑菌效果。（2）贝莱斯芽孢杆菌F85可有效抑制烟草炭疽菌C. fructicola菌丝的生长,同时抑制炭疽菌分生孢子的萌发和附着孢形成。随F85无菌发酵滤液浓度升高,对C. fructicola的抑制作用更明显。20%F85无菌发酵滤液处理C. fructicola菌丝干质量抑制率和分生孢子芽管畸形率均达100%。（3）5%浓度以上的贝莱斯芽孢杆菌F85无菌发酵滤液对活体烟草炭疽病的防效高于70%。本研究丰富了烟草炭疽病生防菌资源,为开展烟草炭疽病的生物防治提供了理论依据。     

2株樱桃腐败真菌的鉴定及贝莱斯芽孢杆菌对其抑制作用

为了获得绿色、安全的樱桃天然防腐保鲜剂,从腐败的樱桃上分别分离出2株主要的腐败菌,经菌落形态和分子生物学鉴定,初步鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)和总状毛霉(Mucor racemosus),分明命名为BC-1和SC-1。从实验室保存的菌种库中筛选出两株对樱桃腐败菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,通过形态学及分子生物学鉴定,初步确定均为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),分别命名为KA-2和XK-5。采用LB和landy培养基发酵两株菌,用贝莱斯芽孢杆菌的两种培养基发酵液酸沉后浸泡的方法研究其对樱桃的防腐保鲜作用,发现贝莱斯芽孢杆菌XK-5 landy发酵液酸沉提取物具有更好的防腐保鲜作用。该贝莱斯芽孢杆菌菌株有望作为生产新型绿色、安全的生物防腐保鲜剂的优良菌种。     

响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌YB19产中性蛋白酶发酵条件

为了提高贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YB19产中性蛋白酶的活力,在单因素试验的基础上,运用响应面法对该菌株产中性蛋白酶活力的发酵条件进行优化,以达到提高该菌株产中性蛋白酶活力的目的.试验结果表明,最适发酵条件为发酵时间28 h、发酵温度32℃、接种量3.4％、水分含量18 mL、豆粕粉含量2...     

贝莱斯芽孢杆菌发酵液对樱桃番茄贮藏品质的影响

樱桃番茄富含营养,在采后贮藏过程中其品质受到各种因素的影响而下降,为提高采后果实品质并延长货架期,亟待寻求一种安全有效的保鲜措施。以综合性评价、感官属性及风味与营养3个方面为评价指标,探究贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液对樱桃番茄的保鲜效果。结果表明贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液明显降低樱桃番茄的腐烂率和失重率,贮藏第12天,对照组腐烂率为27.97%,而发酵液处理组腐烂率为6.38%,且处理组的失重率显著低于对照组。贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液可保持樱桃番茄的硬度、脆性、紧实度,延缓可滴定酸、可溶性固形物、类黄酮、番茄红素、酚类物质的损失,具有显著的保鲜效果。进一步探究发现贝莱斯芽孢杆菌A4发酵液可提高樱桃番茄超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化物酶（peroxidase,POD）、丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase,PAL）3种抗性酶的活性,并能够抑制丙二醛（malondialdehyde,MDA）的积累,从而保持樱桃番茄的贮藏品质。     

贝莱斯芽孢杆菌抑菌物质的分析及提取优化

为揭示贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）P9对于致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）的抑制作用机理,考察了菌株P9的产酶能力,并对抑菌物质的提取方法进行优化,分析了抑菌物质的化学成分及稳定性。结果表明,菌株P9具有可分泌纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶的能力,抑菌物质酸沉淀法以氯仿提取,沉淀以甲醇∶磷酸盐缓冲液（PBS）=1∶3（V/V）重悬。利用牛津杯法测得菌株P9产生的抑菌圈直径为14.3 mm左右。薄层层析（TLC）法分析确定菌株P9所产的抑菌物质为脂肽类物质。抑菌物质在温度0～50 ℃稳定,金属离子对其无明显影响。贝莱斯芽孢杆菌P9展示了对致病性尖孢镰刀菌较好的生物防治潜力。     

培养基组成对贝莱斯芽孢杆菌产抑真菌成分的影响

贝莱斯芽孢杆菌能够同时产生蛋白类和脂肽类等多种抑真菌的脂肽类物质,产物中各组分的具体组成和含量与培养基组成紧密相关。为获得最有利于主要抑菌成分产生的最佳条件,以炭黑曲霉为指示菌,考察了不同培养基组成和培养时间对贝莱斯芽孢杆菌发酵液抑菌活性和主要抑菌成分的影响。结果表明,培养基组成对抑菌成分的总产量及组分构成有显著影响:Landy培养基更利于菌体生长,但营养肉汤培养基(NB)则更有利于抑菌成分的合成;牛肉膏有利于抑菌成分的产生与积累,而蛋白胨则相反。同时,菌体在Landy培养基中所产抑菌物质主要是蛋白类,而在NB培养基中主要为脂肽类。经过优化组合,确定出最有利于总体抑菌物质合成的培养基组成为:葡萄糖20 g/L,NaCl 5 g/L,牛肉膏15 g/L,谷氨酸钠5 g/L,KH2PO420 g/L,MgSO4·7H2O 10 g/L,KCl 10 g/L,FeSO43 mg/L,MnSO4100 mg/L,CuSO 43.2 mg/L。此条件下的菌体生长量比Landy培养基提高了75.9%,发酵液的抑菌活性比用NB培养基提高了21.9%,而且脂肽类抑菌成分比例较高。     

生鲜食品中蜡样芽孢杆菌毒力基因及耐药性研究

目的:研究生鲜食品中蜡样芽孢杆菌的毒力基因及耐药性。方法:在成都市周边农贸市场和路边小摊采集各种生鲜食品共100份,采用MYP选择性培养基初步分离蜡样芽孢杆菌菌株,采用16S rRNA序列比对分析鉴定得到蜡样芽孢杆菌分离菌株,采用PCR检测分离鉴定菌株中蜡样芽孢杆菌13个毒力基因的携带情况,进一步采用纸片扩散法检测菌株对18种抗生素的耐药性。结果:从100份生鲜食品样本中,检出蜡样芽孢杆菌24株,检出率为24%,其中,路边小摊的检出率(70%)高于农贸市场(18.9%)。呕吐型基因ces和cer的检出率较低,仅在1株中发现;腹泻型基因nheC有24株检出;cytK有13株检出;bceT有12株检出;hblA有11株检出;nheB有10株检出;hblC、hblD、nheA各有9株检出;hly-Ⅱ有7株检出;hblB、entFM检出率为0;蜡样芽孢杆菌的4个看家基因rpoB、gyrB、groEL、vrrA在24株分离菌株中检出率为100%。同时发现,生鲜食品来源的蜡样芽孢杆菌分离菌株对杆菌肽B、磺胺甲亚唑、苯唑西林、青霉素表现出较高耐药性,耐药率大于96%;而对阿米卡星、氯霉素、庆大霉素、亚胺培南耐药率小于7%。结论:本研究通过分离鉴定生鲜食品源蜡样芽孢杆菌,研究其毒力基因携带及耐药性,为进一步评价生鲜食品中蜡样芽孢杆菌的安全风险提供参考数据。     

贝莱斯芽孢杆菌提升雪茄茄衣烟叶发酵品质机制研究

为探究贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)对雪茄茄衣烟叶增香提质的作用机制,考查了茄衣烟叶在自然发酵和添加贝莱斯芽孢杆菌H1发酵(实验组)后常规化学成分、挥发性香气物质及微生物群落结构的变化及相关性,并对微生物的代谢途径变化进行分析。结果表明：与自然发酵相比,实验组茄衣烟叶的香气物质种类、常规化学成分(如烟碱、总氮和钾)与挥发性香气物质(如植物醇、香叶基丙酮和新植二烯)的相对含量均发生显著改变,烟气品质得以改善,烟气更醇和;相比自然发酵,实验组茄衣烟叶表面细菌多样性发生明显变化,OTU数目提高,茄衣烟叶优势菌门由厚壁菌门(Firmicutes)变为放线菌门(Actinobacteriota),优势菌属由单一的葡萄球菌属(Staphylococcus)转变为葡萄球菌属、闫逊初氏菌属(Yaniella)、未命名菌(unclassified＿f＿Micrococcaceae)等;优势菌属的改变使微生物代谢途径发生变化,前五种差异代谢途径分别为全局和总览图、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢和能量代谢;还原糖等常规化学成分受茄衣烟叶细菌群落的影响较大,苯乙醇的生...     

贝莱斯芽孢杆菌角蛋白酶的克隆表达、纯化及酶学性质

为了获得更好的羽毛粉降解酶,本文从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因（baker1）,对其克隆并在大肠杆菌BL21（DE3）中异源表达,最后对重组角蛋白酶（BaKer1）进行了分离纯化、表征及应用研究。实验结果表明,BaKer1的最适反应pH为9.5,最适反应温度为55℃,在中温和碱性条件下具有较好的稳定性。1 mmol/L Ca²⁺对BaKer1有显著地促进作用,5 mmol/L Mn²⁺对BaKer1有轻微地抑制作用,其他金属离子对BaKer1影响不大。PMSF对BaKer1的活性具有显著抑制作用,表明BaKer1是典型的丝氨酸蛋白酶。分别以羽毛粉、偶氮酪蛋白、酪蛋白为底物测定了BaKer1的动力学参数,K_m值分别为5.06、1.09和1.39 mmol/L,k_cat/K_m值分别为1 058.24、2 536.54和3 733.79·(s·mmol/L)。BaKer1处理羽毛粉,能达到酸水解效果的 33.51%,说明它在羽毛粉降解过程中具有潜在的应用价值。     

酱油渣源副干酪乳杆菌体外安全性评价

部分副干酪乳杆菌存在一定致病性,故食品源副干酪乳杆菌安全性评价仍是值得深入探讨的科学问题。该实验室前期从酱油渣中分离得到6株副干酪乳杆菌,分别为HT31、HT90、HT111、HT155、HT159、HT197,为了开发其使用价值,通过药敏试验、质粒提取实验、溶血实验、吲哚实验和氨基酸脱羧酶实验对其安全性展开评价。结果表明,在耐药性研究中,6株菌均对庆大霉素、复方新诺明呈现抗性,且均不含有质粒;5株菌(HT31、HT90、HT155、HT159、HT197)对青霉素、头孢噻吩、红霉素、氯霉素敏感,对环丙沙星中度耐药,HT111对青霉素、头孢噻吩、红霉素、氯霉素、环丙沙星敏感,说明庆大霉素、复方新诺明对6株菌的抑制效果较强,其他5种抗生素对6株菌的抑制效果较弱。在有害代谢产物研究中,6株菌均不产生精胺、尸胺、腐胺及色氨酸酶;HT197为β-溶血,HT31、HT90、HT111、HT155、HT159为α-溶血,其中HT31与HT111为轻微溶血。综上,HT197的安全性相对较低,不能作为益生及发酵菌株;HT31、HT90、HT111、HT155、HT159在耐药性检测、产有害代谢物方面相...     

一株贝莱斯芽孢杆菌的生长特性及抑菌活性研究

从自然发酵海洋鱼酱油中分离得到了一株具有多种蛋白酶活性与糖酶活性的贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株,为探究贝莱斯芽孢杆菌SW5的抑菌特性,研究了SW5菌株的生长及生理生化特性,验证了SW5菌株发酵上清液对食品中多种常见病原菌的抑制能力;并利用液相色谱-质谱联用技术鉴定了其中的抑菌物质.结果表明:菌株SW5在35℃、pH值5时生...     

拮抗葡萄灰霉病贝莱斯芽孢杆菌的生长特征及对相关防御酶活性的影响

为了明确贝莱斯芽孢杆菌TP-1对葡萄灰霉病的抗病机制,通过抗生素标记法筛选抗性标记菌株,成功获得能抗300μg/mL利福平的标记菌株TP-1R,研究了标记菌株的抗性遗传稳定性及其对葡萄灰霉病的拮抗作用,并分析其在葡萄中的定殖情况以及对葡萄果实内防御酶活性的影响。结果表明,标记菌株在经15次传代培养后,仍能在含利福平的培养基中稳定生长,且标记菌株对灰霉病的拮抗作用与原始菌株无明显差异。检测到标记菌株在葡萄上的定殖量于贮藏(20℃)第15 d达到峰值,为4.32×10⁶ CFU/g,在贮藏第30 d菌株定殖数量仍可达到3.11×10⁶ CFU/g,菌株TP-1能在葡萄上稳定定殖;接种菌株TP-1发酵液能有效抑制灰霉病的发生,降低葡萄采后腐烂率。在贮藏期间,葡萄防御酶PAL、PPO、APX活性均呈先上升后下降的趋势,拮抗菌TP-1处理组的3种酶活性显著高于CK(P<0.05),在第15 d时,拮抗菌处理组PAL、PPO、APX活性是CK的1.23、1.19、2.01倍。菌株TP-1在葡萄上的定殖可诱导葡萄PAL、PPO、APX活性的提高,在一...     

贝莱斯芽孢杆菌1-3产表面活性素的纯化、鉴定及表征

从口腔离体牙样品中筛选得到1株具有抑菌作用的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）1-3。通过硫酸铵沉淀、分子筛层析、薄层层析和基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱检测,确定具有抑菌活性的物质是含有14～16个C的环状脂肽Surfactin,其分子质量分别为1 030.642、1 044.660 Da和1 058.677 Da。通过对分离纯化Surfactin的特征研究,结果表明其具有表面活性剂的功能,对食品加工、医疗卫生、畜禽养殖中常见的病原菌具有抑制作用,其中对单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）ATCC 19115的最小抑菌浓度可达4 μg/mL。Surfactin对小鼠红细胞在有效抑菌浓度范围内未显示溶血性,且具有良好的热稳定性（20～100℃）和广泛的pH值（2.0～10.0）适应性,表明其在食品加工、医疗卫生和畜牧养殖中具有良好的应用潜能。     

贝莱斯芽孢杆菌zk1对鹰嘴桃果肉组织的影响及酶学特性

目的:通过研究病原菌的酶学特性间接了解病原菌在不同条件下对宿主的致病能力.方法:结合鹰嘴桃被菌株Bacillus velezensis zk1侵染前后的成分检测和透射电镜观察,并通过单一底物诱导该菌株产生淀粉酶、纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶,研究温度、pH和金属离子对其酶活力的影响.结果:鹰嘴桃被该菌侵染后果肉组织细胞受...     

贝莱斯芽孢杆菌防治甜樱桃采后软腐病的效果和机理

为探索贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）抑制甜樱桃软腐病的作用机理,实验分析贝莱斯芽孢杆菌KT对匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）LC-7的体外和甜樱桃果实体内抑制效果,以及贝莱斯芽孢杆菌KT菌株对甜樱桃果实相关防御酶活力的影响,并通过转录组学解析在与匍枝根霉互作期间,贝莱斯芽孢杆菌KT菌株中与次级代谢物合成和生物防治相关基因的表达情况。结果表明,1×109 CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液对匍枝根霉LC-7菌丝抑制率达87.12%,此时孢子萌发率和胚芽管长度分别为21.54%和11.45 μm。在甜樱桃果实上,1×109 CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液处理48 h后,果实软腐病发病率约为20%,比对照组降低了约80%,并且贝莱斯芽孢杆菌KT菌悬液能抑制甜樱桃果实多酚氧化酶和脂氧合酶活力,诱导过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力增加,提高果实抗氧化和抗病能力。扫描电子显微镜观察发现,经与贝莱斯芽孢杆菌KT菌株共培养后,匍枝根霉LC-7菌丝和孢子形态扭曲,贝莱斯芽孢杆菌KT对匍枝根霉LC-7具有明显的致畸作用。转录组学分析结果表明,贝莱斯芽孢杆菌KT菌株中抗生素合成基因簇bacillaene中的pksIJ和糖醛酸磷壁酸合成基因簇中的tuaAGE基因表达上调,此外发现,表达差异显著的基因主要富集在生物学过程中的核糖核蛋白复合体组装和亚基组成及核糖体组装等一系列与核糖体活动相关的过程。贝莱斯芽孢杆菌可能通过营养和空间竞争以及分泌抑菌活性物质直接抑制匍枝根霉LC-7,还可诱导甜樱桃果实的抗病性。贝莱斯芽孢杆菌对由匍枝根霉引起的甜樱桃软腐病有良好的控制作用,具有开发成生防菌剂的潜力。     

贝莱斯芽孢杆菌抑尖孢镰刀菌脂肽类物质的鉴定

为探究贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）P9对于尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有拮抗作用的主要活性成分,采用酸沉淀法和有机溶剂沉淀法提取菌贝莱斯芽孢杆菌P9发酵液中的脂肽类抗生素粗提物,研究粗提物对尖孢镰刀菌的抑菌活性。利用多功能制备液相仪对其组分进行分离,确定具有抑菌活性的组分,并利用高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用（HPLC-Q-TOF-MS）仪对具有抑菌活性的组分进行鉴定。结果表明,脂肽类抗生素粗提物对尖孢镰刀菌有良好的抑菌作用,且酸沉淀法得到的粗提物抑菌活性较高,从中共分离到7种组分（编号为1#～7#）,其中4种组分具有抑菌作用,经鉴定,组分2#为C15SurfactinA或C16SurfactinB或C15SurfactinC,组分4#、6#、7#分别为C15BacillomycinD、C14BacillomycinD、C16BacillomycinD。     

响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌发酵水豆豉的工艺条件

发酵产品的质量与微生物的产酶能力和发酵条件息息相关。为提高水豆豉的发酵品质,采用单因素法结合响应面法对一株高产豆豉纤溶酶的贝莱斯芽孢杆菌发酵水豆豉的条件进行优化,以获取最佳的发酵条件。首先利用单因素法缩小发酵时间、温度和接种量的范围,然后通过响应面法以水豆豉中的氨基酸态氮含量和豆豉纤溶酶活性为指标,确定最优发酵条件为:时间5d,温度35℃,接种量0.01%。最终发酵的水豆豉氨基酸态氮含量为8.95g/kg,豆豉纤溶酶活性为420.05IU/g,与市售相比,豆豉纤溶酶活性升高约400倍。该研究为贝莱斯芽孢杆菌发酵水豆豉提供了理论依据。