原生质体融合技术在微生物菌种选育中的应用

对原生质体融合技术的关键步骤、影响原生质体融合和分离的因素进行了综述.就原生质体融合技术在微生物育种技术上的应用前景进行了分析.     

利用种内原生质体融合技术选育双抗优良酿酒酵母的研究

酵母属（Saccharomyces）中的一些种对野生酵母或某些细菌具有抗性作用。采用005毫克／毫升酵母裂解酶制备的两种酵母原生质体在35％PEG－6000作用下，成功地获得了酿酒酵母的种内融合重组子。融合子具有抗野生酵母和部分细菌的双抗性。经过十代以上的移接验证，融合子的稳定率达到30％。结果表明，两支菌株融合后，抗药特性、营养缺陷、抗野生酵母和抗细菌性可以互补；融合子由于细胞基因拷贝数增加，使代谢物的产生量也增加，这对于保障纯种发酵及产品质量的稳定性具a重要作用。在酿酒酵母的融合育种中，嗜杀葡萄酒酵母、啤酒酵母的有种…     

原生质体融合选育冠菌素高产菌株

研究以抗卡那霉素突变株189(KMr、Glu+)和谷氨酸缺陷营养型突变株A4.6.727(Glu、KM8)为亲本,进行原生质体融合构建冠菌素高产菌株.确定了制备原生质体的适宜条件为溶菌酶浓度0.05mg/mL和酶解时间100min,此条件下原生质体形成率达79.1%,再生率为12.8%.所得融合子经多次转管培养,检测融合子发酵产冠菌素产量,最终筛选到一株高产冠菌素菌株S1893,其冠菌素相对产量比出发菌株提高184.1%和519.0%.     

原生质体紫外诱变技术在该糖菌种选育中的应用

本文采用原生质体紫外诱变技术，经过硫酸二乙酯（DES）诱变后筛选出的NO3菌。采用溶菌酶浓度0.8mg/ml，酶解温度36℃，酶解时间120min，获得原生质体；采用10s作为紫外原生质体诱变的作用时间，选育出一株稳定的核糖生产菌TJ3，该菌具有莽草酸营养缺陷，而高糖、以核糖为唯一碳源不生长等遗传标记。     

降解聚乙烯醇菌株原生质体培养及融合的研究

从自然界中分离得到4株能降解聚乙烯醇(PVA)的细菌,经紫外线诱变,得到2株具有单重抗药性的突变菌株S7(Str-,Kan+)和K15(Str+,Kan-)。系统分析了各种因素对原生质体制备率以及再生率的影响。将S7和K15作为亲本菌株进行原生质体融合,并通过正交试验,对原生质体融合的条件进行优化,使融合率达到4 603×10-5。融合子F-4菌株培养成活性污泥后,PVA去除率可达87%,是普通活性污泥的3～4倍。     

原生质体融合技术在L-谷氨酸菌株育种中的应用

本文阐述了原生质体融合技术在L-谷氨酸高产菌诱变育种中的应用方法和步骤,选育得到温敏型谷氨酸菌种产酸153g／L的菌株FM00—189。     

原生质体融合技术及其在果酒酵母育种上的应用

杜金华,张开利,张锦丽,等.嗜杀苹果酒酵母的构建[J].食品与发酵工业,2002,28(2):20-23

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原生质体融合技术选育高效菌株降解聚乙烯醇

从自然界中分离聚乙烯醇(PVA)的降解细菌，经紫外线诱变，得到两株具有单重抗药性的突变菌株S7(Str^s，Kan^r)和K15(Str^r，Kan^s)，两者对PVA的去除率分别达到52％和58％．将S7和K15作为亲本菌株进行原生质体融合，并对融合条件进行优化，融合子F4菌株对PVA去除率达到79．9％，将其培养成活性污泥后，PVA去除率可达87％，是普通活性污泥的三四倍．     

多亲本原生质体融合构建高产谷胱甘肽菌株

基于多亲本原生质体融合技术提高酿酒酵母Y518产谷胱甘肽能力。结果表明,酿酒酵母Y518培养8h,经0.15%巯基乙醇前处理,酶解(酶浓度17.5g/L)60min,原生质体形成率达90%以上;在40% PEG6000(含5g/LCaCl2)诱导下融合,融合率可达2.6×10-5;通过4轮基因组改组,得到2株GSH产量提高的突变菌株,最高可达15.92mg/g,为原始菌株的2倍。     

采用原生质体融合法选育优良啤酒酵母

采用原生质体融合法改造啤酒酵母，使其不改变啤酒发酵特性的同时具糖化大分子糊精的能力，提高了啤酒发酵度，生产出高发酵度，淡爽型普通啤酒。     

原生质体融合选育L-亮氨酸高产菌的研究

以黄色短杆菌TQ5 35 1(Met- +Ile- + 2 TAr+SGr)和TQ5 35 6(Met- +Ile- +α ABr+ β HLr)为亲株 ,采用原生质体融合技术 ,定向选育出一株L 亮氨酸高产菌TQ980 6(Met- +IleL + 2 TAr+SGr+α ABr+ β HLr) ,该菌株经 5L罐分批发酵 64h产L 亮氨酸2 2 7g/L。     

非对称灭活双亲原生质体融合法选育产果糖基转移酶的米曲霉新菌株的研究

本文以生产果糖基转移酶的米曲霉SBB201(Aspergillus oryzae SBB201)为出发菌株,通过紫外联合氯化锂诱变获得产酶性能与生长性能各自优良的米曲霉菌株UV-A与UV-B,采用非对称灭活法对这两株菌株的原生质体进行紫外以及热灭活双灭活,然后在PEG作为融合剂的介导下进行原生质体双亲融合,筛选出一株果糖基转移酶生产能力有较大提高的米曲霉新菌株,其酶活力达到了172.95 U/g,比出发菌株提高了64.57%。     

灵芝菌原生质体融合条件研究

通过化学方法和电融合法对白芝(Ganoderma applanatum,GA)和赤芝(Ganoderma lucidum,GL)两种大型真菌原生质体融合条件进行了研究,实验得出:化学方法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:PEG浓度30%、CaCl20.02mol/L、融合时间30min、温度30℃,融合率可达0.4%;电融合法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:交变电流频率2MHz、电压40V、直流脉冲脉幅10kV/cm、脉宽25μs、直流电压为500V,融合率可达40%。     

应用原生质体融合技术构建高效降解胆固醇的乳酸菌

芽孢杆菌T1 2 - 1 与嗜热链球菌ST及嗜酸乳杆菌C3进行原生质体融合 ,获得两株高效降解胆固醇的乳酸菌融合子S T1 3- 37和C T2 4 - 8,它们可明显降低蛋黄乳、鲜肉糜和鲜鸡肝糜中的胆固醇含量 ,且具有乳酸菌发酵食品的风味特征     

冬虫夏草原生质体诱变育种研究

以冬虫夏草原生质体为材料,经紫外诱变获得了性状优于出发菌株的突变株。实验结果表明:生物量最高的再生菌株为诱变30s的8号菌株,生物量达到1.3445g/100mL,比出发菌株生物量提高55.16%;胞内多糖产量最高的再生菌株为诱变30s的3号菌株,胞内多糖产量达到54.570mg/g,比出发菌株多糖产量提高52.9%;富硒能力较高的突变菌株是诱变30s的8号菌株,富硒量达到125.8μg/g,比出发菌株提高50.11%。由结果可知,原生质体诱变技术可以用于冬虫夏草的菌种选育。     

原生质体电融合选育米曲霉新菌株的研究

本实验对米曲霉AS3．951和CICC2339的原生质体进行紫外灭活,然后对灭活双亲用CRY-3型细胞电融合仪进行原生质体电融合。通过筛选得到EF113和EF222两株融合株,其酶活力分别达到了7680U/g和7200U/g,远高于酶活低的亲本菌株AS3．951。     

酵母属间融合构建高温发酵木糖生产乙醇优良菌株

通过单倍体分离和诱变获得 8株休哈塔假丝酵母 1 766和高温酿酒酵母G47的营养缺陷型突变株。并通过聚乙二醇 (PEG)和电诱导融合等方法 ,实现了能发酵木糖产生酒精的休哈塔假丝酵母和高温酿酒酵母之间的融合。融合子经DNA含量、细胞体积测定和稳定性能试验证明为稳定的融合子。F 71融合子能在 45℃下发酵木糖生产酒精 ,其在 45℃发酵木糖所产酒精体积分数为 1 .675 % ,其转化率为 68.8%。且与亲株比较 ,F 71的酒精耐受能力提高了 1 %。