降胆固醇乳酸菌鉴定及其在体外模拟胃肠环境中抗性研究

一株源于四川泡菜的具有降胆固醇能力的乳酸菌p5经形态学、生理生化特征和16SrDNA序列分析,鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum p5).在体外模拟胃肠环境中的抗性研究结果表明,p5具有较强耐酸能力,pH值为2.0时,2h活菌数保持在106cfu/mL;pH值为2.5时,4h内活菌数仍可保持在106cfu/mL,pH值为3.0～3.5时,p5 6h内活菌数可保持在106cfu/mL;p5具有耐高浓度胆汁盐的能力,在0.1%胆汁盐MPS中,p5表现出生长趋势,在0.2%～0.5%胆汁盐MRS中,p5活菌数下降急速,但6h后活菌数能保持在105cfu/mL;p5对肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、铜绿假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌等肠道致病菌有明显抑制作用.p5可望作为食品工业用菌种的资源.     

金花茶花浸提物与消化蛋白酶的相互作用

为探讨金花茶花浸提物对消化蛋白酶活性的影响及其作用机理,首先研究了金花茶花浸提物对消化蛋白酶活性的影响以及抑制动力学,其次采用荧光光谱法、紫外光谱法和圆二色谱法研究浸提物抑制消化蛋白酶活性的机制。结果表明,醇提物和水提物对胃蛋白酶(IC₅₀分别为3.194和3.330 g/L;竞争抑制常数分别为4.518和7.641 g/L)和胰蛋白酶(IC₅₀分别为29.131和56.534 g/L;竞争抑制常数分别为74.571和175.832 g/L)有明显的抑制作用,且抑制类型为混合型抑制;金花茶花浸提物能降低胃蛋白酶(猝灭常数分别为1.522和1.205 L/g)和胰蛋白酶(猝灭常数分别为2.175和1.392 L/g)的内源荧光,改变消化蛋白酶的二级结构。因此,金花茶花浸提物可通过改变消化蛋白酶的结构抑制其活性,该研究为金花茶花功能性食品开发提供理论支撑。     

蛋白酶A抑制剂GLPAI动力学性质的研究

对一种从灵芝发酵液中提取得到的蛋白酶A抑制剂GLPAI(Ganoderma Lucidum proteinase A inhibitor)的动力学性质进行了研究，分别以胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶A为底物考察了GLPAI的动力学性质，实验结果：GLPAI对上述3种蛋白酶的抑制类型均属于混合型抑制模式，对胃蛋白酶的Ki-4．64(μmol／L)；对胰蛋白酶的Ki=33．5(μmol／L)；对蛋白酶A的Ki=2．7(μmol／L)．     

泡菜中乳酸菌的分离鉴定及模拟环境胁迫抗性的研究

从市售泡菜中分离到7株乳酸菌,对其进行形态学、生理生化及16SrRNA基因鉴定。基于生理生化特性和16S rRNA基因序列的同源性比较,以及系统发育分析,鉴定7株菌均为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。并进一步对所分离菌株进行低pH和高胆盐浓度条件下存活能力测试,实验结果表明,S-2、D-1、D-3在低pH和高胆盐浓度条件下存活率为100%～135%,在pH1·5的培养基中4h后活菌数分别为8·4×108、8·3×108、8·1×108cfu/mL,在0·3%胆盐条件下4h后活菌数分别为8·5×108、8·9×108、8·4×108cfu/mL。      

一株降胆固醇乳酸菌的鉴定及其在模拟胃肠环境中抗性的研究

鉴定一株有降胆固醇功能的益生菌LQ-12为乳酸乳球菌乳亚种。同时对该菌在模拟胃肠环境条件下的抗性及对肠道中致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的拮抗性和服用抗生素后的耐药性进行了研究。结果表明，LQ-12在pH1．5～4．5生活4h活菌数仍达10^6cfu／ml以卜，在0．1％～0．3％胆汁盐条件下4h活菌数仍达10^6cfu／ml以上。同时对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用，且对氨苄青霉素、四环素、庆大霉素、严迪(主要成分为罗红霉素)和头孢拉定有耐药特性。可用作微生态制剂和酸奶发酵剂的优良菌种。     

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测

目的 探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法 利用含有8 μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S rRNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构（EFSA）建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因strA、strB, aadA、aadE、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果 分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans (36), Lactococcus garvieae (14), Lactobacillus buchneri (12), Lactobacillus acetotolerans (2), Lactococcus lactis (1)和Staphylococcus.spp (2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri 中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。strA 和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;strB基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans, Lactobacillus buchneri, Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aadA、aadE and ant (6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,strA、strB和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论 当前的研究结果表明：四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

抗性淀粉体外消化模拟的研究

采用体外消化模拟方法,研究了抗性淀粉在人工胃肠液和大肠液中的消化吸收情况,并用原淀粉作为对照组。结果表明,抗性淀粉和原淀粉在生理盐水中均没有被分解,生理盐水对抗性淀粉的消化毫无影响。与对照组原淀粉相比,抗性淀粉在人工胃液(pH3、pH4、pH5)和人工肠液(pH6.8)中变化很小,人工胃液和人工肠液对抗性淀粉不起消化作用。抗性淀粉在大肠液中有明显的失重,说明大肠液对抗性淀粉有影响,抗性淀粉能够被大肠中的微生物发酵或部分发酵。从而说明抗性淀粉不能在胃和小肠中消化吸收。     

抗性淀粉体外消化模拟的研究

采用体外消化模拟方法,研究了抗性淀粉在人工胃肠液和大肠液中的消化吸收情况,并用原淀粉作为对照组。结果表明,抗性淀粉和原淀粉在生理盐水中均没有被分解,生理盐水对抗性淀粉的消化毫无影响。与对照组原淀粉相比,抗性淀粉在人工胃液(pH3、pH4、pH5)和人工肠液(pH6.8)中变化很小,人工胃液和人工肠液对抗性淀粉不起消化作用。抗性淀粉在大肠液中有明显的失重,说明大肠液对抗性淀粉有影响,抗性淀粉能够被大肠中的微生物发酵或部分发酵。从而说明抗性淀粉不能在胃和小肠中消化吸收。      

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测（英文）

目的探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法利用含有8μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S r RNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构(EFSA)建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因str A、str B,aad A、aad E、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans(36),Lactococcus garvieae(14),Lactobacillus buchneri(12),Lactobacillus acetotolerans(2),Lactococcus lactis(1)和Staphylococcus.spp(2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。str A和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;str B基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans,Lactobacillus buchneri,Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aad A、aad E and ant(6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,str A、str B和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论当前的研究结果表明:四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

乳酸乳球菌镉抗性菌株的鉴定及质粒消除的研究

为构建乳酸菌食品级载体/受体系统.从分离自内蒙古传统乳制品103株乳源性乳酸菌中筛选出7株高浓度镉抗性菌株.特异性16SrDNA PCR扩增产物的序列测定结果表明.其中两株为乳酸乳球菌.PCR扩增镉抗性基因部分序列证实了这两株乳酸乳球菌含有镉抗性基因,为镉抗性阳性菌株.通过物理和化学方法消除乳酸乳球菌内源质粒,确定了镉抗性质粒,并获得一系列衍生菌株,包括无质粒菌株.为进一步研究各种质粒的功能及基因表达提供了理想的宿主,也为乳酸菌食品级载体/受体系统的构建奠定了基础.     

嗜酸乳杆菌生长促进物质研究

为提高嗜酸乳杆菌活菌数,工业化生产嗜酸乳杆菌冻干菌粉,通过测定嗜酸乳杆菌发酵液的吸光度和活菌数,采用优选法研究了不同生长促进物质对嗜酸乳杆菌活菌数的影响。结果表明:在11%(m/m)的脱脂乳中加入麦芽汁、番茄汁、酵母膏、真菌浸汁、胡萝卜汁能显著促进嗜酸乳杆菌的生长,蛋白胨、葡萄糖次之,麦芽糖几乎无促进效果。因此,以脱脂乳为基础培养基,嗜酸乳杆菌的最佳生长促进物质的组合为0.5%(m/m)酵母膏、5%(V/V)番茄汁、5%(V/V)真菌浸汁、12%(V/V)胡萝卜汁和5%(V/V)麦芽汁,在此条件下其活菌数可达5.46×109cfu/mL。     

影响嗜酸豆乳质量的因素探讨

研究了嗜酸乳杆菌在豆乳中生长繁殖与发酵产酸的变化规律，探讨了发酵剂、豆乳加工主要工艺和发酵工艺条件对酸豆乳质量的影响。发现嗜酸乳杆菌嗜热链球菌混合发酵豆乳，有利于提高产酸率，改善制品风味和发挥嗜酸乳杆菌的营养保健作用；添加乳糖等可发酵糖、鼐粉等营养成分可促进乳酸功物生长与产酸；控制豆乳固形物浓度（５－６％）、接种量（４％）和添加物量（全脂乳粉５％、蔗糖５％）在３７℃下发酵５小时可获得质量的较邹的冀     

肠溶性嗜酸乳杆菌微胶囊工艺研究

采用生物相容性良好的海藻酸钠为壁材,利用冷冻干燥与包埋结合的方法,将嗜酸乳杆菌包埋在保护微胶囊中,可达到减少、甚至避免菌体冻干和胃环境的伤害而在肠环境中溶解释放,从而保证有足够数量的嗜酸乳杆菌发挥益生作用。通过检测活菌数、包封率、粒径大小及在模拟胃环境中的耐酸性和模拟肠环境中的肠溶性,确定出嗜酸乳杆菌微囊制备的最佳制备工艺。试验表明:在海藻酸钠质量分数为2%、乳化时间10min、搅拌速度400r/min、菌胶体积比为1∶6的工艺参数下,依据包封率为试验指标,参考粒径大小以及呈球效果,得到最高包封率为59.20%,且制成的嗜酸菌微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。     

嗜酸乳杆菌增菌培养基的确定

实验从嗜酸乳杆菌增菌培养基基质的确定以及碳氮源的筛选等方面研究,优化了的最佳增菌培养基,即脱脂乳10% 酶解乳清6%,葡萄糖1.6%,大豆蛋白胨0.5%,酵母粉0.7%,西红柿汁12%,平菇汁12%,啤酒16%。在此增菌培养基上进行发酵试验,结果菌数可达到8.3?09cfu/ml。     

纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌混合发酵过程中营养物质变化的研究

以麦麸、豆粕、玉米粉为基质,纳豆芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌为试验菌株,采用固态发酵的技术,对其发酵过程中的活菌数和营养物质进行分析测定.结果表明:发酵后纳豆芽孢杆菌数为9.8×109cfu/g,嗜酸乳杆菌数为7.1×109 cfu/g,蛋白酶活力达到2 240.9 U/g,粗蛋白质含量比发酵前增加了1.3个百分点,肽和氨基酸含量均为发酵前的4.5和3.4倍.     

嗜酸乳杆菌细胞生长数学模型的建立

为构建嗜酸乳杆菌细胞生长数学模型。分析了嗜酸乳杆菌在发酵过程中不同发酵时间的细胞活浓度的动态变化趋势,经处理后拟舍出其细胞生长的数学模型。结果表明,Logistic曲线能很好地拟合嗜酸乳杆菌细胞生长的动态变化,为其发酵工艺优化控制和发酵代谢产物分析提供了理论依据。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质的研究

为优化CEP的分离纯化方法,采用聚乙二醇(PEG)-20000浓缩粗酶液,用超滤离心管过滤酶液,40%~60%硫酸铵盐析分级沉淀,Sephacryl-S-300HR纯化,并通过Native-PAGE切胶回收得到纯酶。所得CEP的分子质量为28.3ku,比酶活力62.066U/mg,最适温度32℃,最适pH6.5,耐热性比较强,耐酸性明显好于耐碱性。Co2+、Mg2+、Ca2+对CEP有激活作用;Ba2+、Mn2+、K+、Na+对CEP的活力影响不大;Zn2+、Ni2+则表现出较强的抑制CEP活性作用;EDTA对CEP活性有抑制作用,表明CEP是一种金属离子激活酶;PMSF对CEP有显著抑制作用,表明CEP是一种丝氨酸蛋白酶。用嗜酸乳杆菌CEP水解乳清蛋白,其酶解液对ACE的抑制率为56.31%,表明CEP水解乳清蛋白可以产生ACE抑制肽。     

嗜酸乳杆菌JQ-1胞壁蛋白酶的提取及分离纯化

对嗜酸乳杆菌JQ-1胞壁蛋白酶（CEP）的提取条件进行了研究,确定了胞壁蛋白酶的最佳提取条件,并对粗酶进行了分离纯化。采用溶菌酶结合非离子表面活性剂法对胞壁蛋白酶进行提取,得出其最佳提取条件为:菌粉与裂解液比例为1∶5（g/mL）,33℃下保温4.0h,离心取得的上清液即为粗酶液。通过聚乙二醇-20000浓缩,DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-100两步层析对粗酶液进行分离纯化,蛋白酶提纯倍数达到50.951倍,最后回收率为12.569%。且SDS-PAGE电泳检测蛋白酶为单体结构,分子量约为45ku。用纯化后的CEP水解β-酪蛋白,水解液的ACE抑制率为48%。      

决明子多糖嗜酸乳杆菌发酵乳的研制

通过正交试验优化了用超声波法提取决明子多糖的工艺条件,从酸奶的酸度和活菌数两方面来分析多糖对酸奶品质的影响,确定决明子多糖嗜酸乳杆菌发酵乳最佳工艺参数。     

Nonfermented ice cream as a carrier for Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus rhamnosus

Efficiency of a nonfermented ice cream for delivering Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus rhamnosus to consumers was evaluated. Both of the microorganisms survived at the populations of greater than 10⁷ CFU g^?1 during 12 weeks of storage at ?19 °C. Addition of the microorganisms had no significant effect on the overrun, viscosity, firmness and melting behaviour; it changed the acidity, pH and sensory properties of the finished product. Resistance to acid and sensitivity to bile of both bacteria were tested separately on fresh harvested cells before inoculation to ice cream and then on the frozen‐thawed cells after 12 weeks of cold storage in ice cream. Ice cream processing followed by cold storage reduced acid resistance of both bacteria at pH 2.5. Resistance to bile in L. rhamnosus was not affected in frozen‐thawed ice cream when compared to fresh cell, whereas resistance to bile in L. acidophilus appeared to be more susceptible to the process and cold storage.