黑茶降血脂质量评价模型的构建及验证

为探索快速简便的黑茶降血脂质量评价方法,对16个茶样进行成分检测,利用主成分分析法构建黑茶降血脂质量的评价模型。通过油酸诱导HepG2细胞,建立体外高脂细胞模型,在细胞存活率实验(MTT法)的基础上,以细胞内脂质含量为指标验证黑茶的降血脂功效。结果表明:模型预测结果与验证实验结果一致,本研究构建的评价模型具有客观性和可操作性。     

加氏乳杆菌的降脂活性研究

目的:探究加氏乳杆菌是否具有降脂活性,并验证其对HepG2细胞脂质堆积和高脂血症小鼠脂质代谢活性的影响.方法:利用油酸诱导建立HepG2细胞脂质堆积模型,通过多次油红O染色定量对166株加氏乳杆菌进行降脂活性筛选,选择活性最强的一株菌通过Bodipy染色、甘油三酯含量测定进行验证.利用C57BL/6J小鼠喂食高脂饲料建...     

新疆小枝玫瑰醇提物对脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积的改善作用

为探究新疆小枝玫瑰醇提物对HepG2细胞脂肪堆积的影响,以新疆小枝玫瑰醇提物为对象,用脂肪酸（free fatty acids,FFAs）诱导HepG2细胞建立体外脂肪酸负荷模型。MTT法筛选小枝玫瑰对HepG2细胞的安全浓度。用甘油三酯（triglyceride,TG）试剂盒测定小枝玫瑰醇提物干预后各组细胞的TG含量。油红O染色观察并测定各组细胞内脂滴蓄积情况和脂质含量。Western blot法测定各组细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα）、酰基辅酶A氧化酶1（peroxisomal acyl-coenzyme aoxidase 1,ACOX1）、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A（carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A）蛋白水平。结果显示：小枝玫瑰醇提物作用HepG2细胞的安全浓度≤200 μmol/L。以FFAs浓度为1.5 mmol/L孵育24 h可成功诱导HepG2细胞体外脂肪酸负荷模型。与模型组相比,小枝玫瑰醇提物组呈剂量依赖性地显著（p<0.05）降低FFAs诱导的细胞内TG和脂质含量,TG水平下降47.17%~60.38%,脂质含量下降25.00%~36.61%;与模型组相比,小枝玫瑰醇提物能显著上调PPARα及其下游ACOX1、CPT1A蛋白表达水平（p<0.05）。小枝玫瑰醇提物可以改善FFAs诱导的HepG2细胞脂质蓄积,其抗脂变作用是通过激活PPARα介导的脂肪酸氧化代谢通路,进而减少细胞内TG水平和脂质含量实现的。     

基于HepG2细胞模型研究普洱茶茶色素的抗氧化作用

采用正常培养和油酸诱导培养的HepG2细胞为模型,通过测定普洱茶茶色素对HepG2细胞外谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,过氧化氢酶(catalase,CAT)活力和细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响,以研究普洱茶茶色素的抗氧化作用。结果显示,普洱茶茶色素对正常培养的HepG2细胞的抗氧化作用影响不显著,而对油酸诱导的HepG2细胞模型抗氧化作用有显著的提高。抗氧化作用提高的程度依赖于普洱茶茶色素的质量浓度。当400μg/m L普洱茶茶色素作用HepG2油酸诱导模型24 h,细胞外GSH含量由0.004 4 g/L增加到0.010 3g/L,CAT活力由0.136 U/m L提高至1.174 U/m L,细胞内MDA含量由15.146 nmol/mg减少到7.635 nmol/mg,从而使这些指标接近正常培养HepG2细胞模型水平。因此,普洱茶茶色素的抗氧化作用是通过提高清除活性氧的酶活力和促进合成还原性物质来干预细胞的氧化应激。     

壳寡糖对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型的降脂机理研究

为探讨壳寡糖在体外对肝脂质积累的抑制效果及潜在作用机制,选用油酸钠诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪肝细胞模型,通过油红O染色及各试剂盒检测胞内总脂质积累、甘油三酯、总胆固醇、高低密度脂蛋白胆固醇及游离脂肪酸的含量,实时定量PCR及western blot检测细胞内脂代谢相关基因和蛋白的表达。结果发现,4.0mg/mL的壳寡糖对肝脂质蓄积具有明显的抑制作用,并降低了二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)、肝X受体α(LXRα)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)、孕烯醇酮X受体(PXR)和分化簇36(CD36)的mRNA水平和蛋白水平的表达。研究结果表明,壳寡糖可以通过调节脂肪酸吸收和甘油三酯合成通路从而降低非酒精性脂肪肝细胞模型中的脂质积累。希望本研究能够为利用壳寡糖开发具有降脂护肝功能的膳食补充剂提供理论参考。     

红树莓提取物降低油酸诱导HepG2细胞脂肪的积累

为研究红树莓对人肝细胞脂肪积累的影响,本文以红树莓果和籽的提取物为原料,测定了提取物中的活性成分,并通过体外油酸诱导建立HepG2细胞脂肪积累模型,以噻唑兰染色吸光度(OD值)、甘油三酯(TG)含量、细胞内脂质含量三个指标,探索红树莓果和籽提取物对肝细胞脂肪积累的影响。试验结果表明:红树莓果提取物中总酚15.18±0.94 mg GAE/g、黄酮1.25±0.05 mg RE/g、原花青素20.35±1.06 mg CE/g、花色苷1.15±0.70 mg CGE/g;红树莓籽提取物中总酚15.35±1.55 mg GAE/g、黄酮11.22±0.66 mg RE/g、原花青素27.08±0.99 mg CE/g、花色苷未检出;以牛血清白蛋白(BSA)作为溶剂配制的1000μmol/L油酸造模剂孵育HepG2细胞24 h可成功诱导肝细胞脂肪积累;红树莓提取物能显著降低1000μmol/L油酸诱导的肝细胞脂肪积累,其中200μg/mL红树莓果提取物处理细胞时,与模型组相比,胞内脂质含量降低了25.93%,TG含量降低了37.23%;4mg/mL红树莓籽提取物处理时,胞内脂质含量降低了47.12%,TG含量降低了46.23%。红树莓提取物中富含活性成分,能够降低高脂细胞模型内脂肪的积累,对脂肪肝等疾病具有一定的预防作用。     

体外模拟消化对四种杂粮中酚类物质及其降脂活性的影响

杂粮中富含具有生理活性的多酚类化合物。本实验研究了4种常见杂粮(薏米、荞麦、青稞、红豆)在体外模拟消化过程中酚类物质的变化以及其降脂活性。结果表明,经模拟体外消化后荞麦具有最高的总酚含量(27.78±0.14)mg GAE/100 g及黄酮增长率57.9%。并利用油酸诱导HepG2细胞建立高脂模型,测定以2.5 mg/mL为上样浓度的4种杂粮多酚提取物干预前后细胞内TG及LDL-c含量的变化。结果表明荞麦多酚表现出了最佳的生物利用度及降脂活性,其干预组与模型组相比甘油三酯浓度下降了1/3,达到(0.156±0.032) mmol/g prot,低密度脂蛋白降至(0.025±0.005) mmol/g prot,表现出最佳的降脂活性,为进一步研究其作用机理以及降脂相关的功能食品及保健品的开发提供参考。     

皱纹盘鲍内脏脂质对人肝癌细胞HepG2脂质调节作用研究

本研究探讨了皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)内脏脂质(Haliotis discus hannai visceral lipid,HDHL)对人肝癌细胞HepG2的脂质代谢的影响,对HDHL脂肪酸成分、HepG2细胞活性、细胞内胆固醇和甘油三酯含量以及脂肪酸代谢相关m RNA基因的表达情况进行了研究。研究发现HDHL中不饱和脂肪酸占总脂肪酸含量59.50%,其中多不饱和脂肪酸占29.71%。HDHL与HepG2细胞共孵培养24 h及48 h后,浓度为0～240μg/m L的HDHL对HepG2细胞无毒性影响。30～240μg/m L HDHL可显著降低HepG2总胆固醇含量,30～120μg/m LHDHL共孵HepG2细胞后,细胞内甘油三酯含量显著降低。q PCR结果显示HDHL可显著降低HepG2细胞脂肪酸合成相关基因SREBP1c、ACC1、FAS和脂肪酸转运吸收相关基因CD36 m RNA水平的表达,提高线粒体脂肪酸氧化基因CPT1的表达。因此,HDHL可能通过抑制脂肪酸合成和脂肪酸转运,增强线粒体中脂肪酸氧化等途径有效调节细胞脂质代谢,该研究为脂质调节功能食品的开发提供理论依据。     

草苁蓉多糖对HepG2细胞氧化应激的抑制作用

研究草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化应激的抑制作用。以HepG2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活化水平。结果表明,BRPS在质量浓度12.5 mg/L~50 mg/L范围内对HepG2细胞存活率无显著影响,对细胞安全。而H_2O_2诱导使HepG2细胞存活率和抗氧化能力下降,细胞内ERK和JNK磷酸化水平升高。与H_2O_2模型组相比,BRPS预处理可提高细胞存活率;降低培养液中LDH、AST和ALT活性;降低细胞内MDA含量,升高细胞中SOD活性和GSH含量,降低细胞内ERK和JNK磷酸化水平。提示,BRPS对H_2O_2所致HepG2细胞氧化应激具有抑制作用,减轻其细胞损伤。     

玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr对酒精性HepG2细胞的保护作用

以从玉米蛋白粉中鉴定得到的玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr(YFCLT)为研究对象,通过体外抗氧化试验和细胞模型试验,从氧化应激与脂质代谢两个方面探讨其对HepG2细胞酒精性损伤的保护作用。体外抗氧化试验结果表明:玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr在较低浓度1μmol/L时仍具有一定的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除率、铁螯合能力和氧自由基吸收能力(ORAC)。采用酒精为诱导剂诱导建立人肝癌细胞(HepG2)酒精性损伤模型,酒精最佳作用浓度为500 mmol/L,作用24 h。HepG2细胞酒精性损伤模型试验结果表明:玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr具有通过降低模型细胞ALT、AST的泄漏量,降低SOD、CAT、GSH酶活力,降低ROS和细胞TNF-α释放量而起到抗氧化应激损伤的HepG2细胞保护作用。玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr也可降低HepG2细胞内TG含量及减弱脂过氧化。综合各指标,玉米肽Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr对HepG2细胞酒精性损伤具有保护作用。     

山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响

目的:探究山茶油对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂质代谢的影响。方法:首先,利用CCK8法测定不同浓度山茶油对HepG2细胞活性的影响以选定适宜浓度进行后续实验。其次,采用不同浓度山茶油对HepG2细胞进行24 h干预,再使用0.5 mmol/L游离脂肪酸处理24 h诱导建立脂肪肝细胞模型。然后,通过油红O染色法判断各组间的脂滴生成情况,并参照相关试剂盒测定各干预下细胞内脂质水平的变化情况。最后,通过qRT-PCR法测定细胞内脂质代谢相关基因的表达,以探讨山茶油调节脂质代谢的作用及其可能的机制。结果:与正常对照组相比,造模干预组细胞内的甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著降低(P<0.05);与造模干预组相比,茶油预处理显著逆转了游离脂肪酸诱导细胞内TG、HDL-C和LDL-C含量的变化(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,与造模干预组相比,山茶油预处理显著降低了游离脂肪酸诱导的HepG2细胞内脂肪酸转运酶(CD36)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(...     

小麦低聚肽对H2O2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

分析小麦低聚肽氨基酸组成和相对分子质量分布,并对其保护过氧化氢所致人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的作用进行了研究。首先采用不同浓度小麦低聚肽作用HepG2细胞4 h,然后用150μmol/L过氧化氢氧化损伤细胞4 h,以细胞存活率、细胞内活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量评价小麦低聚肽对HepG2细胞的保护作用。结果表明,小麦低聚肽相对分子质量小于1 000的组分高达93.44%,谷氨酸及脯氨酸含量较高;小麦低聚肽具有增加细胞存活率、抑制细胞内ROS生成、降低细胞内MDA含量的活性,对减少HepG2细胞的氧化应激及提高细胞抗氧化能力具有较好的作用效果。本研究从细胞水平上揭示了小麦低聚肽对过氧化氢所致的肝脏损伤具有一定的预防保护作用。     

不同种类的脂肪酸对肝细胞脂质堆积的研究

目的:比较不同种类的脂肪酸对人肝癌细胞(HepG2)脂质堆积的影响。方法:HepG2细胞随机分为对照组(Con)、棕榈酸组(PA)、油酸组(OA)、亚油酸组(LA)和亚麻酸组(ALA)。培养24 h后,以MTT法比较不同种类脂肪酸对肝细胞存活率的影响;同一浓度下,以油红O染色法比较,各组细胞内脂滴生成情况拍照并测量吸光度;以酶学法检测各组细胞内甘油三酯含量比较不同种类脂肪酸对肝细胞脂质堆积的影响。结果:确定了每种脂肪酸诱导的浓度为50μmol/L,同一浓度下,随着PA、OA、LA、ALA各组脂肪酸的不饱和度依次增加,PA、OA、LA、ALA各组细胞内脂滴依次增多,细胞内TG含量依次升高。与对照组相比,PA无统计学差异,OA存在显著性差异(P0.05),而LA和ALA分别存在极显著性差异(P0.001)。且对每种脂肪酸诱导的肝细胞脂质堆积程度进行统计学分析,均存在显著性差异(P0.05)。结论:同一条件下,不同种类的脂肪酸对肝细胞活力和脂质堆积程度的影响不同,提示可能与脂肪酸的不饱和度有关,不饱和度越高的脂肪酸对细胞脂质堆积作用越明显。     

羊乳酪蛋白酶解物对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用

以葡萄糖利用率、细胞内糖原含量为指标,评价羊乳酪蛋白酶解物对高浓度葡萄糖诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的改善效果。以体外模拟胃肠消化的方法制备羊乳酪蛋白酶解物消化产物,研究胃肠消化作用对其改善HepG2细胞胰岛素抵抗效果的影响。结果发现,羊乳酪蛋白酶解物显著提高了高浓度葡萄糖刺激的HepG2细胞的葡萄糖利用率和细胞内糖原含量;体外模拟胃肠消化作用对其促进葡萄糖利用和糖原合成的活性无显著影响。     

煎炸棕榈油的理化性质及其中的极性组分对HepG2细胞的影响

研究棕榈油在高温煎炸过程中过氧化值、茴香胺值等理化指标的变化情况,及从煎炸50 h油样中提取的极性组分对HepG2细胞的影响。结果表明:棕榈油的酸值、过氧化值、羰基值、茴香胺值均随煎炸时间的延长而逐渐上升,碘值、氧化稳定性指数逐渐降低,且极性组分含量在煎炸过程中持续增加,在煎炸45 h时已超过25%; MTT实验结果显示,极性组分处理HepG2细胞24 h后,细胞存活率随着极性组分含量的增加而下降,说明极性组分可以抑制HepG2细胞的生长;油红O和活性氧实验结果显示,极性组分可以促进细胞内脂滴的积累,同时细胞内ROS的含量明显增加,使细胞发生氧化损伤,能量代谢紊乱,加剧了脂质积累。     

黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用

研究部分黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用。建立AAPH诱导HepG2细胞氧化应激的模型,比较对照组和实验组细胞内的氧化自由基ROS的含量。结果表明,用不同浓度的黄酮处理HepG2细胞1h后,经过相同浓度的氧化剂作用后,细胞内自由基ROS的含量相对空白对照组均发生变化。这些选择性的黄酮对于AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激具有促进或者抑制作用,其作用机制可能清除HepG2细胞内ROS以及与细胞内氧化酶和抗氧化酶系统的作用有关。     

水飞蓟素对丙烯酰胺诱导人肝癌细胞氧化损伤的保护作用

研究水飞蓟素对人肝癌细胞系（human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2）增殖的影响以及 对食品加工过程中产生的丙烯酰胺所致肝细胞毒性的预防效果,同时对其保护机制进行探讨。通过噻唑蓝法检测 水飞蓟素对HepG2细胞增殖的影响和对丙烯酰胺诱发HepG2细胞毒性的保护效果;利用荧光探针法对HepG2细胞 内活性氧的变化进行检测,并运用比色法分别检测细胞内脂质、蛋白质及DNA的氧化损伤标志物（丙二醛、蛋 白羰基和8-羟基脱氧鸟苷）含量;利用酶活力试剂盒检测细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力的变化。结果显示, 12～96 μg/mL的水飞蓟素对HepG2细胞无毒性;水飞蓟素可以抑制丙烯酰胺引起的细胞存活率降低和氧自由基水平 升高,减少丙烯酰胺对脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,并提高细胞内抗氧化物酶CAT、SOD和GSH-Px活力。研 究证明,水飞蓟素能够缓解丙烯酰胺对肝细胞造成的氧化损伤。     

泽漆醇提取物抗氧化活性及对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响

为了探究泽漆醇提取物体外抗氧化作用及其对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响。本研究采用浸渍法分别以25%、50%、75%甲醇和乙醇对泽漆粉末进行提取,评估不同泽漆提取物的体外抗氧化活性,并测定其总酚和总黄酮含量。建立HepG2细胞脂肪堆积模型,不同浓度（20、40、60μg/mL）泽漆50%乙醇提取物处理24 h,观察细胞内脂滴形成情况;测定细胞中甘油三脂（triglyceride,TG）含量、总谷胱甘肽（glutathione,GSH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的活性及总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）。结果表明,泽漆醇提取物均具有抗氧化活性,且有浓度依赖性,其中50%乙醇提取物在一定浓度范围内抗氧化效果最佳（P<0.05）,且总酚（8.813%±1.344%）和总黄酮（17.938%±0.819%）含量也较高。与模型组比较,泽漆50%乙醇提取物能够降低HepG2细胞内脂滴和TG值,提高细胞GSH、T-AOC含量和SOD活性（P<0.05）,具有浓度依赖性。综上可知,50%乙醇提取物...     

马尾藻岩藻聚糖分离纯化及对HepG2细胞胆固醇含量的影响

采用DEAE C-52纤维素阴离子交换层析法对亨氏马尾藻岩藻聚糖进行分级纯化,将得率最高的组分命名为HF1,对其进行自由基氧化降解得到HDF1和HDF2,取回收率较高的HDF2采用Superdex 75凝胶柱层析法分离纯化得到HDF21和HDF22 2种组分。体外培养HepG2细胞,将不同浓度的各组分作用于HepG2细胞,测定细胞内胆固醇含量。结果表明:经过降解,HDF1的多糖含量、硫酸基含量和岩藻糖含量均高于HF1,但糖醛酸含量低于HF1。降解作用对HDF21的化学成分影响最大。HF1、HDF1、HDF21、HDF22 4种组分作用于HepG2细胞后均能降低细胞内胆固醇含量,并且在高浓度(500μg/mL)时效果最好;高浓度组作用于细胞72h后细胞内胆固醇含量均极显著降低(P0.01),并且以HDF21降胆固醇效果最佳。     

基于脂肪变性细胞模型研究明桑降脂茶调控LO2细胞脂代谢的作用

目的 明确明桑降脂茶的降脂作用及其发挥降脂作用的物质基础。方法 制备大鼠空白血清、明桑降脂茶全方和桑叶减味含药血清, 以油酸诱导人正常肝细胞(LO2细胞)建立脂肪变性细胞模型, 将细胞分为对照组(含空白血清)、模型组(含空白血清)、明桑降脂茶全方血清处理组、桑叶减味血清处理组。培养4 h后, 显微镜下观察各组脂肪积累情况; 酶标仪测定细胞内脂质含量; 按试剂盒说明测定细胞内甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterlo, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)含量, 以及过氧化物酶体增殖物启动受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha, PPARα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein 1c, SREBP-1c)表达。高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)研究各组指纹图谱、绿原酸和橙黄决明素含量的差异。结果 与模型组比较, 明桑降脂茶全方血清组、桑叶减味血清组均能显著降低细胞内脂滴数量和脂质含量, 降低TG、TC、LDL-C含量和SREBP-1c表达, 升高HDL-C含量和PPARα表达, 全方血清组的降脂作用优于桑叶减味血清组; 全方血清组、桑叶减味血清组、空白血清组共有峰分别为53、35、23个, 三者共有峰18个; 剔除共有峰后, 全方血清组有22个不同于桑叶减味血清组的差异峰, 桑叶减味血清组有4个不同于全方血清组的差异峰; 全方血清组中绿原酸和橙黄决明素含量均高于桑叶减味血清组, 绿原酸含量在二者之间差异显著。结论 明桑降脂茶具有明显的降脂作用, 桑叶在其中发挥重要降脂作用。