LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌

据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而且操作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增。实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。     

进口乳粉中阪崎肠杆菌检测分析

应用检验检疫行业标准<奶粉中阪崎肠杆菌的检验方法>中分离计数及普通PCR两种方法时50份进口乳粉进行检测,两种方法检测结果均准确可靠,但增茵方法不统一,标准有待完善.近三年来,天津口岸共检出31份阪崎肠杆菌阳性的进口乳粉.对这些阳性样品及阪崎肠杆茵进行了地域、污染情况及生化性状的总结分析,为完善检验方法及阪崎肠杆菌的进一步深入研究奠定基础.     

乳粉中阪崎肠杆菌的检测方法

为乳品企业开展阪崎肠杆茵出厂检验寻找更加便捷、准确,且检测费用低廉的检测方法.参照SN/T1632.1-2005标准,在定性检测基础上有所改进.选择3种基础肠道分离培养基伊红美蓝、麦康凯、山梨醇麦康凯分离培养及生化鉴定阪崎肠杆菌,对两种修复培养基灵敏度进行比较及阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上生长情况比较.结果表明.A和B两组修复培养对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌均能起到修复作用,B组使用BP修复培养比A组蒸馏水修复培养灵敏度高出1个稀释度(10倍).阪崎肠杆菌在5种肠道分离培养基上均能生长.选择上述3种基础肠道分离培养基分离鉴定阪崎肠杆茵,费用低廉,用于乳品企业对每批次产品进行自检,有更大的经济效益和社会效益.     

阪崎克罗诺杆菌的16S rDNA鉴定分型

阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种重要的食源性条件致病菌,易引发新生儿、早产儿、低体重新生儿和免疫力低下的婴幼儿产生严重的脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎。本研究以分离自不同来源、通过生化鉴定的37株阪崎克罗诺杆菌作为研究对象,利用16S rDNA基因测序的方法对阪崎克罗诺杆菌进行鉴定和分型。结果表明:ES4并非为阪崎克罗诺杆菌,说明采用16S rDNA基因测序进行阪崎克罗诺杆菌的鉴定更为可靠;通过构建系统发育树分析,分离菌株位于同一系统发育分支;根据序列同源性比对,可将这一分支下的所有菌株分成7个子群,这表明16S rDNA基因测序可以对阪崎克罗诺杆菌进行分型,进一步揭示其系统发育关系。     

乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的研制

建立乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的制备方法.对阪崎肠杆菌真空冷冻干燥过程中使用的三种保护剂进行比较,筛选出效果最好的奶液(即脱脂奶粉与无菌水的比例为1∶4)作为保护剂,用于冷冻干燥时提高阪崎肠杆菌活菌存活率.在奶液中添加一定浓度的阪崎肠杆菌,使用真空冷冻干燥技术制备成冻干奶粉样品,测其含菌量,根据测得的菌落数量,按比例加入脱脂奶粉混匀稀释成平板菌落计数为10～15 g-1的标准样品,经真空包装获得2批共300个独立包装的冻干阪崎肠杆菌标准样品(10g/包).经过均匀性与稳定性检验,样品的定值及不确定度评估.结果表明:该标准物质均匀性、稳定性良好,该方法对进一步完善微生物尤其是致病菌标准物质的制备具有参考价值.     

乳粉中阪崎肠杆菌污染检测试剂盒的研制

目的：以乳粉中污染的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）为检测目标,开发一种能快速检测其污染的试剂盒。方法：以两株阪崎肠杆菌单克隆抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附实验方法,优化各个反应条件,制成在2 h内能发生显色反应的检测试剂盒。结果：包被抗体的最佳工作质量浓度为10 μg/mL,检测抗体的最佳稀释倍数为1∶5 000。试剂盒的检测限为104 CFU/mL,在104～108 CFU/mL范围内OD450 nm值与阪崎肠杆菌浓度的常用对数值呈线性关系。特异性实验中,试剂盒可检出3 株阪崎肠杆菌标准菌株,对其他9 株食品中常见致病菌的检测均呈阴性。模拟带菌实验中,初始菌浓度为1 CFU/mL的模拟样品经过8 h前增菌后,通过该试剂盒便可检出。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于6%,至少可在室温保存6 个月。结论：该双抗体夹心试剂盒具有灵敏度高、特异性好、精密度高、稳定性强等优点,可应用于乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

阪崎肠杆菌的研究进展

在概述了历年来对阪崎肠杆菌的研究进展，对其分类、来源、微生物学特性（包括菌落形态、生长特性等）、致病性、以及对失活特性（温度、水分活度和抗生素）进行了介绍，提出通过对不同污染来源的控制，从临床、环境、生产加工等环节减少阪崎肠杆菌的措施。     

乳粉中阪崎肠杆菌检测能力验证结果与分析

目的提升实验室检测乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的速度和准确性。方法依据GB4789.40-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》和经优化的SN/T1632.3-2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法第3部分:荧光PCR方法》以及能力验证作业指导书对乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)进行检测和结果判断。结果通过实时荧光PCR法的快速初筛,初步判断样品CODE29为阴性,样品CODE95为阳性;再经显色平板分离和VITEK2生化鉴定,结果显示:样品CODE29检出肺炎克雷伯杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌;样品CODE95检出阪崎肠杆菌和大肠埃希氏菌。结论本次乳粉样品中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检测能力验证结果合格,为提高相关微生物实验室的检测能力提供参考。     

荷兰婴儿配方乳粉阪崎肠杆菌污染事件的警示

在介绍该事件经过的基础上,归纳分析阪崎肠杆菌的特点、致病性、致病机理及污染途径,介绍了国内外对婴儿配方乳粉防控阪崎肠杆菌污染的管理措施,进而对我国防控婴儿配方乳粉阪崎肠杆菌污染的潜在风险和输入性风险提出了初步思考。     

LAMP法在阪崎肠杆菌快速检测中的应用

针对阪崎肠杆菌的ompA基因设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立一种快速检测阪崎肠杆菌的DNA环介导恒温扩增法(LAMP)。通过对2株阪崎肠杆菌标准菌株、24株阪崎肠杆菌分离株和18株非阪崎肠杆菌测试,结果表明此方法具有很高的特异性;对其灵敏度进行检验,发现该方法的最低检测限可以达到8CFU/mL,具有较好的敏感性。在1份实验室能力验证盲样和26份实际奶粉样品中应用发现,该方法与传统生化方法结果吻合,具有较好的可靠性。     

乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核.方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株.采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为104 CFU/瓶的能力验证菌球.依据CNAS-GL0...     

PFGE与16S rDNA对阪崎克罗诺杆菌分型的研究

研究脉冲场凝胶电泳(PFGE)与16S rDNA序列分析在阪崎克罗诺杆菌分型中的应用。对分离自不同来源的10株阪崎克罗诺杆菌进行16S rDNA序列扩增及测序,并构建系统发育树进行聚类分析。再利用限制性内切酶Xba I对这10株菌酶切后,进行PFGE电泳分型。16S rDNA序列分析显示,所有分离菌株与ATCC标准菌株在同一系统发育分支下,其序列相似性达到98.37%,并且不能进一步分型。而PFGE分型结果显示,10株分离菌株和2株标准菌株共分成11种PFGE基因型,说明PFGE的分型能力明显优于16S rDNA序列分析,部分菌株的基因型与分离来源具有一定的相关性,所以PFGE分型方法可用于阪崎克罗诺杆菌分子分型及溯源的研究。     

辣椒粉中检出阪崎肠杆菌

目的—验证辣椒粉中阪崎肠杆菌存在状况.方法—采用国家标准GB 4789.40-2010,应用VITEK 32全自动微生物鉴定及药敏系统进行检验.结果—从辣椒粉中检出阪崎肠杆菌.结论—阪崎肠杆菌存在于辣椒粉调味品中,存在较大的安全隐患.     

黑龙江省实验室能力比对乳粉中阪崎肠杆菌检验结果分析

通过实验室能力比对工作,评价食品微生物实验室的检测能力,提高实验室的检测水平,保证检测结果准确、可靠。依据CNAS-GL02《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》和CNAS-CL57《能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明》进行结果统计和评价。结果表明:40家参比实验室中,4家为不满意结果,满意率为90%。食品微生物实验室检验能力尚存在不足,检验能力有待提高。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比（内参）的应用作一综述。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比(内参)的应用作一综述.     

探究乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测方法灵敏度和检出限

摘要：目的 研究出乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测的灵敏度和最低检出线的实时荧光RT-PCR方法。方法 将羊奶粉作为基质,根据GB4789.40-2016中第一法中规定的增菌方法,一组加入10cfu阪崎肠杆菌,另一组加入等量的阪崎肠杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、普通变形杆菌、粪肠球菌,培养时间分别设置为15h和18h,将不同培养时间的培养物分别取1ml进行RNA提取,以cDNA为模板进行扩增。结果 增菌培养18h后,提取RNA采用实时荧光RT-PCR技术,结果显示扩增曲线良好,Ct值稳定。结论 乳粉中阪崎肠杆菌活菌检测,增菌培养18h后,采用实时荧光RT-PCR,最低可检出10cfu的阪崎肠杆菌。     

阪崎克罗诺肠杆菌致病性机理研究进展

阪崎克罗诺肠杆菌是一种革兰氏阴性无芽孢肠道杆菌,可导致新生儿和免疫功能不全的婴幼儿严重脑膜炎、菌血症和坏死性结肠炎,是一种非常重要的食源性条件致病菌。目前,国内外对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性及其致病机理的研究报道非常有限。本文通过阪崎克罗诺肠杆菌外膜蛋白A、脂多糖、生物膜、宿主细胞骨架、铁获得机制、海藻糖的存在、超广谱β-内酰胺酶的产生和细胞间相互作用等方面对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性机理进行综述。     

乳制品中阪崎肠杆菌的研究进展

概述阪崎肠杆菌的检测方法及其在乳制品中的污染情况和防控措施。     

奶粉中阪崎肠杆菌的风险评估

阪崎肠杆菌能引起脑膜炎、NEC和菌血症等，约2．5％～14％婴儿配方奶粉含有阪崎肠杆菌，0％～12％的普通奶粉含有阪崎肠杆菌，含量从0．36-66．0cfu／100g。婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌问题已受到了全世界的普遍关注。本文基于大量研究和调查数据，从奶粉中阪崎肠杆菌的危害识别、奶粉中阪崎肠杆菌的暴露评估、奶粉中阪崎肠杆菌危害特性以及阪崎肠杆菌的检测方法等方面客观地对奶粉中阪崎肠杆菌进行风险评估，并对降低我国婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌风险提出建议。