羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病K562细胞凋亡

观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞K562的作用效果,并探讨其机制。不同浓度羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞K562后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数（CI）,流式细胞仪（FCM）检测K562细胞凋亡率,吖啶橙（AO）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的IC50分别是8μ/mL和12．5μg/mL,联合应用时IC50下降为4μg/mL（HCPT）和3．6μg/mL（MMC）,CI=0．78,为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡。协同抑制人白血病细胞生长。     

K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究

腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究.比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制.流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01).     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示：Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药（multidrug resistance,MDR）的研究提供了实验模型。     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示:Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的研究提供了实验模型。     

几种天然吡喃酮衍生物的抗肿瘤活性分析

通过对几种天然吡喃酮衍生物的抗肿瘤活性分析,获得具有较强抗肿瘤活性的该类化合物。利用MTT法检测6种结构经修饰与改造的天然吡喃酮类化合物对多种肿瘤细胞的细胞毒性,结果显示化合物LiQ-1与LiH-Ⅳ-80的抗肿瘤活性最为显著。利用化合物LiQ-1分析其对人红白血病K562细胞的生长影响,结果呈剂量依赖关系。通过对化合物的结构分析比较证明,对于化合物LiH-IV-80、LiH-IV-50-2和LiH-III-122-2,在7-位形成的内酯环对抑制肿瘤细胞增殖有着重要的影响,而对于化合物LiQ-1、LiQ-2和LiQ-4,4-位OH对化合物的抗肿瘤活性影响较大。     

七叶皂苷钠对P388小鼠白血病细胞的体内外增殖抑制作用

探讨了β-七叶皂苷钠对P388小鼠急性淋巴细胞白血病细胞的体内外增殖抑制作用.采用MTT法和建立P388可移植性白血病模型实验治疗方法观察七叶皂苷钠对小鼠急性淋巴细胞白血病P388体外增殖抑制作用,对白血病移植模型小鼠生命的延长率,以及与化疗药阿霉素的协同作用效果.七叶皂苷钠对P388细胞具有明显的体外增殖抑制作用,作用呈时间和剂量依赖性;中、高剂量的七叶皂苷钠对体内白血病模型具有一定的治疗效果,明显延长荷瘤小鼠的生命期(P<0.01),并与常规化疗药阿霉素具有明显的协同增效作用.结论实验结果初步提示七叶皂苷钠能有效抑制P388细胞体内外增殖,可为其临床应用于白血病的治疗提供实验依据.     

新型金属卟啉光敏剂的合成及其抗肿瘤活性

合成了新型β-取代卟啉光敏剂2-氢醌-5,10,15,20-四(4-羟基苯基)卟啉铜(Ⅱ)(Cu(Ⅱ)P)和2-氢醌-5,10,15,20-四(4-羟基苯基)卟啉锌(Ⅱ)(Zn(Ⅱ)P),并初步研究其抗肿瘤活性.实验结果表明:2-氢醌-5,10,15,20-四(4-羟基苯基)卟啉锌(Ⅱ)对慢性骨髓性白血病肿瘤细胞(K562)具有很好的光敏毒性,Zn(Ⅱ)P的浓度为320 nmol/L时,就能抑制90%以上的白血病肿瘤细胞的生长.     

灵芝孢子醇提取液的体外抗肿瘤活性

利用几种来源于人或小鼠的癌细胞系（包括上皮癌细胞和白血病细胞）和ＭＴＴ法，探讨灵芝孢子醇提取液是否具有体外抗肿瘤活性，并对破壁与不破壁孢子粉醇提取液对癌细胞作用的差异进行比较发现破壁与不破壁孢子粉醇提取液均能显著抑制癌细胞的增殖，而破壁孢子粉醇提取液比不破壁孢子粉醇提取液作用更明显结果提示灵芝孢子在肿瘤治疗方面可能有较好的应用前景     

菟丝子多糖的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞增殖的研究

探讨菟丝子多糖的抗氧化活性和抑制肿瘤细胞的增殖作用可为其开发利用提供依据。通过测定菟丝子多糖对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的清除率和总还原力,研究其抗氧化活性,并用MTT法检测其对人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2、人胰腺癌细胞PANC-1和人正常肝细胞L-02、人胚肺成纤维细胞HFL-1增殖的抑制作用。结果表明:菟丝子多糖清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的IC_(50)分别为0.25、0.36、0.18 mg/m L;在1.0 mg/m L时,还原力(OD_(700))为0.55。菟丝子多糖抑制A549、HepG2和PANC-1细胞的IC_(50)分别为137.6、341.7、625.4μg/m L。菟丝子多糖对L-02和HFL-1毒性极小,IC_(50)分别为1.223、1.299 mg/m L。在肿瘤细胞A549、HepG2和PANC-1的半数抑制浓度时,正常细胞L-02和HFL-1的成活率在90%以上,表明菟丝子多糖可以选择性抑制肿瘤细胞的生长,而对正常细胞增殖抑制作用很小。     

对称C4二硫醚—丙酮—水三元体系在308.15K下的液液平衡研究

对称C4二硫醚—丙酮—水三元体系是在合成对称C4二硫醚的工艺中碰到的一个比较新的体系.在常压308.15 K下,用浊点法,平衡釜法分别测定对称C4二硫醚—丙酮—水三元体系的溶解度数据和结线数据(对称C4二硫醚包括正丁基二硫醚、仲丁基二硫醚和叔丁基二硫醚),得到了三元液液平衡体系的共轭相组成并由此绘得相平衡曲线.用内标法准确地测定了对称C4二硫醚及丙酮的含量,在单相区域对实验进行了验证实验均方误差1.56%.对称C4二硫醚—丙酮—水三元体系的研究结果表明有利于回收对称C4二硫醚.研究有利于对称C4二硫醚清洁合成工艺的设计和控制.     

人参皂苷Compound K对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

对人膀胱癌T24细胞进行体外培养,采用MTT方法观察不同浓度人参皂苷Compound K处理细胞24、48、72h后对细胞增殖的抑制作用,利用Hoechst33342对细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术观察人参皂苷Compound K对T24细胞凋亡的诱导作用,并应用WesternBlotting检测不同浓度人参皂苷Compound K处理后T24细胞中caspase-3及相关蛋白的表达情况。结果显示,人参皂苷Compound K对膀胱癌T24细胞的增殖具有较强的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,并诱导肿瘤细胞凋亡,同时caspase-3活化型表达量增加。说明人参皂苷Compound K能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效地诱导T24细胞凋亡。     

新型金属卟啉光敏剂的合成及其抗肿瘤活性

合成了新型β-取代卟啉光敏剂2-氢醌-5，10，15，20-四（4-羟基苯基）卟啉铜（Ⅱ）（Cu（Ⅱ）P）和2-氢醌-5，10，15，20-四（4羟基苯基）卟啉锌（Ⅱ）（Zn（Ⅱ）P），并初步研究其抗肿瘤活性．实验结果表明：2-氢醌5，10，15，20-四（4-羟基苯基）卟啉锌（Ⅱ）对慢性骨髓性白血病肿瘤细胞（K562）具有很好的光敏毒性，Zn（Ⅱ）P的浓度为320nmol／L时，就能抑制90％以上的白血病肿瘤细胞的生长．     

黄酮类化合物抑制肿瘤细胞增殖活性及构效关系

通过MTT法分析比较了12种黄酮类化合物对乳腺癌细胞(MCF-7L,MDA-MB-231)、肝癌细胞(SMCC-7721)、结肠癌细胞(HCT-15)增殖抑制和细胞形态变化.根据12种化合物对癌细胞增殖抑制作用及其构效关系发现化合物FB4的A环6位羟基化能显著提高黄酮苷元化合物对癌细胞的增殖抑制作用.这些结果为改造黄酮化合物的结构,从而增强其抑制癌细胞增殖活性提供了重要依据.     

3-烃基-4-苯基双环硫（氧）化磷酸酯的合成研究

研究双环硫化磷酸酯类化合物在大鼠及家蝇神经节结合部位有抗GABA（γ-氨基丁酸）作用,并对其进行了放射性配体与大鼠及家蝇GABA受体的结合活性测定,研究其抑制活性和生物选择性. 以2-苯基丙二酸二乙酯为原料,经酰化、还原及环合3步反应得到10个3-烃基-4-苯基双环笼状磷酸酯类化合物,所有化合物均通过1H NMR和MS进行了结构确认,采用放射性配体—受体结合试验,测定了10个化合物抑制［3H］EBOB（4’-乙炔基-4-正丙基原苯甲酸酯）与家蝇及大鼠GABA受体的结合活性,结果表明部分化合物在10-5 mol/L具有较好的抑制活性,且在大鼠与家蝇GABA受体之间有一定的选择性.     

三唑类衍生物对肝癌细胞株BEL-7402增殖的影响

通过体外药敏性实验,对几种三唑类衍生物抗肿瘤活性进行了研究,从Cf、Db、Cc、Cg、Dc 5种三唑类化合物中筛选出Db。实验表明,Db对肝癌细胞株BEL-7402增殖有明显的抑制作用,抑制率呈浓度和时间依赖性。进一步实验证明,Db能够通过引发细胞产生自由基、线粒体膜电位下降等途径诱导细胞凋亡。     

(E)-2-[2-甲氧基-5-(2,4,6-三甲氧基苯乙烯磺酰甲基)]苯胺基乙酸钠的简便合成

经6步合成了α,β-不饱和砜类化合物2-[2-甲氧基-5-(2,4,6-三甲氧基苯乙烯磺酰甲基)]苯胺基乙酸,总收率为22%。在关键步骤硫醚氧化步骤中,将反应温度由室温改为75℃,收率由55%提高到85%。缩合脱羧反应中,以醋酸铵为碱,此步收率由30%提高到60%,为该类物质的合成提供了适合较大量合成的方法。     

腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建

结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用。构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1α及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高。在EF1α的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in)。双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高(p0.05)。利用CCEF启动子控制PD-1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad-CCEF-anti-PD-1。通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率。结果表明,Ad-CCEF-anti-PD-1感染T细胞后,PD-1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019μg/mL,Jurkat中9.078μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景。     

肝再生增强因子促进HepG2细胞增殖对细胞Na+,K+-ATP酶的影响

为了研究rh-ALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+, K+-ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rh-ALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+, K+-ATPase的酶活力.结果显示rh-ALR能以浓度依赖的方式促进HepG2的细胞增殖,对细胞Na+, K+-ATPase的酶活呈剂量-时间依赖型影响;rh-ALR提高HepG2细胞Na+, K+-ATPase的酶活符合Michaelis-Menten方程作用机制,Vmax由0.84±0.11 μmol·mg-1·min-1上升到1.68±0.07 μmol·mg-1·min-1(p<0.01,差异有极显著性),而Km则由23.54±0.12 mM变为20.86±0.13 mM(p>0.05,差异无显著性),rh-ALR提高了细胞Na+, K+-ATPase的转化效率;Na+, K+-ATPase的专一性抑制剂(奎巴因)可以抑制rh-ALR促进HepG2细胞增殖的作用;ALR能以浓度-时间依赖的方式激活细胞的Na+, K+-ATPase,ALR引发的细胞增殖与了Na+, K+-ATPase的活化有关.该为进一步研究rh-ALR的生物学功能提供了理论依据.     

胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

胡椒碱（Piperine）是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性.探讨胡椒碱对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.采用MTT比色法测定其对SGC-7901细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、Western blot法对其进行抗癌机制研究.MTT结果显示Piperine处理细胞72h的IC50值为37.41 μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性; Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现Piperine能诱导SGC-7901细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;Annexin V-FITC/PI荧光双染结果亦证实Piperine可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示Piperine诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞、细胞活性氧产生增加; Western blot分析发现Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达逐渐增加,呈现剂量依赖性,且Bax/Bcl-2比例增加.因此,Piperine具有抑制SGC-7901细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-kB与凋亡蛋白PARP表达的影响.采用（CK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-kB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况.CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-kB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白.以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-kB信号转导通路,下调NF-kB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关.