κ-阿片受体与β1-肾上腺素受体交互作用抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的: 观察选择性 kappa 阿片受体(kappa opi-oid receptor,κ-OR)与 β 肾上腺素受体(β adrenergicreceptor, β-AR)在心肌细胞肥大方面的交互作用。方法: 以 体 外 培 养 的 乳 鼠 心 肌 细 胞 为 模 型, 10 μmol°L^-1 的异丙肾上腺素(β肾上腺素受体激动剂,β-AR)诱导心肌肥大, 观察 1μmol°L^-1的 U50,488H(κ-OR激动剂,U50)对其作用。进一步探索在100 nmol°L^-1ICI118, 551(β₂ -AR 阻断剂)存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的作用。用 Lowry's 法测心肌细胞的蛋白质含量;用消化分离法,并利用计算机图象分析系统测心肌 细胞的体积;用[³H]leucine 掺入法测定心肌细胞蛋白的合成。结果: 异丙肾上腺素使心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成明显增加;1 μmol°L^-1 的 U50, 488H 使 ISO 诱导的心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成减少, 这种作用可被选择性 κ-OR阻断剂-nor-BNI(norbinaltorphimine)抑制。在 ICI118, 551 存在的情况下, U50 也能起到减弱 ISO 诱导心肌细胞肥大的作用。结论: U50,488H 通过激活 κ-OR 与β₁ -AR 交互作用抑制 ISO 所诱导的心肌细胞肥大。     

血管紧张素受体阻滞剂对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的: 研究自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE₂) 蛋白表达水平及血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体阻滞剂厄贝沙坦对ACE₂表达的影响, 以了解高血压的病理改变, 探讨血管紧张素受体阻滞剂治疗高血压又一可能机制。方法: 20 只14 周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为自发性高血压大鼠(SHR) 组(n =10) 和厄贝沙坦组(n =10) 。厄贝沙坦组每只大鼠以厄贝沙坦50 mg·kg^-1·d^-1灌胃, 给药时间12 周。同时取14 周龄雄性京都种Wistar 大鼠为正常对照(WKY) 组(n =10) 。利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾脏ACE₂ 表达。结果: 与WKY 组比较, SHR 组ACE₂ 表达显著减少(0.72 ±0.11 vs 1.11 ±0.15); 与SHR 组比较, 厄贝沙坦组经12 周治疗后, ACE₂ 表达明显提高(1.03 ±0.13 vs 0.72 ±0.11) 。结论: 高血压大鼠肾脏ACE₂表达减少, 血管紧张素Ⅱ-Ⅰ 型受体阻滞剂对高血压大鼠肾脏ACE₂ 的表达有上调作用。此作用可能是血管紧张素受体阻滞除阻滞血管紧张素受体以外的另一间接调节肾素-血管紧张素系统的途径。     

丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左心室谷胱甘肽-s-转移酶μ2表达的影响

目的 观察丹参酮ⅡA 对自发性高血压大鼠(SHR) 左心室谷胱甘肽-s-转移酶μ2(glutathiones-transferase μ2, GSTμ2) 表达的影响, 探讨丹参酮ⅡA 防治左心室肥厚的机制。方法 实验分3 组:(1) 正常对照组;(2) SHR 组;(3) 丹参酮ⅡA 组。处理后检测血流动力学指标、左室重量指数及大鼠左心室GSTμ2 的活性, 采用共聚焦显微镜检测左心室O2^- 的产生情况, Western blotting 检测GSTμ2 的表达情况。结果 SHR 组血压与左室重量指数均显著高于正常对照组, 左心功能明显下降;丹参酮ⅡA 显著逆转了SHR 的左心室肥厚,但未明显改善高血压。SHR 组左心室O2^-的产生较正常对照组显著增多, 而丹参酮ⅡA 治疗后,O2^-产生较SHR 组显著减少。GSTμ2 的表达及活性在SHR 组显著降低, 而丹参酮ⅡA 显著增加了GSTM2 的表达及活性。结论 丹参酮ⅡA 能逆转SHR 的左心室肥厚, 这可能与其增加GSTμ2 表达, 减少活性氧产生, 消除氧化应激有关。     

靶向内皮细胞α7受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的: 研究靶向内皮细胞α₇ 受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法: 应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过计数血管的分支点数,观察16种靶向内皮细胞α₇受体的新化合物对于在体血管新生的影响。结果与结论: 化合物13、14在1~100μmol·L^-1浓度范围内,既没有促进血管新生的作用,也没有抑制血管新生的作用,与生理盐水组相比无显著差异,而在浓度为1000μmol·L^-1时,对CAM的血管新生有促进作用。化合物5在浓度为100和1000μmol·L^-1有抑制血管新生的作用,而在浓度为1和10μmol·L^-1时,则对血管新生没有影响。     

吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体和κ受体mRNA表达的研究1

目的 观察吗啡依赖戒断时大鼠脊髓和脑干μ受体和κ受体 mRNA 表达以及毒蕈碱受体拮抗剂 、 NMDA 受体拮抗剂和 NOS 抑制剂对这些基因表达的影响 。方法 用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR),以β-actin mRNA 为内标检测μ受体和κ受体 mRNA 的表达水平 。结果 吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体 mRNA 表达明显升高,纳洛酮激发大鼠戒断反应 1h 后μ受体基因表达降低,4h 后接近正常组,而脊髓和脑干κ受体基因的变化与μ受体基因表达趋势相反 。鞘内注射 PKA 抑制剂 Rp-cAMPs 和蛋白磷酸酶抑制剂 calyculin A 可以明显减少脊髓和脑干中μ受体和κ受体基因表达,而 PKA 激活剂 Sp-cAMPs 则无明显影响;经 NOS 抑制剂 l-N-硝基精氨酸甲酯(l-NAME)处理后,脊髓μ受体和κ受体基因表达明显减少,经毒蕈碱(M)受体拮抗剂甲基东莨菪碱处理后,脊髓μ受体和脑干κ受体基因表达也明显减少,而脊髓κ受体和脑干μ受体基因表达变化不明显;经 NMDA 拮抗剂 MK801和 M1受体拮抗剂哌拉唑嗪处理后,脊髓和脑干μ受体和κ受体基因表达较戒断 1h 组无明显差异 。脊髓和脑干中β-actin 基因表达各处理组之间没有差别。结论 吗啡依赖和戒断动物脊髓和脑干中μ受体和κ受体基因表达发生改变,M受体拮抗剂和 NOS 抑制剂在吗啡戒断反应时减少μ受体和κ受体基因表达可能是它们有效控制吗啡戒断症状的机制之一 。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的: 研究中华眼镜蛇毒组分C Ⅱ (FC ⅡNNAV) 对多药耐药白血病细胞K562/A02 的抑制作用及机制。方法: 应用MTT 法观察FC ⅡNNAV 体外对K562 和K562/A02 的毒性作用, 流式细胞仪法观察FC ⅡNNAV 体外对K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达的影响, 比色法检测Caspase-3 活性变化。结果: FC ⅡNNAV 对耐药K562/A02 及敏感K562 细胞均有抑制作用, IC50 分别为0.75±0.01 μg·ml^-1 和0.67±0.11 μg·ml^-1。流式细胞仪检测发现FC ⅡNNAV 能使K562/A02 细胞的P-gp, Bcl-2 蛋白表达明显下调;Caspase-3 活性明显增强。结论: FC ⅡNNAV 对细胞K562/A02 及细胞K562 均有较强的抑制作用, 且抑制作用与剂量呈正相关, FC ⅡNNAV 可能通过抑制K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达, 激活Caspase-3 活性而诱导K562/A02 细胞凋亡。     

TGFβ1型受体在2型糖尿病大鼠肾皮质的表达及缬沙坦调节作用

目的: 研究转化生长因子β1型受体(TβR-Ⅰ)在2型糖尿病大鼠肾皮质中的表达及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对其调节作用。方法: 制备2型糖尿病大鼠模型,在缬沙坦治疗8 周后,取肾脏,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测肾皮质TβR-ⅠmRNA 的表达。结果: 糖尿病组大鼠肾皮质TβR-Ⅰ mRNA 的表达(0.719 ±0.139)较正常组(0.257 ±0.116)明显增高(P<0.01);糖尿病+缬沙坦组(0.341 ±0.11),与糖尿病组比较,显著下降(P<0.01)。结论: 2型糖尿病大鼠肾皮质中TβR-Ⅰ 表达是上调的,缬沙坦对TβR-Ⅰ有抑制作用。     

萘哌地尔衍生物(BWYJ)对血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的: 观察萘哌地尔衍生物(BWYJ) 对家兔血管平滑肌细胞游离钙浓度的影响, 对其血管活性进行机理探讨, 进一步明确其作用机制。方法: 采用钙荧光指示剂Fura-2 /AM 负载的培养家兔胸主动脉平滑肌细胞, 观察该药对NA 、5-HT 和高钾所致的[Ca²⁺] _i 的升高的影响。结果: Fura-2 /AM 负载血管平滑肌细胞的实验中, 静息时各浓度的BWYJ 对[Ca²⁺]_i 无明显影响, 但其对NA 和5-HT 所引起的血管平滑肌[Ca²⁺] _i 增加均有明显的抑制作用, 而不影响高钾所致血管平滑肌[Ca²⁺] _i 的增加。结论: BWYJ 通过阻断细胞膜上的α₁ 受体或5-HT₂A 受体,抑制这些受体中介的钙内流, 从而抑制细胞内Ca²⁺的释放, 使血管平滑肌[Ca²⁺] _i 降低。     

血管紧张素Ⅱ和缬沙坦对血管内皮细胞AT1/AT2及eNOS 表达的调节作用

目的: 研究缬沙坦在血管内皮细胞中对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 受体I 型(AT₁) 和Ⅱ型(AT₂) 、一氧化氮合酶(eNOS) 的表达和一氧化氮(NO) 生成的影响。方法: 使用人脐静脉内皮细胞系ECV-304(HUVECs), 分为对照组、Ang Ⅱ组、缬沙坦组和Ang Ⅱ加缬沙坦组, 作用不同时间, 检测AT₁/AT₂ 的mRNA和蛋白表达、eNOS 的蛋白表达和NO 的生成。结果: 在HUVECs 细胞中未检测到AT₂的蛋白表达,Ang Ⅱ 、缬沙坦均显著抑制细胞中AT₁的mRNA 和蛋白表达, 且缬沙坦呈明显的剂量依赖效应, Ang Ⅱ作用36 h 显著抑制NO 的生成而合用缬沙坦可明显逆转该效应。结论: 在HUVECs 中缬沙坦可通过自身的结合下调AT₁, 并能逆转Ang Ⅱ长时间作用对NO生成的抑制作用, 提示缬沙坦可改善血管内皮细胞的功能。     

姜黄素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的双重作用

目的: 研究姜黄素(Cur) 对过氧化氢(H₂O₂) 诱导的血管内皮细胞ECV304 的作用及可能机制;方法:胎盘兰计数法分组观察在不同的时间点加入姜黄素后对H₂O₂ 诱导的ECV304 细胞氧化损伤的作用。流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化,试剂盒检测一氧化氮(NO) 、丙二醛(MDA) 含量及超歧化物氧化酶(SOD) 、谷胱甘肽还原酶(GR) 活性的变化。结果: 姜黄素0 ~ 100μmol·L^-1 与H₂O₂500μmol·L^-1同时作用5 h,随姜黄素浓度升高细胞存活率升高;25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素预先作用1 h,再换为H₂O₂ 500μmol·L^-1作用4 h,细胞存活率明显下降;H₂O₂500μmol·L^-1 作用4 h,再加入25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素作用1 h,细胞存活率也升高。姜黄素对H₂O₂ 诱导的细胞凋亡没有明显的影响,但同时作用组、H₂O₂ 先作用组S 期细胞所占比例升高,姜黄素先作用组S 期细胞所占比例下降。同时作用组、H₂O₂ 先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对升高,MDA 水平下降,姜黄素先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对下降,MDA 水平升高。结论: 姜黄素对H₂O₂诱导的血管内皮细胞ECV304 有双重效应,即有保护效应也有细胞毒效应,与其作用时间点有关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

培养乳鼠心肌细胞时钟基因RT-PCR 检测方法的建立

目的 建立检测培养乳鼠心肌细胞中时钟基因的RT-PCR 方法。 方法 根据GeneBank 基因库大鼠时钟基因bmal1、per2 和dbp 全序列设计合成了3 对寡聚核苷酸引物。以离体培养的乳鼠心肌细胞中提取RNA 为模板, 筛选了(PCR) 最佳反应条件, 并进行了特异性检验。 结果 在20 μl 体积中, PCR 最佳系统组成分别为:dbp:Taq 酶、dNTP 和Mg²⁺的用量分别为0.5 U、0.006 μmol 和0.03 μmol;最佳退火温度为58 ℃, 循环30 次;bmal1:Taq 酶、dNTP 和Mg²⁺ 的用量分别为0.5 U、0.006 μmol 和0.035 μmol;最佳退火温度为57 ℃, 循环30 次;per2:Taq 酶、dNTP 和Mg²⁺的用量分别为0.5 U、0.006 μmol 和0.05 μmol;最佳退火温度为58 ℃, 循环32 次。 结论 成功建立RT-PCR 检测大鼠离体培养心肌细胞时钟基因的方法。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂逆转1-甲基-4-苯基吡啶离子抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸

目的 探讨Ⅱ、Ⅲ 组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs) 激动剂对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP⁺) 抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸(Glu) 的影响。 方法 应用同位素标记法测定星形胶质细胞对培养液中[3H]-D, L-谷氨酸的摄取, 应用四氮唑(MTT) 比色法检测星形胶质细胞的活性。 结果 MPP⁺150、200 μmol·L^-1可以明显抑制星形胶质细胞摄取Glu,抑制率达58.3 %和70.1 %, 但并不影响细胞活性;Ⅱ组mGluRs 激动剂(2S, 2' R, 3' R)-2-(2', 3'-dicarboxycyclopropyl) glycine (DCG-IV) 0.1、1、10,100 μmol·L^-1和Ⅲ组mGluRs 激动剂L(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (L-AP4) 1、10、100 μmol·L^-1可以逆转MPP⁺对星形胶质细胞摄取Glu 的抑制作用。 结论 MPP⁺抑制星形胶质细胞摄取Glu 可能与直接影响谷氨酸转运体(GluTs) 的功能有关, 激活星形胶质细胞上的Ⅱ、Ⅲ组mGluRs 可以通过促进GluTs 摄取Glu、进而降低细胞外液的Glu 浓度而发挥神经保护作用。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

Ca2+/CaM-CaN 途径参与神经肽Y 诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的: 探讨Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径在神经肽Y(NPY) 诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 用NPY (10、100 nmol·L^-1) 刺激WISTAR 乳鼠心肌细胞, 并用CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 加以干预。应用3H-Leu 掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用免疫印迹(Western-blot) 和组织化学法分别测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达和CaN 酶的活性。结果: 较高浓度NPY(100 nmol·L^-1) 可明显增加心肌细胞3H-Leu 掺入量(P < 0.05), 加入CsA 可阻断上述效应;NPY(100 nmol·L^-1) 还可明显增加心肌细胞内CaN 酶比活性(P <0.05), 并刺激心肌细胞CaN-α蛋白表达(P <0.05) 。结论: NPY 可活化大鼠心肌细胞Ca²⁺CaM-CaN 途径, 而CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 可抑制NPY 诱导的心肌肥大, 说明Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径参与神经肽Y 诱导的心肌细胞肥大效应。     

多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。