鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的: 研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法: 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果: 鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论: 鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

黄芪总提物对大鼠肝星状细胞增殖及产生胶原的影响

目的 研究黄芪总提物(TEA) 对体外肝星状细胞增殖和产生胶原的影响。方法 采用IV 型胶原酶灌流分离大鼠肝星状细胞进行原代培养, 用CCl₄急性损伤的大鼠肝枯否细胞条件培养基(KCCM)刺激肝星状细胞, 用³H-TdR 和³H-Proline 的掺入法分别检测肝星状细胞的增殖和胶原的产生。结果 TEA (5 ~ 40 mg·L^-1) 可明显降低由KCCM 刺激的肝星状细胞的增殖和胶原的产生。结论 TEA对体外激活的肝星状细胞的增殖和产生胶原有明显抑制作用, 该作用可能是TEA 抗肝纤维化的机理之一。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

重组副腺病毒介导的大鼠星状细胞激活相关蛋白基因转染对大鼠肝星状细胞表达间质胶原酶mRNA的影响

目的: 研究重组副腺病毒介导的大鼠星状细胞激活相关蛋白（stellate cell activation-associated Protein, STAP) 基因 转染对 大鼠肝 星状细 胞表达 间质肢原酶mRNA的影响。方法: 构建并制备rAAV/iSTAP病毒载体。链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注法分离纯化SD大鼠肝星状细胞,转染HSC,用半定量RT-PCR法研究对肝星状细胞表达间质胶原酶mRNA的影响。结果: rAAV/rSTAP转染可提高大鼠肝星状细胞表达间质胶原酶Mma的水平。结论: 间质胶原酶与肝纤维化形成密切相关,rAAV/rSTAP转染可提高大鼠肝星状细胞表达间质胶原酶mRNA的水平,提示rAAV/rSTAP上调大鼠肝星状细胞间质胶原酶mRNA的表达水平可能是其抗纤维化的机理之一。     

夏枯草总三萜对乙醛刺激的肝星状细胞作用及部分机制

目的: 探讨夏枯草总三萜(TTP)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响及部分作用机制。方法: 用不同浓度的TTP(10、30、100、300、1000 μg/mL)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测HSC-T6中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型前胶原(ProcollagenⅠ)、TGF-β信号转导通路下游中介分子Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达。结果: TTP可抑制乙醛刺激的大鼠HSC-T6增殖,诱导其凋亡,下调HSC-T6中α-SMA、ProcollagenⅠ、Smad2、Smad3的mRNA表达,上调Smad7的mRNA表达。结论: TTP对乙醛刺激的HSC-T6增殖具有抑制作用,并能够促进其凋亡,下调α-SMA、ProcollagenⅠ表达量,其机制可能与TTP能抑制Smad2、Smad3表达,升高Smad7的表达,从而对TGF-β/Smad信号通路发挥调控作用有关。     

雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFb) 增殖及α₁(Ⅰ) 型前胶原合成的影响。方法:建立Ang Ⅱ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT) 比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot 印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α₁(Ⅰ) 型前胶原mRNA 及蛋白表达。结果:雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α₁(Ⅰ) 型前胶原合成。结论:雷公藤甲素可以通过抑制Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α₁(Ⅰ) 型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。     

γ-干扰素对肝纤维化大鼠I、III 型胶原表达的影响

目的:探讨γ-干扰素抗肝纤维化的治疗机制。方法:17 只正常雄性Wistar 大鼠分成3 组, 除正常对照组外, 余2 组大鼠肝纤维化造模均采用腹腔注射猪血清(每周2 次, 每次0.5 ml) 。γ-干扰素治疗组在造模第9 周每天皮下注射10 万单位的干扰素。模型组和正常对照组给等量的生理盐水灌胃。12 周处死大鼠, HE 和Masson 染色观察肝纤维化的形成, RT-PCR 检测肝组织中I、III 型胶原mRNA 的表达, 免疫组化法观察I、III 型胶原蛋白的表达。结果:γ-干扰素显著逆转了猪血清诱导的肝纤维化, 与模型组比较, γ-干扰素治疗组能明显降解纤维化大鼠肝中的胶原(P<0.05) 。PT-PCR 分析可见I、III型胶原mRNA 的表达在γ-干扰素治疗组均明显减少。I、III 型胶原蛋白的表达在γ-干扰素治疗组均明显减少。结论:γ-干扰素能逆转免疫引起的肝纤维化, 这是由于其能促进肝脏胶原的降解作用, 最终导致肝纤维化的逆转。     

靶向siRNA下调人结直肠癌 Colo320 细胞端粒长度与端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的: 探讨发夹状 shRNA 封阻原癌基因(c-myc) , 抑制癌细胞增殖 、生长的作用。方法: 针对c-myc 的构建发夹状 shRNA 的真核表达质粒, 并转染人结直肠癌 Colo320细胞。荧光定量 RT-PCR检测 c-myc 及细胞端粒酶逆转录酶的 mRNA 的表达,Western-blot 检测 c-myc、端粒酶逆转录酶(hu-man telomerase reverse transeriptase, hTERT) 蛋白表达水平 。Southern blot 检测端粒的长度, PCR-ELISE法检测端粒酶活性。³H-thymidine 实验分析DNA 合成和细胞增殖 。结果: 转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时c-myc 和 hTERT 的 mRNA 和蛋白表达显著下降, 端粒的长度明显缩短, 端粒酶活性降低 。结论: c-myc 的 shRNA 对人结直肠癌Colo320 细胞的生长增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用, 并呈剂量依赖关系 。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的: 研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法: 采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和Annexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果: NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24 h 的IC₅₀分别为(2.48±0.41) 、(1.74±0.27) 和(0.83±0.19) mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论: NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60 细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸(ASODN) 对急性早幼粒细胞系HL-60 细胞凋亡的影响。方法: 应用四唑盐(MTT) 比色法分析细胞增殖;倒置显微镜观察细胞形态学变化;原位末端标记(TUNEL) 法检测细胞凋亡指数(AI);流式细胞术(FCM) 定量检测细胞凋亡;RT-PCR 半定量检测生存素mRNA 的表达。结果: 5～20 μmol·L^-1生存素ASODN 对HL-60 细胞增殖均有抑制作用, 且呈时间和剂量依赖性。ASODN 组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论: 生存素ASODN 能有效抑制HL-60 细胞生存素mRNA 的表达并诱导细胞凋亡, 表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

胃瘤安不同组方对人胃癌SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的: 通过观察胃瘤安(全方、三棱莪术方、无三棱莪术方)小、中、大3个剂量作用于人胃癌SGC-7901细胞24、48 h,探讨其对胃癌细胞的生长抑制作用及细胞周期和凋亡的影响,并对3种组方的胃瘤安进行比较。方法: 用RPMI1640 培养液对人胃癌细胞SGC-7901进行传代培养,采用MTT法检测胃瘤安不同组方对SGC-7901的生长抑制作用,采用流式细胞术检测胃瘤安不同组方对SGC-7901细胞凋亡及周期的影响。结果: 胃瘤安3种不同组方均可抑制SGC-7901细胞增殖;3种不同组方的胃瘤安均可促进正常的SGC-7901细胞凋亡,细胞周期分析提示胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)将细胞SGC-7901阻滞于S期,胃瘤安(三棱、莪术)将SGC-7901细胞阻滞于G₀ /G₁期,效应均呈浓度和时间依赖性。结论: 胃瘤安3种不同组方均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,可将细胞阻滞在S和G₀/G₁期,其中以胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)效果最为明显。     

奥曲肽对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

目的: 探讨奥曲肽抑制肝癌细胞生长的作用。方法: 人肝癌细胞SMMC-7721 培养于含10 %胎牛血清、100 U·ml^-1青霉素、链霉素的RPMI1640 培养液中。以4 个稀释度10^-5、10^-4、10^-3、10^-2g·L^-1将奥曲肽加入培养液,于加药后第48 h 行MTT 比色实验检测生长抑制率。奥曲肽浓度为10^-3g·L^-1时于0、6、12、24、36 h 行DNA 染色分析细胞周期。结果: MTT 比色法测定显示奥曲肽抑制肝癌细胞的生长,在浓度为10^-5、10^-4、10^-3、10^-2g·L^-1作用48 h 生长抑制率分别为9.33 %、12.70 %、19.70 %、20.93 %。药物作用12、24 h,G0-G1 期细胞比例增加,G₂-M 期细胞比例减少。结论: 奥曲肽抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,机制可能是将肝癌细胞阻滞于G₀-G₁ 期,阻止细胞进入G₂-M 期。     

乳大鼠表皮细胞体外培养及环孢素A对其增殖抑制作用

目的 观察无表皮生长因子(EGF)条件下体外培养乳大鼠表皮细胞生长特点, 及不同浓度的环孢表A (CSA)对细胞增殖的影响。方法 用单细胞悬液法体外培养出生24 h 内的乳大鼠的表皮细胞, 观察其生长曲线和CSA 对细胞增殖的抑制作用。结果 在无EGF 条件下, 细胞培养的最长时间为15 天。接种24 h 开始贴壁, 第2 天开始生长, 第5 ~ 7 天达高峰, 第10 天开始在胞浆中出现空泡, 以后逐渐死亡。1 μg/ml CSA 在24 h、48 h 对细胞增殖无明显抑制作用, 72h 时的抑制率为15 %; 3 μg/ml CSA 在24 h 也无抑制作用, 48 h 和72 h 的抑制率分别达18%和30%; 6 μg/ml CSA 培养24 h、48 h、72 h 后抑制率分别为16 %、40 %和65 %。结论 无EGF 时培养的乳大鼠表皮细胞在5 ~ 7 天生长达高峰, 最长培养时间为15 天。CSA 对细胞增殖有抑制作用, 且有明显的浓度和时间依赖性。     

金粉蕨素对脂质过氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的 探讨金粉蕨素对脂质过氧化损伤人内皮细胞株(ECV304) 的保护作用及其可能的分子作用机制。 方法 在铜离子诱发的低密度脂蛋白氧化修饰的基础上, 建立内皮细胞(endothelial cell, EC)的脂质过氧化损伤模型;采用MTT 比色法、硝酸还原酶法等方法, 测定不同浓度金粉蕨素(1.0、5.0、10.0 μmol·L^-1) 对EC 生长抑制率、硫代巴比妥反应物(thiobarbituric acid-reactive substances, TBARS)、LDH 及NO 含量的影响。 结果 氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein, ox-LDL) 作用24 h 后, 对EC 的生长增殖有明显的抑制作用, 细胞培养液中TBARS、LDH 水平显著升高,NO含量降价;而不同浓度金粉蕨素与oxLDL 共同孵育24 h, 呈剂量依赖性对抗oxLDL 对EC 的损伤, 并促进EC 增殖, 同时使培养液中TBARS、LDH 含量降低, NO 含量回升。 结论 脂质过氧化能直接损伤内皮细胞, 金粉蕨素对脂质过氧化损伤的内皮细胞有保护作用。     

麻黄碱联合丙泊酚抑制芬太尼咳嗽反射的临床研究

目的 研究麻黄碱联合丙泊酚对芬太尼咳嗽反射(fentanyl-induced cough,FIC)的抑制作用。方法 选择320例择期手术接受全麻的患者,根据计算机随机数字表随机进入4组:Ⅰ组(对照组)静脉注射 2 mL 生理盐水;Ⅱ组(麻黄碱组)静脉注射 6 mg 麻黄碱;Ⅲ组(丙泊酚组)静脉注射 0.8 mg/kg 丙泊酚;Ⅳ组(丙泊酚联合麻黄碱组)静脉注射 0.8 mg/kg 丙泊酚加 6 mg 麻黄碱。给予治疗药物 2 min 后,经外周静脉快速注射 2 μg/kg 芬太尼。观察并记录患者的血压、心率、脉博血氧饱和度等生命体征, 并由一位医师按照盲法观察注射芬太尼后 1 min 内是否出现咳嗽,记录咳嗽发生的次数,并且根据咳嗽发生次数进行严重程度分级。结果 Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组患者的FIC发生率和严重程度均较Ⅰ组明显降低,而且Ⅳ组患者的血流动力学更加平稳。结论 麻醉诱导时联合应用麻黄碱和丙泊酚对FIC的抑制效果更好,患者血流动力学更加稳定,是临床上一个简单、有效的防治FIC的办法。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1 (P27)蛋白的表达。结果: (1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFB G₀/G₁期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G₂/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05 或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β₁的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论: Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

普罗布考对受损内皮细胞增殖和功能修复的促进作用1

目的 研究普罗布考对受损内皮细胞增殖和再生内皮细胞功能修复的影响。 方法 分别采用MTT 比色法和PCNA 免疫组化法测定体外培养的人脐静脉内皮细胞所处增殖状态;以兔胸主动脉血管环对乙酰胆碱舒张反应和内皮细胞分泌NO、PGI2 的能力评价内皮细胞功能状况。 结果 LPC 作用24 h可导致内皮细胞增殖显著受抑及分泌NO、PGI2 功能受损, 不同剂量普罗布考(20, 40, 80 μmol·L^-1) 可促进LPC 损伤的内皮细胞增殖(55.5 %, 59.3 %,72.2 % vs 31.7 %, P <0.01), 同时提高血管成型术后兔胸主动脉血管环内皮依赖性舒张功能(66.63 %vs 25.95 %, P <0.01), 并修复LPC 损伤的内皮细胞分泌NO、PGI2 的功能(P <0.01)。 结论 普罗布考可促进受损内皮细胞增殖和再生内皮细胞功能修复。