产抗菌活性红树林放线菌G15发酵条件的优化

G15是分离自广西山口红树林保护区的一株具有较强抗菌活性的放线菌.为了提高其活性物质的产量,以金黄色葡萄球菌为指示菌,对其发酵条件进行了研究.单因素实验表明,其最佳的发酵培养基为:可溶性淀粉20g,酵母粉15g,NaCl30g,蒸馏水1000mL;最佳培养条件为:接种量15％、装液量为30％、培养时间为168h,初始pH值为7 5.优化后G15发酵液的活性提高了3倍左右.     

拮抗黄曲霉海洋放线菌的筛选及发酵条件优化

该研究从黄海海域沉积物中筛选一株能高效抑制黄曲霉（Aspergillus flavus）的海洋放线菌,通过形态观察、生理生化试验及 分子生物学技术对其进行鉴定,并以抑菌圈直径为响应值,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面试验对其产抑菌活性 物质的发酵条件进行优化。 结果表明,筛选获得一株对黄曲霉抑制活性较高的菌株B11,并鉴定其为锈赤蜡黄链霉菌（Streptomyces rubiginosohelvolus）;菌株B11产抑菌活性物质的主要影响因素为发酵温度、发酵时间及接种量,最优发酵条件为：发酵温度29 ℃、发 酵时间11 d、接种量5%。 在此最优发酵条件下,抑菌圈直径达到（2.9±0.15）cm,抑菌圈直径比优化前（1.4±0.15）cm增大51.72%。     

放线菌JSD-1抑菌活性初探及影响其抑菌活性的发酵条件优化

本文初步研究了放线菌JSD-1的抑菌活性,并优化了影响其抑菌活性的发酵条件,从而增强抑菌效果。本研究以致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,通过稀释涂布、琼脂打孔法和液态共培养法探究菌株JSD-1抑菌活性,并采用单因素试验及正交试验设计对影响JSD-1抑菌活性的发酵培养基及发酵条件进行优化。最终得出影响JSD-1抑菌活性的最适培养基为葡萄糖10.00 g/L,尿素2.50 g/L,最佳发酵条件组合为温度35 ℃,pH 7.0,接种量5%,培养时间7 d。通过发酵条件优化可明显增强放线菌JSD-1的抑菌活性,抑菌圈直径由优化前的10.08 mm增长至18.63 mm,有利于菌株JSD-1作为拮抗菌的进一步开发利用。研究发现JSD-1在病原细菌的对数生长期、稳定期及衰亡期持续抑制其生长增殖,这表明菌株JSD-1具有很大的抗菌潜力,可作为生防制剂的候选菌株。     

放线菌327~#的发酵培养基筛选及培养条件优化

为使放线菌327#最大限度地生产拮抗物质,在摇瓶试验中采用单因素和正交试验对其发酵培养基进行优化。同时考察了培养温度、初始pH值、发酵液装量对放线菌327#生产拮抗物质的影响。得到了最佳培养基配方为:大豆粉0.5%,硫酸铵1.5%,葡萄糖2.5%,氯化钠0.6%,碳酸钙0.6%。最佳发酵条件为培养温度30℃,初始pH值7.0,发酵液装量为250mL摇瓶装15mL。培养时间3d时,发酵液中拮抗物质达到最高水平,对青霉的抑菌圈直径达(22.4±0.4)mm。     

产抗氧化活性物质的海洋放线菌筛选与鉴定

采用传统的分离培养技术对4种海洋动物肠道中的放线菌进行分离,利用紫外-可见分光光度法对分离菌株的代谢产物进行抗氧化活性初筛测定,再采用电子自旋共振仪(ESR)进行4种自由基清除率复筛测定,并对抗氧化活性强的菌株进行16S r DNA水平鉴定与系统发育树分析。结果表明共分离到37株放线菌,初筛测定获得7株菌的代谢产物对DPPH自由基清除率超过50%,其中菌株CH16与CH38的代谢产物通过ESR测定发现对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基及烷基自由基的消除率均超过50%,并分别鉴定为Amycolatopsis rifamycinica与Amycolatopsis sp.。该研究为从海洋环境获得产生抗氧化活性物质菌株资源与开发提供依据。     

产抗氧化活性物质的海洋放线菌筛选与鉴定

采用传统的分离培养技术对4种海洋动物肠道中的放线菌进行分离,利用紫外-可见分光光度法对分离菌株的代谢产物进行抗氧化活性初筛测定,再采用电子自旋共振仪（ESR）进行4种自由基清除率复筛测定,并对抗氧化活性强的菌株进行16S r DNA水平鉴定与系统发育树分析。结果表明共分离到37株放线菌,初筛测定获得7株菌的代谢产物对DPPH自由基清除率超过50%,其中菌株CH16与CH38的代谢产物通过ESR测定发现对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基及烷基自由基的消除率均超过50%,并分别鉴定为Amycolatopsis rifamycinica与Amycolatopsis sp.。该研究为从海洋环境获得产生抗氧化活性物质菌株资源与开发提供依据。      

北冰洋来源广谱抗菌海洋细菌的筛选及发酵条件优化

从北冰洋海域沉积物中分离筛选广谱抗菌海洋细菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并以白色念珠菌（Candida albicans）为指示菌,抑菌圈直径为响应值,通过单因素及响应面试验对其培养条件进行优化。结果表明,分离筛选出一株具有广谱抗菌性的52号菌株,其对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、大肠杆菌（Escherichia coli）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）均有一定的抑制作用,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。52号菌株的最佳培养条件为培养温度36 ℃、培养时间75 h、初始pH值6.5、转速178 r/min。在此最优培养条件下,52号菌株对白色念珠菌的抑菌圈直径为30.23 mm。     

一株海洋链霉菌发酵条件的优化及其抑菌活性物质的研究

灰略红链霉菌（Streptomyces griseorubens）F8分离于黄海海岸线沉淀物,通过单因素试验优化其发酵条件,并对其代谢产物及抑菌活性进行研究。结果表明,最佳发酵条件为培养时间11 d、接种量8%、培养温度30 ℃、初始pH值8.0。菌株F8所产抑菌物质对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,变形杆菌（Proteus）和产气杆菌（Aerobacter aerogenes）具有抑制作用,抑菌圈直径分别为23 mm、34 mm、44 mm,最小抑菌浓度（MIC）分别为100 μg/mL、30 μg/mL、20 μg/mL。菌株F8所产抑菌活性物质的酸碱、热、光照以及遗传稳定性均较好。     

海洋细菌Bn-103产抑菌物质发酵条件及部分理化性质

对从海泥中分离到的一株海洋细菌Bn-103产抑菌物质的培养基、发酵条件及所产抑菌物质的热稳定性、pH值稳定性进行了初步研究。结果表明,海洋细菌Bn-103适宜培养基成分组合为：葡萄糖1 g/dL,蛋白胨0.1～0.3 g/dL,酵母膏0.1 g/dL,海水添加量60%～80%;培养基初始pH 5.0～7.0;接种体积分数2%～4%;发酵时间48～72 h;抑菌物质80℃处理90 min,保留活性80%以上,pH值稳定在pH 3～8之间。     

一株放线菌菌株HDF-1的分离、鉴定及抑菌活性研究

从黑河湿地土壤样品中分离得到一株中度嗜碱放线菌HDF-1,适宜生长pH值为8～10,培养时可以向细胞外分泌蛋白酶、淀粉酶,不能分解含硫氨基酸产生硫化氢,不能产生胞外纤维素酶。菌株HDF-1能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖以及麦芽糖作为碳源;该菌株代谢产物中含有抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的活性物质,抑菌圈直径达到了15.2 mm,而对黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉（Penicillium chrysogenum）和大肠杆菌（Escherichia coli）的生长没有抑制作用。根据菌株HDF-1的形态特征、生理生化特征及其16S rRNA系统进化分析,将该菌株鉴定为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

产蛋白酶海洋细菌的筛选、鉴定及发酵培养基的研究

采用酪蛋白培养基,对来源于中国南海的深海海泥进行微生物的富集与筛选,分离出18株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出一株产蛋白酶活力最高的菌株C-7,结合生理生化实验及16S rDNA基因序列鉴定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。该菌株所产蛋白酶的最适反应温度为50℃,最适pH7,属于中温中性蛋白酶,该蛋白酶在15%NaCl条件下仍能保持原有酶活的43%,具有良好的耐盐性。优化后该菌株产蛋白酶培养基为:葡萄糖5.0g,蛋白胨10.0g,KH2PO40.5g,MgSO4·7H2O 0.3g,NaCl 10.0g,CaCl20.5g,吐温-80 1.5g,蒸馏水1L,pH7.2。      

甘薯渣发酵海洋放线菌MA03产生抗黄曲霉毒素有效成分的响应面优化研究

海洋放线菌菌株MA03能够产生抗黄曲霉毒素有效成分,为了获得其最佳的发酵条件,同时探索甘薯渣资源化利用的新方法,本研究以甘薯渣为营养基质对MA03进行液体发酵,并采用响应面法优化MA03的发酵条件。利用软件Design-Expert 8.0.6通过Plackett-Burman设计,筛选出3个影响产抑制黄曲霉毒素有效成分的显著因素:海水浓度、硫酸铵浓度和接种量,然后经最陡爬坡实验逼近最大响应值区域,再利用Box-Behnken设计对显著因子进行优化。最终确定最优培养条件为:海水浓度0.64%,硫酸铵浓度3.47‰,接种量8.44%,甘薯渣浓度3%,蔗糖浓度2%,硫酸镁浓度1‰,初始p H8.5,发酵温度28℃,发酵时间10d。此条件下黄曲霉毒素抑制率预测值97.62%,对该模型进行验证,验证实验平均值为96.24%±0.38%,与预测值接近,说明该预测模型可靠性较高,可应用于MA03产抗曲霉有效成分的优化。      

枯草芽孢杆菌C3产抗菌物质发酵培养基的优化

该文利用对黑曲霉孢子萌发有抑制作用的枯草芽孢杆菌C3,研究优化产抗菌物质的发酵培养基组分.在碳源、氮源、C/N单因素多水平试验结果的基础上,设计Na+、Mg2+、K+度3因素3水平L9(33)正交试验,研究无机盐离子对枯草芽孢杆菌产抗菌物质的影响.结果表明,碳源为1％葡萄糖,氮源为蛋白胨和酵母浸粉各1.5％,碳氮比为1∶3,NaCl为0.5％,KH2PO4为0.1％,MgSO4·7H2O为0.15％时,枯草芽孢杆菌产抗菌物质的抑菌效果明显,对霉菌孢子萌发的抑制率提高了118.64％.     

海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化

为获得纤溶酶高产菌株及其最优发酵条件,以海洋环境来源的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H-A-03为出发菌株,经过60Co辐射诱变获得了一株遗传稳定性好的纤溶酶高产菌株F8-C,其酶活力较出发菌株提高28.78%。采用统计学优化方法获得了组分更简单、用量更少、更利于菌株产酶的培养基：可溶性淀粉41.6 g/L、黄豆粕粉26.2 g/L、CaCl2 1.0 g/L,KH2PO4 2.0 g/L。在此基础上,3 L摇瓶放大试验结果显示,菌株F8-C的产酶量达到（3 231±21） U/mL,较出发菌株H-A-3提高44.8%。结果表明利用60Co辐射诱变育种,并采用统计学方法优化培养基,对于提高枯草芽孢杆菌纤溶酶的产酶量是一种有效策略。该研究结果也将为下一步发酵罐扩大试验奠定基础。