产乳酸菌素菌株的筛选鉴定及其特性分析

本实验对广西巴马村天然发酵米粉中的乳酸菌进行分离鉴定,筛选出一株具有抑菌活性的植物乳杆菌M44,并研究了其所产乳酸菌素的基本性质。采用微生物形态学和16S r DNA序列分析法鉴定菌株M44为植物乳杆菌,其发酵上清液具有抑菌活性,抑菌物质确定为蛋白类。采用盐析法粗提所产乳酸菌素,确定最佳硫酸铵沉淀浓度为60%。由乳酸菌素产量与菌株生长的关系实验得出乳酸菌素的最佳收获时间为发酵培养12 h。管碟法抑菌实验表明,该乳酸菌素在p H范围2~8时有良好的抑菌活性;121℃处理15 min后仍具有抑菌活性;胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后抑菌性消失;对单核增生李斯特细菌、大肠杆菌、沙门氏菌,金黄色葡萄球菌均有抑制作用。该乳酸菌素为天然生物防腐剂的开发与应用提供了研究基础。      

植物乳杆菌C8-1产类细菌素的初步研究

从发酵2周的泡菜中分离到66株乳杆菌,以其中4株乳杆菌作为出发菌株进行紫外诱变处理得到一株产类细菌素的突变株C8-1。基于细胞形态、生理生化和16S rDNA测序数据,菌株C8-1被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株C8-1所产的类细菌素具有较宽的抑菌谱,能够抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等多种食品腐败菌和致病菌;有较好的热稳定性,在4℃冷藏5 d和-20℃冷冻5d以及60,80,100℃和121℃分别加热15 min,活性损失均不超过6%;且抑菌活性随pH值增大逐步降低,当pH≥6时,抑菌活性消失,对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶耐受性较强,对胰蛋白酶较为敏感。这些数据表明,产类细菌素的植物乳杆菌C8-1在食品加工中具有进一步地潜在应用价值。     

产细菌素植物乳杆菌菌株的筛选及其细菌素生物学特征研究

从甘蓝泡菜中分离到６９株乳酸杆菌,通过琼脂点扩散交叉拮抗试验,筛选出３株有明显抑菌活性代谢产物的植物乳杆菌。排除酸、过氧化氢等干扰因素后,离心发酵液对指示菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ９６Ｄ仍有抑菌作用,用胰蛋白酶对其透析液处理后活性丧失,说明它们产生的抑菌物质是细菌素。以Ｇ８菌株为试材,对其细菌素类物质的产生及细菌素粗提物进一步研究,发现在对数末期其抑菌活性最高,对热相对稳定（１００℃,２０ｍｉｎ）,易被胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和胃蛋白酶失活,显示活性的ｐＨ值范围为４．０～５．５,粗提液表现为不仅抗明串株菌属、片球菌属、乳杆菌属的一些菌株,而且抗一些非乳酸菌的革兰氏阳性菌,但对大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等革兰氏阴性菌没有任何抑制作用。说明Ｇ８菌株产生的是一类抗广谱革兰氏阳性菌的细菌素     

一株产广谱细菌素乳酸菌菌株的分离鉴定及其细菌素特性研究

目的:从母乳婴儿粪便筛选获得产广谱细菌素的乳酸菌菌株,并对其所产细菌素的理化及生物学特性进行研究分析,预测其在食品工业中的应用前景。方法:以课题组从母乳婴儿粪便分离得到的23株乳酸菌为试材,采用牛津杯琼脂扩散法,选取单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和大肠杆菌（Escherichia coli）为指示菌筛选产广谱细菌素的优良菌株。通过菌体形态观察、生理生化特征及16S r DNA序列分析对菌株进行分类学鉴定,并从耐酸、耐热、蛋白酶敏感性、抑菌谱等角度分析菌株所产细菌素生物学特性。结果:分离得到1株产广谱细菌素菌株BL-1,发现该菌株所产细菌素具有较好的热稳定性和酸耐受性,在pH为2、121℃条件下细菌素活性仍然保持稳定,酶敏感性强,胃蛋白酶可将其完全分解,使用安全性较高,且抑菌谱较广,对受试的李斯特菌（Listeria monocytogenes）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）等革兰氏阳性菌和大肠杆菌阴性菌均表现出较强抑菌活性。最后该菌株经分类学鉴定为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）。结论:从母乳婴儿粪便中分离出一株产广谱细菌素鼠李糖乳杆菌BL-1,该菌所产细菌素具有优良的食品加工特性,有作为天然食品防腐剂的巨大应用前景。      

一株产广谱细菌素乳酸菌菌株的分离鉴定及其细菌素特性研究

目的:从母乳婴儿粪便筛选获得产广谱细菌素的乳酸菌菌株,并对其所产细菌素的理化及生物学特性进行研究分析,预测其在食品工业中的应用前景。方法:以课题组从母乳婴儿粪便分离得到的23株乳酸菌为试材,采用牛津杯琼脂扩散法,选取单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和大肠杆菌(Escherichia coli)为指示菌筛选产广谱细菌素的优良菌株。通过菌体形态观察、生理生化特征及16S r DNA序列分析对菌株进行分类学鉴定,并从耐酸、耐热、蛋白酶敏感性、抑菌谱等角度分析菌株所产细菌素生物学特性。结果:分离得到1株产广谱细菌素菌株BL-1,发现该菌株所产细菌素具有较好的热稳定性和酸耐受性,在pH为2、121℃条件下细菌素活性仍然保持稳定,酶敏感性强,胃蛋白酶可将其完全分解,使用安全性较高,且抑菌谱较广,对受试的李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aereu)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌阴性菌均表现出较强抑菌活性。最后该菌株经分类学鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。结论:从母乳婴儿粪便中分离出一株产广谱细菌素鼠李糖乳杆菌BL-1,该菌所产细菌素具有优良的食品加工特性,有作为天然食品防腐剂的巨大应用前景。     

产细菌素弯曲乳杆菌的分离鉴定及细菌素特性初步研究

从西班牙传统色拉米香肠中分离到一株产细菌素菌株RX-6,其发酵液在排除有机酸、过氧化氢及菌体细胞干扰后,抑菌活性基本无变化;经硫酸铵盐析及透析处理后,抑菌活性明显增强;蛋白酶K处理后,抑菌活性消失,表明起抑菌作用的是蛋白类物质.通过菌体形态观察、生理生化特征实验、16S rRNA序列比对及系统发育分析,鉴定菌株RX-6为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus).抑菌特性研究结果显示该菌株所产细菌素具有很好的热稳定性和酸碱耐受性,在121℃20min的高温处理后仍能保持一定活性,活性pH范围为3～10;使用安全性高,胃蛋白酶和胰蛋白酶可将其完全分解,而酸性蛋白酶可将其部分分解;抑菌谱较广,对受试的7株李斯特菌(Listeria spp.)、3株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aereu)、1株大肠杆菌(Escherichia coli及1株假单胞菌(Pseudomonas spp.)等都有明显抑制作用,显示出作为天然食品生物防腐剂的巨大应用潜力.     

一株从泡菜中分离的产细菌素乳杆菌的鉴定及细菌素特性研究

从泡菜中分离的329 株乳酸菌中,筛选出一株产细菌素的乳酸菌,编号为SD-22。经生理生化实验鉴定为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。在排除过氧化氢干扰和有机酸抑菌作用后,brevicin SD-22 对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌具有较好的抑制作用,对部分真菌也有抑制作用,但对酵母菌和青霉无抑制作用,具有良好的热稳定性和pH 值稳定性,经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K 处理后抑菌活性完全消失,对α- 淀粉酶不敏感。因此初步认为该菌株是一株产广谱细菌素的乳酸菌。     

乳酸菌SD-22产类细菌素的生物学特性及初步应用研究

对筛选出的菌株SD-22所产类细菌素的生物学特性及其在猪肉保鲜中的初步应用进行了研究.结果表明,粗类细菌素Lactobacillus SD-22具有良好的热稳定性:在酸性条件下稳定且活性高;对胰蛋白酶,胃蛋白酶,蛋白酶K不敏感;具有较广的抑菌谱及较强的防腐保鲜的能力.     

产细菌素弯曲乳杆菌的分离鉴定及细菌素特性初步研究

从西班牙传统色拉米香肠中分离到一株产细菌素菌株RX-6,其发酵液在排除有机酸、过氧化氢及菌体细胞干扰后,抑菌活性基本无变化;经硫酸铵盐析及透析处理后,抑菌活性明显增强;蛋白酶K处理后,抑菌活性消失,表明起抑菌作用的是蛋白类物质。通过菌体形态观察、生理生化特征实验、16SrRNA序列比对及系统发育分析,鉴定菌株RX-6为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。抑菌特性研究结果显示该菌株所产细菌素具有很好的热稳定性和酸碱耐受性,在121℃20min的高温处理后仍能保持一定活性,活性pH范围为3¹0;使用安全性高,胃蛋白酶和胰蛋白酶可将其完全分解,而酸性蛋白酶可将其部分分解;抑菌谱较广,对受试的7株李斯特菌（Listeria spp.）、3株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）、1株大肠杆菌（Escherichia coli）及1株假单胞菌（Pseudomonas spp.）等都有明显抑制作用,显示出作为天然食品生物防腐剂的巨大应用潜力。      

酸菜中具有抑菌活性乳酸菌的分离鉴定及其产细菌素特性

目前已有研究陆续从不同的乳酸菌中分离到细菌素,但是这些细菌素存在着抑菌谱窄的问题,寻找广谱抗菌性能的新一代细菌素具有重要的理论价值和应用前景。以市售保质期较长的8种不同品牌的酸菜为材料,将青霉菌作为指示菌,通过抑菌实验筛选出一株能产生抑菌物质的菌株L3,经过生理生化鉴定、16S rDNA测序分析确定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),故命名为植物乳杆菌L₃,NCBI序列号为MT781360。该菌株在MRS培养基中于37℃培养18～24 h时产细菌素L3的抑菌活性最强。将该培养上清液采用乙酸乙酯萃取,葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50过滤分离纯化,再经Trinice-SDS-PAGE电泳结果显示,细菌素L3的分子质量约为4～5 kDa。细菌素L3对蛋白酶敏感,但其活性不受过氧化氢酶的影响,初步结果显示细菌素L3为蛋白质类物质。细菌素L3在60～100℃处理20 min或121℃处理15 min仍具有较高的抑菌活性,pH值2～10范围内有良好的稳定性;对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及部分真菌具有抑菌活性。植物乳杆菌L_3<...     

类细菌素产生菌LC47的选育及其代谢产物的初步研究

采用纸片法初筛和杯碟法复筛自黄水中分离出一株类细菌素产生菌LC47，经鉴定为布氏乳杆菌（Lactobacillus buctmeri）。在排除酸性末端产物及过氧化氢的干扰后，LC47菌株发酵液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）等革兰氏阳性菌、大肠杆菌（Eschenchia coli）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas pyocyanea）等革兰氏阴性菌、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和某些真菌有强烈的抑制作用。经紫外线照射（UV）和硫酸二乙酯（DES）多轮复合诱变，LC47发酵液相对效价较未诱变前提高了216％，且具有良好的传代稳定性。通过对该菌株产类细菌素发酵条件的研究发现，以2％麦芽糖为碳源、1％大豆蛋白胨＋0．5％酵母粉为氮源，培养温度37℃，起始pH6．0～6．5，接种量1％，厌氧条件下培养48h，有微量0、Mg2^＋NH4^＋和Mn^2＋等金属离子存在，LC47所产类细菌素的抑菌活性最高。     

产类细菌素乳酸菌的筛选及其生物学特性研究

采用平板稀释和CO2厌氧培养技术,从多种发酵食品中分离出158株乳酸菌。通过牛津杯双层平板扩散试验,筛选出1株有明显抑菌活性的乳酸菌R-6,经初步鉴定为乳酸乳杆菌(Lactobacillus sp.)。R-6发酵上清液用NaOH调节pH5.5,对指示菌Escherichi coli.仍有明显抑菌活性,过氧化氢酶作用后其抑菌效果基本不变,因此可以排除乳酸和过氧化氢的干扰;R-6培养液经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性明显降低,且超过100℃热处理其抑菌活性迅速丧失,证实所产抑菌物质确系多肽类细菌素。该细菌素在酸性条件下活性较强,对革兰氏阴性菌(E.coli)抑菌作用较强,对革兰氏阳性菌(Bacillus subtilis和Staphlococcus aureus)也有明显抑制,显示出一定的抗菌广谱性。     

产类细菌素乳酸菌的筛选及其生物学特性研究

采用平板稀释和CO2厌氧培养技术,从多种发酵食品中分离出158株乳酸菌.通过牛津杯双层平板扩散试验,筛选出1株有明显抑菌活性的乳酸菌R-6,经初步鉴定为乳酸乳杆菌(Lactobacillus sp.).R-6发酵上清液用NaoH调节pH5.5,对指示菌Escherichi coil.仍有明显抑菌活性,过氧化氢酶作用后其抑菌效果基本不变,因此可以排除乳酸和过氧化氢的干扰;R-6培养液经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性明显降低,且超过100℃热处理其抑菌活性迅速丧失,证实所产抑菌物质确系多肽类细菌素.该细菌素在酸性条件下活性较强,对革兰氏阴性菌(E.coil)抑菌作用较强,对革兰氏阳性菌(Bacillus subfilis 和 Staphlococcus aureus)也有明显抑制,显示出一定的抗菌广谱性.     

植物乳酸菌类细菌素特性研究及其产生条件的优化

通过单因素实验和正交实验优化了乳酸菌产乳酸菌素的培养条件并分析了其特性。结果表明：植物性乳酸杆菌生长的最佳培养条件组合是温度30℃,培养基初始pH为6.0,接种量4%,种龄12h,厌氧条件下,培养时间40h;乳酸菌菌素对革兰氏阴性菌和酵母菌的抑菌作用最大的最佳培养条件组合是温度28℃,培养基初始pH为7.0,接种量2%,种龄10h,厌氧条件下,培养时间24h。乳酸菌菌素革兰氏阳性菌的抑菌作用最大的最佳培养条件组合是温度28℃,培养基初始pH为6.5,接种量1%,种龄6h,厌氧条件下,培养时间40h。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,该乳酸菌发酵液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌等革兰氏阴性菌具有较好的抑制作用,而且对部分真菌也有抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后发酵液抑菌活性略有下降,表明乳酸菌素为非蛋白成分或起抑菌作用的非单一物质。它具有很好的热稳定性,在酸性条件下稳定且活性高,对蛋白酶敏感性低,且具有较广的抑菌谱。     

Sakacin M, a bacteriocin-like substance from Lactobacillus sake 148.

The antagonistic activity of Lactobacillus sake 148 was evaluated during its growth on complex broth media and in a semisynthetic defined medium (SDM) with various supplements. The antagonistic activity was a growth-associated property, being detected and quantified when L. sake 148 was grown at either 4, 8, 16, 25 or 32 degrees C. The concentrated culture supernatant of L. sake 148 was subjected to purification by lyophilization and gel filtration. The purification procedure resulted in a small increase in its specific activity (7-fold) and in a low recovery of the original inhibitory activity (8%). Gel filtration analysis of the partially purified activity on Sephadex G-50 revealed an apparent molecular weight of 4640. The partially purified antagonistic activity of L. sake 148 was destroyed by treatment with proteolytic enzymes. However, the antagonistic activity was resistant to heat, having D-values at 121, 135 and 150 degrees C of 23.8, 17.4 and 15.2 min, respectively.     

Effects of a bacteriocin-like substance produced by Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris on spoilage strain Lactobacillus fructivorans and various pathogens

Certain lactic acid bacteria present in the natural flora of the wine fermentation medium perform the malolactic fermentation process and other biochemical activities which lead to the formation of the outstanding aroma and bouquet of wine. However, because of the spoilage phenomena caused also by certain lactic cultures, off‐odours formed via metabolic side reactions cause severe economic losses in the wine industry. Several control mechanisms were introduced in order to eliminate these spoilage cultures, but none of these has been implemented as an efficient and healthy process. A partially purified bacteriocin‐like inhibitory substance (BLIS) with a molecular weight of 32 000 Da, obtained from a Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris isolate belonging to the native flora of wines of the Cappadocia region, was studied for its inhibitory activity on the spoilage strain, Lactobacillus fructivorans, isolated from the same wine flora and several other pathogens, and was found to be efficient in eliminating both the spoilage strain and the pathogens.     

Phospholipid nanovesicles containing a bacteriocin-like substance for control of Listeria monocytogenes

Bacillus licheniformis strain P40 produces a bacteriocin-like substance (BLS) that has potential to be used as a natural biopreservative for control of pathogenic and food microorganisms. The objective of this study was the encapsulation of BLS in phosphatidylcholine vesicles, evaluating its antimicrobial activity against Listeria monocytogenes. The size of the nanovesicles with the BLS was around 570 nm and of the nanovesicles without BLS was of approximately 484.8 nm, as determined by light scattering with a He–Ne laser (λ = 632.8 nm) as light source. The encapsulated BLS showed inhibitory activity against L. monocytogenes as observed by agar diffusion assay. Complete inhibition of L. monocytogenes growth was observed with the addition of 100 and 50 AU mL^− 1 of encapsulated and free BLS, respectively. A reduction in the number of viable cells to zero was observed after 10 min incubation with 400 AU mL^− 1 of either encapsulated or free BLS. The encapsulated BLS was stable for up to 30 days at 4 °C. These results indicate that nanovesicles containing BLS may have potential for use as food preservative.Industrial relevanceThe increased concern on minimally processed food and natural additives has been stimulated many studies on the utilization of antimicrobial peptides as biopreservatives. The incorporation of bacteriocins into nanovesicles may represents an interesting alternative for controlled release and increased stability of bacteriocins.     

抑制牛乳房炎嗜酸乳杆菌的筛选和抑菌物质的研究

牛乳房炎是造成重大经济损失的疾病之一,通过6株嗜酸乳杆菌对4株导致牛乳房炎的致病菌进行细菌素、H₂O₂等各种因素的抑菌实验,阐述了各个乳酸菌的抑菌能力以及影响其抑菌能力的主要抑菌物质,结果发现:6株乳酸菌普遍对金黄色葡萄球菌抑菌效果显著,其中嗜酸乳杆菌NCFM（H7）上清液对4株致病菌抑菌效果最好,KLDSAD3（H6）细菌素对无乳链球菌抑制效果最好,KLDSL6（H3）细菌素对乳房链球菌、大肠杆菌抑菌能力最强,且其H₂O₂对乳房链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性较强,KLDSAD2（H5）细菌素对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其中L6（H3）抑菌活性物质耐热能力较强,AD2（H5）抑菌活性物质热敏性很强,而且这些抑菌活性物质只有在酸性条件下才具有更强的抑菌活力。      

乳杆菌源抗菌肽的代谢条件优化及其特性研究

探讨乳杆菌代谢产抗菌肽的条件及其生物学特性。通过琼脂扩散法分析嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和发酵乳杆菌抑菌活性差异,采用正交实验分析获得干酪乳杆菌代谢产抗菌肽的最佳条件为:装液量20%、接种量2%、培养温度30℃,静置培养42h。研究发现该抑菌物质热稳定性好,在低p H条件下能够保持较好的抑菌活性,可被胰蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解而不被胃蛋白酶酶解。进一步的研究发现,该抑菌物质的作用方式为杀菌,且抑菌谱广,可抑制或杀灭多种革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌,对多种食源性病原菌有较强的抗性,其可开发为食品防腐剂和用于畜禽养殖的饲料添加剂。