实时荧光PCR芯片及其检测平台的设计

研制了一款实时荧光PCR芯片及其检测平台.其中PCR芯片实现样品的预处理及实时荧光反应等功能;检测平台实现实时荧光检测、分析及处理等功能.该检测平台由注射泵系统、实时荧光信号采集系统和PCR温度控制系统等组成.并成功地实现了从血液中提取白细胞及同一腔体中PCR反应、检测以及分析等.实验结果表明,该系统能满足实时荧光PCR芯片的控制与检测实验结果,达到了设计各项指标.     

荧光定量PCR技术及其检测乳腺肿瘤同源异型盒基因的应用

荧光定量PCR技术是以荧光传递为基础多色荧光检测的核酸定量技术。能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等,该技术在PCR反应体系中引入荧光标记探针,具有高灵敏性,高特异性等特点并极大地克服原有PCR技术存在的不足如交叉污染等问题。本文概述目前几种荧光定量PCR技术的原理和特点以及我们应用该技术检测乳腺肿瘤同源异型盒基因BP1的工作。     

基于微流控荧光定量PCR的MRSA快速检测技术研究

针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测的问题,发展一种基于微流控荧光定量PCR的致病菌快速检测新技术。采用光刻法制作了微流控PCR芯片,研制了集成高性能温度控制模块和高灵敏度荧光检测模块的微流控荧光定量PCR分析系统。通过检测特异性基因femA和mecA对MRSA进行快速鉴别。实验结果表明,使用微流控PCR芯片可以成功实现MRSA特异性基因的快速检测,相对传统的管式PCR,芯片使用6μL试剂在56 min完成了MRSA特异基因的检测,不仅节约了反应试剂,而且极大提高了检测速度。该技术可扩展到其他致病菌的检测,具有良好的应用前景。     

光纤型定量PCR仪荧光检测光学系统性能研究

实践表明,光纤型定量PCR仪可以比共聚焦型定量PCR仪具有更高的荧光信号检测精度。然而,光纤型定量PCR荧光检测系统容易受到光源、透镜入瞳直径、光纤数值孔径NA和光纤损耗等诸多因素影响导致光源到光纤耦合效率下降从而影响系统的检测精度。针对光纤型定量PCR仪荧光检测光学系统,对其耦合效率进行Zemax仿真研究,根据仿真结果可以实现光纤型荧光检测光学系统的优化设计。     

实时荧光定量PCR技术在临床肿瘤检测中的应用

肿瘤一直以来就是人类难以攻克的顽疾,近年来肿瘤疾病的爆发数量呈现上升趋势,如今我国肿瘤病例数约占全世界病例数的55%。实时荧光定量PCR技术(Real-Time PCR)是一种通过检测PCR产物中荧光讯号的强度从而进行定量的技术,这实现了对核酸信息量的分析比较。相对于常规的定性PCR技术,其具有检测范围宽、检测灵敏度高、精密度高、特性强、定量准确、重现性好等优点,现今已被广泛应用于生物学领域及医学领域尤其是肿瘤的早期诊断、分型、分期、预后诊断等。本文概述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及其在肿瘤检测中的应用,并探讨了该技术的发展现状和应用前景。     

业界资讯

泰普生物制药产业化基地落户晋江由北京大学医学部、香港泰普国际生物科学有限公司以及美国迈新生物技术股份有限公司合作开发,总投资600万美元,主要研发生产和销售快速检测疾病的“荧光PCR”、“荧光多重PCR”,以及原位杂交体外检测试剂盒的泰普生物制药成果产业化基地项目,日前正式落户晋江科技工业园区。该项目主要研发生产和销售快速检测疾病的“荧光PCR”、“荧光多重PCR”和原位杂交体外检测试剂盒,产品技术具有国际领先水平。投产后,年产PCR荧光多重试剂盒和原位杂交试剂盒10万个。计划用3年时间实现年产值达1.2亿元,工业增加…     

微流控实时荧光聚合酶链式反应成像非均匀性的校正

综合参考标样法和定标校正法的思想,提出了一种用于校正微流控实时荧光聚合酶链式反应(PCR)系统荧光成像非均匀性的”多目标像素区域定标线性校正”算法,以提高其检测结果的准确性.以与PCR荧光标记物SYBR Green光谱特性相似的荧光素钠溶液为样本,检测了11种不同浓度的均匀荧光素钠溶液受激发射荧光信号的强度,分析了各个目标像素区域荧光强度和荧光素钠溶液浓度之间的线性响应关系,采用两点定标校正方法计算了CCD各个目标像素区域的校正系数矩阵.实验表明,3种浓度荧光素钠溶液的成像均匀度分别从校正前的71.28％、72.01％、70.73％提高到校正后的77.49％、80.07％、90.64％;微流控四腔芯片中相同浓度的DNA样品在PCR扩增阶段的Ct值相对标准偏差由校正前的4.38％、1.94％、3.31％减小到校正后的2.44％、0.79％、1.31％,显著提高了微流控实时荧光PCR检测结果的准确性.     

基于微流控芯片的数字PCR荧光图像分析方法

基于微流控芯片的数字PCR技术是当前痕量核酸分子绝对定量检测的先导技术,可通过荧光图像处理办法实现对目标分子高精度计量。本文基于本实验室大量数字PCR检测获取的荧光图像,开发了具备图像倾斜校正、图像二值化、芯片微反应腔室自动定位、图像快速拼接、图像分割、亮点计数等功能的荧光图像分析系统。该系统不仅实现了核酸分子的精确计数,且实现了较为友好的人机交互     

实时荧光定量PCR技术在动物遗传育种中的应用

聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction简称PCR)是一项体外基因快速扩增技术.该技术的建立,使定性检测的技术得到改善,达到检测单个靶细胞的水平,以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域.但其易污染、假阳性及定量不准确等问题也日益突出.而荧光定量PCR技术(FQ-PCR)的出现解决了以上难题,实现了从定性到定量的飞跃.此方法特异性强和可靠性更强,能实现多重反应,且采用完全闭管检测,不需要PCR后处理,有效解决PCR污染问题以及EB对试验人员的伤害;再配以相应的荧光PCR仪,使整个PCR过程实现自动化,具有耗时短,操作方便等特点,因而广泛运用于各个领域.     

浅析食品快速检测技术在宾馆食品安全中的应用

对食品安全监测中实时荧光定量PCR技术与传统检测技术的区别和效用给以浅析,进而探讨PCR技术在宾馆食品安全关键控制点监测和公共卫生突发事件应急处理等方面的实际应用的可行性、必要性和发展前景。     

一种核酸扩增基因芯片杂交检测仪

为了提高基因芯片技术的推广应用,研制了一种集PCR扩增、杂交、清洗和检测分析于一体的新型仪器;可以实现快速PCR,30个扩增循环可以在15min内完成.杂交及冲洗在计算机控制下自动完成,避免了人工干预以及环境变化所造成的误差.检测部分采用汞弧灯作为激发光源,CCD采集荧光信号,配合信号识别分析软件自动识别基因芯片信息.     

实时荧光定量PCR技术在水稻氮素基因表达中的应用之我见

实时荧光定量PCR技术实现了对低拷贝基因表达量的快速、准确定量,展望了荧光定量PCR技术在水稻氮素相关基因表达中的应用前景。     

SARS病毒的微流控芯片实验室系统检测

采用自行设计的RT-PCR试剂盒。在自制的由聚合酶链反应(PCR)——毛管电泳(CE)芯片、芯片热循环仪和激光诱导荧光芯片分析仪组成的微流控芯片系统上，对SARS病毒(重症急性呼吸综合症)和18例SARS患者咽拭子样品连行了分析和检测，实现了聚合酶链反应和电泳检测的微流控芯片在线分析。微流控芯片系统具有高检潮灵敏度、高分辨率、高检出率等优点，试剂消耗少和检测时间短，可能成为SARS早期检测的一种新的手段。     

实时数字PCR扩增曲线的分类

传统的数字PCR检测仅针对扩增终点的核酸样本执行终点式的荧光分析,依据反应后的荧光图像进行阴阳性统计及样本浓度计算,分析结果极易受假阳性及非特异性扩增影响。本文提出了一种基于过程的实时微孔式数字PCR芯片阴阳性分析方法,从时间维度对数字PCR结果进行定量分析,提高数字PCR检测的准确性。设计支持实时数字PCR分析的硬件系统并与终点式数字PCR仪进行对比,验证系统性能。在此系统上检测不同浓度的人类Ⅳ型疱疹病毒样本,获取实时扩增曲线,采用支持向量机算法对扩增曲线的特征进行学习并应用于检测曲线分类。实验结果表明,所设计的实时数字PCR系统与终点式数字PCR仪扩增结果具有高度一致性。本文所述的基于支持向量机的分类算法对扩增曲线的分类准确率达到98%以上,能准确识别假阳性及非特异性扩增微孔。相比于传统阈值分割法,本方法对阳性点识别的平均准确率提高了17.60%,并且目标模板拷贝数越低,效果越明显。与传统的终点式数字PCR相比,本文提出的基于实时数字PCR系统的数据分析方法具有准确性更高的优势,尤其在低拷贝数检测下可以获取更为精确的定量结果。     

便携式实时荧光定量PCR仪数据处理方法研究

实时荧光定量PCR越来越多被用来定量核酸的表达水平,随着经济与社会的发展进步,个人的自我保护意识和自身健康都重视了起来,使得人们对健康有了更高的要求,适应于现场核酸分析技术的需求日渐显著,不同的仪器有不同稳健的、合适的测量分析方法。本研究针对一种基于转盘式荧光检测的便携式实时荧光定量PCR仪的数据进行处理分析,通过对比优化不同峰值拟合算法及扩增曲线拟合算法优化提升了光学系统检测性能。结果表明,针对该系统峰值拟合算法采用正弦拟合对原始数据进行处理有较好的效果,扩增曲线拟合算法采用4参数logistic拟合,标准品浓度梯度样本扩增结果线性拟合优度R²>0.990,变异系数CV值小于5%,使得光学系统检测性能有所提升,为该类检测模型仪器的数据处理方法提供了一定参考。     

微滴式数字PCR中低浓度荧光微滴分类

数字PCR检测过程中,确定微滴是否为阳性直接影响最终浓度,也是影响仪器准确度的重要因素之一。目前的自动分类方法并未考虑到数字PCR技术中浓度对结果误差的影响,导致在低浓度下自动设置的方法与实际结果偏差较大。本文设计了一种基于广义帕累托分布的荧光微滴分类方法,讨论了不同浓度下误分类对结果可能的影响,据此确定了分布模型参数,并在自行研制的微滴式数字PCR仪上进行验证。实验结果显示:经本文方法分类后,样品中目标拷贝数在5~5 000的范围内线性回归的r_2=0.995 6,这意味着广义帕累托分布较好地拟合了微滴荧光强度边界分布,本文提出的荧光微滴自动分类方法在低浓度下取得了较好的效果。     

浅析荧光磁粉探伤在石油钻具螺纹检测中的应用

由于在井下工作时，钻井运动的形式状态相对复杂，且在长期的扭力、拉力作用下，造成石油钻具螺纹出现问题，严重时会引起断裂事故。因此，本文结合实际思考，首先简要分析了石油钻具螺纹检测的主要内容，同时叙述了荧光磁粉在石油钻具螺纹检测中的操作步骤及检验方式，其次阐述了石油钻具出现疲劳裂纹的原因以及特点，提出了石油钻具螺纹荧光磁粉检测的必要性，最后，对荧光磁粉探伤在石油钻具螺纹检测中的应用措施进行阐述。     

浅析荧光磁粉探伤在石油钻具螺纹检测中的应用

当前我国的石油勘探工作开展得较为顺利，石油钻具作为石油勘探中的重要技术工具，对其进行螺纹检测十分必要。本文首先将石油钻具的螺纹检测必要性作了简要阐述；其次，将荧光磁粉探伤在石油钻具螺纹检测中的应用做了具体说明，通过检测流程、检测关键、应用意义三大方面做了分析；最后，希望本文的分析能够帮助石油钻具的螺纹检测更好地使用荧光磁粉探伤这种技术。     

用于荧光检测的现场聚焦电泳浓缩装置

应用聚焦电泳原理，设计了一种用于荧光检测的现场浓缩装置。本装置是一种改进型的比色池，可作为荧光计的标准配件。以检测溴酚蓝、荧光素钠为例，装置的浓缩效率达67％，使荧光强度增强32．5倍。     

无损检测技术在发动机再制造中的研究与应用

根据发动机再制造特点，制定了发动机再制造工艺流程，提出了再制造零部件的检测需求，阐述了无损检测技术在发动机再制造中的作用，针对磁粉检测、荧光检测、超声检测以及气压检查等无损检测技术，在某型号发动机关键件再制造中得到了应用，取得了显著效果。