纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶有很强的溶血栓能力,跟传统的一些溶栓剂相比,具有安全性好、成本低、口服有效等优点,极有可能开发为新一代的溶栓剂。本文介绍了纳豆激酶的分离纯化技术、生化特性;并对纳亚激酶的活性测定方法、影响纳豆激酶稳定性的因素及提高纳豆激酶酶产量的几种途径等最新研究成果进行了综述。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶有很强的溶血栓能力，跟传统的一些溶栓剂相比，具有安全性好，成本低，口服有效等优点，极有可能开发为新一代的溶栓剂。本文介绍了纳豆激酶的分离纯化技术，生化特性；并对纳豆激酶的活性测定方法，影响纳豆激酶稳定性的因素及提高纳豆激酶酶产量的几种途径等最新研究成果进行了综述。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶有很强的溶血栓能力，跟传统的一些溶栓剂相比，具有安全性好、成本低、口服有效等优点，极有可能开发为新一代的溶栓剂。本文介绍了纳豆激酶的分离纯化技术、生化特性；并对纳豆激酶的活性测定方法、影响纳豆激酶稳定性的因素及提高纳豆激酶酶产量的几种途径等最新研究成果进行了综述。     

纳豆激酶溶栓活性的测定方法

简介人体纤维蛋白溶解系统的生理学背景,对以此为依据建立的纳豆激酶溶栓活性测定方法进行了概括总结。     

纳豆激酶稳定性的研究

纳豆激酶是一种新型溶栓酶 ,具有溶栓效率高、药效时间长以及无毒副作用等优点。实验研究了pH、温度、金属离子以及某些有机物质对该酶稳定性的影响。实验表明 ,该酶在 4 5℃以下和 pH 7～ 9范围内酶活相对稳定 ;Mg2 +和Co2 +离子对酶活有激活作用 ,而Cu2 +、Zn2 +和Al3+等离子对该酶有明显的抑制作用 ;牛血清蛋白、蛋白胨、明胶、甘油、丙二醇和海藻酸钠等能显著提高酶的耐热性 ,其中以明胶的作用最为明显。这些发现对液体酶的生产有重要指导作用     

纳豆激酶的稳定性研究

初步研究了纳豆激酶对温度、pH值、金属离子的稳定性,研究发现,在37℃以下,温度对纳豆激酶活性的影响不大;在pH值为5￣11之间,酶活性是相对稳定的;Na 、K 、Ca2 对纳豆激酶的活性具有明显的激活作用,Zn2 、Cu2 、Ba2 对酶活性具有一定的抑制作用;Fe2 对纳豆缴活性具有强烈的抑制作用。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌 (Bacillusnatto)分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶。文章中对纳豆菌产生的纳豆激酶的分离纯化、基因结构、蛋白质结构、生物学功能及其在医疗上的溶纤特性进行了综述     

纳豆激酶纤溶活性研究

通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆芽孢杆菌产生的具有强溶纤作用的碱性丝氨酸蛋白酶,具有安全性好、半衰期长、口服有效等优点。本文就纳豆激酶的基因结构、生化特性、生物学功能及酶活性测定等方面进行了综述。     

纳豆激酶在腐乳储藏条件下稳定性初探

利用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性,探究其活性影响因素及腐乳汤料环境对纳豆激酶的影响,为开发纳豆激酶强化腐乳做准备。结果表明:纳豆激酶在4~30℃性质稳定,30~40℃短时间内活性增高;pH 7.0~9.0为活性最高范围;质量分数8.0%~12.0%的氯化钠及体积分数10%~20%的乙醇均抑制纳豆激酶活性,处理后活性保留率分别为45%~55%和65%~70%;添加0.01 mol/L的Ca2+能提高其28%活性,Fe3+,Al 3+,Fe2+对纳豆激酶具有强烈抑制作用;山梨醇、海藻酸钠等物质对纳豆激酶影响不大;腐乳香辛料有利于纳豆激酶活性的稳定;腐乳条件下保存70天,纳豆激酶发酵液与汤料以2∶1比例混合,最有利于其活性稳定,活性保持90%以上。     

胃蛋白酶对纳豆激酶的化学修饰研究

纳豆激酶(Nattokinase,NK),具有很强的溶血栓作用,它是一种在纳豆发酵中由纳豆杆菌(Bacil-lusnatto)或纳豆枯草杆菌(Bacillussubtilisnato)产生的丝氨酸蛋白酶。用胃蛋白酶作为修饰剂,对纳豆激酶进行水解切割,可使纳豆激酶暴露更多的底物结合部位,从而使得酶活性增加。实验得到了最佳修饰条件:修饰pH为6.5、修饰温度为39℃、修饰作用时间为8h。通过修饰,NK的活性可提高6倍,其热稳定性和耐酸性也得到改善     

紫外分光光度法测定纳豆激酶体外纤溶活力

建立短时间、定量测定纳豆激酶体外纤溶活力的方法。在体外反应体系中制备血纤维蛋白底物,向体系中加入待测样品(纳豆激酶),进行纤溶反应。用紫外分光光度计测定纳豆激酶水解纤维蛋白后生成的可溶性产物的吸光值。由此对纳豆激酶体外纤溶活性进行定量测定并进行方法可行性分析。该方法具有较好的灵敏度、精密度和准确度,用时短,该方法适用于纳豆激酶体外纤溶活性的定量分析。     

纳豆激酶基因的克隆表达以及活性分析

应用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因（pro-NK）,并构建了纳豆激酶的重组表达载体pET-28a-pro-NK;转化E.coliBL21（DE3）后,在IPTG的诱导下实现了纳豆激酶的高效表达,经SDS-PAGE显示在28ku处有一特异带;表达产物经Ni2+亲和层析纯化后,纤维平板法测得的纳豆激酶的比活力为34245.1IU/mg;纯蛋白经透析和冷冻干燥处理后,纳豆激酶的比活力为16271.5IU/mg;在此基础上,对冻干保护剂的添加进行优化,最佳保护效果为甘露醇与纳豆激酶质量比为1:2,可比不加保护剂时比活力提高了30.9%。这可为基因工程方法生产纳豆激酶纯品,稳定其活性便于贮运,并将其开发成为临床药物提供技术参考。      

纳豆激酶对角叉菜胶所致小鼠血栓模型的影响

目的:观察纳豆激酶对角叉菜胶所致的小鼠血栓模型的影响,为纳豆激酶相关产品的溶血栓功能性评价提供依据。方法:将雌性昆明种小鼠随机分为4组:空白组、模型对照组、低剂量组、高剂量组。连续灌胃30d,每天一次,于第30d,除空白组外,其他3组均用角叉菜胶制备尾部血栓模型,24h后观察并测量黑尾长度,之后摘眼球取血,测定血清纤维蛋白降解产物(FDP)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制剂1(PAI-1)的含量。结果:各组小鼠最后一次称重体重无显著性差异;低剂量组与高剂量组的出栓率低于模型对照组,但模型对照组、低剂量组、高剂量组三组间相比较,黑尾长度、黑尾/全尾长的无显著性差异(p>0.05);高剂量组小鼠血清中的FDP及t-PA的含量显著高于模型对照组和低剂量组(p<0.05);空白组未检出PAI-1,其余各组PAI-1的含量无显著性差异。结论:纳豆激酶对实验小鼠体内血栓具有溶解作用,可以降低血栓的发生率;角叉菜胶诱导的小鼠血栓模型可以用于纳豆激酶溶(抗)血栓功能评价。     

纳豆激酶液体发酵技术研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆菌产生的具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶,与传统的一些溶栓剂相比,其具有安全性好、成本低、经口服后可迅速入血,纤溶活性强,作用时间长等优点。有望被开发为新一代的口服抗血栓药物。现就纳豆激酶的结构、性质、功能以及开发现状和应用前景等方面进行了综述。     

不同菌种发酵对纳豆激酶活性及黏液成分影响

采用5株不同来源的纳豆菌JLTH-075、JLGZL-018、JLTH-157、JLCC-243、JLLY-214,通过纳豆发酵实验,研究不同菌株对纳豆激酶活力、黏液营养物质的影响,评价其发酵性能,为纳豆工业生产用菌筛选提供借鉴。结果表明,菌株JLGZL-018生产的纳豆激酶活性最高,为4 167 IU/g;其生产的纳豆黏液成分中总蛋白、可溶性总糖含量最高,分别为（17.38±0.54）%、（5.21±0.13）%;水解氨基酸总量适中,为（5.24±0.27） g/100 g,7种必需氨基酸含量最高,为（0.87±0.08） g/100 g;游离氨基酸各成分与其他4株菌无显著差别。菌株JLGZL-018综合发酵性能较好,具有开发应用潜力。     

纳豆激酶的制备及其改性研究进展

纳豆激酶(EC 3.4.21.62)是纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,在体外和体内均具有强烈的纤维蛋白溶解活性。提高纳豆激酶的产量及其稳定性和经口服后的生物利用度具有重要的研究意义,该文综述了野生菌、基因工程菌及动植物细胞发酵/培养制备纳豆激酶的方法,及其稳定性和生物利用度等性能改善方面的研究进展,并对纳豆激酶研究的发展前景进行了展望。     

纳豆激酶最新研究进展

纳豆激酶来源于日本的传统食品——纳豆,是一种具有强烈溶栓作用的蛋白激酶。对纳豆激酶的结构和生化特性进行了论述,并且通过介绍纳豆激酶基因工程和国内外纳豆激酶相关产品的开发状况,证明纳豆激酶具有广阔的市场应用前景。     

纳豆激酶高活性菌株BN-05鉴定及发酵工艺优化

对分离的纳豆激酶高活性菌株BN-05进行了初步鉴定,并对其固态发酵产纳豆激酶的工艺条件进行了优化,旨在提高纳豆激酶的含量。通过形态和分子生物学鉴定BN-05为枯草芽孢杆菌属菌株,优化后发酵工艺参数:大豆破碎度为2,发酵温度为36℃,接种量为5.5%,葡萄糖添加量为2.5%。在优化条件下,BN-05通过固态发酵纳豆激酶活力达到(4 715.26±103.23)IU/g湿黄豆,比之前优化提高137%。