香叶醇对柑橘酸腐病菌的抑菌机制

为研究香叶醇对柑橘酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）的抑菌机制,用不同质量浓度的香叶醇处理柑橘酸腐病菌,通过生理生化分析及微观结构观察研究其对酸腐病菌孢子和菌丝体的影响。结果表明,香叶醇对柑橘酸腐病菌的最小抑菌质量浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌质量浓度（minimal fungicidal concentration,MFC）均为0.500 g/L;MIC香叶醇处理酸腐病菌12 h后其孢子萌发率仅为（3.28±1.28）%,显著低于对照组的（92.17±1.88）%(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现,香叶醇处理破坏了酸腐病菌细胞的完整性,细胞壁与细胞膜发生质壁分离,细胞器无法分辨,呈现空泡化。细胞通透性发生改变,碱性磷酸酶和核酸发生外泄,相对电导率升高,膜脂质过氧化反应增强,活性氧积累。综上所述,香叶醇通过抑制柑橘酸腐病菌孢子萌发和菌丝生长、破坏细胞结构、促进脂质过氧化和活性氧积累从而影响其正常生理功能,本实验可为有效防治柑橘酸腐病提供新思路。     

ε-聚赖氨酸对柑橘酸腐菌的抑菌活性及作用机制

聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)是一种高安全性、可生物降解的天然食品防腐剂,对环境和人体健康无毒性。为探究ε-PL对柑橘酸腐菌(Geotrichum citri-aurantii)的抑菌活性,并分析其抑菌作用机制,本实验测定ε-PL处理对柑橘酸腐菌的菌丝体生长抑制率及孢子萌发抑制率,ε-PL作用下的胞外相对电导率、A_{260 nm}的变化,并采用激光共聚焦显微镜与扫描电子显微镜观察ε-PL处理对细胞膜完整性及菌丝体形态的影响。结果表明:ε-PL对柑橘酸腐菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为400 mg/L,对菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度分别为128.79 mg/L和214.77 mg/L;质量浓度为1 600、3 200、6 400 mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05);经1×MIC和2×MIC的ε-PL处理后的柑橘酸腐菌胞外相对电导率、A_{260 nm}和红色荧光强度显著上升(P<0.05),表明其细胞膜...     

柑橘酸腐病菌PacC的生物信息学分析及其响应pH值的表达模式

酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）可调节侵染位点的pH值增强其致病性,pH值信号转导途径关键转录因子PacC在真菌响应环境pH值变化中发挥重要功能,但PacC在酸腐病菌中的作用尚不清楚。从酸腐病菌基因组中注释到2个PacC候选基因,对其进行生物信息学分析,并研究不同pH值条件下的表达模式。结果表明,PacC1与PacC2属于C2H2蛋白家族成员,且与指状青霉（Penicillium digitatum）PacC的亲缘关系较近。PacC1与PacC2在染色体位置、蛋白质分子质量和等电点等方面存在差异。离体条件下,酸腐病菌具有广泛的pH值适应性,最适pH值为3.0。PacC1和PacC2的表达均受pH值调控,且两个基因的表达趋势具有一定相似性。活体条件下,pH>3.0的宫川蜜橘果实组织中,酸腐病发病部位pH值随着发病进程显著下降,而pH<3.0的尤力克柠檬果实组织中,发病部位pH值显著上升,同时PacC1与PacC2的相对表达量均呈上升趋势。综上可知,环境pH值对酸腐病菌的生长有一定影响,酸腐病菌也对环境pH值有一定调节能力。由于基因结构和理化性质的...     

p-茴香醛抑制柑橘酸腐病菌的作用机制

为探讨p-茴香醛对柑橘酸腐病菌的抑制作用和机制,本实验结合体外实验和活体实验测定了p-茴香醛对病原菌的抑制能力,以菌丝体细胞壁、细胞膜和菌丝形态为研究对象,分析了p-茴香醛对病原菌的抑菌机制。结果表明,p-茴香醛能显著抑制柑橘酸腐病菌菌丝体生长,其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度(minimum fungicidal concentration,MFC)均为4.48 g/L;果蜡中添加10 MFC p-茴香醛能有效降低柑橘果实酸腐病发病率,接种13 d后发病率仅为30%,显著低于对照的100%(P0.05)。进一步研究发现,p-茴香醛诱导胞外碱性磷酸酶活力上升,破坏酸腐病菌菌丝体细胞壁完整性,添加保护剂山梨醇也无法缓解其对病原菌的抑制;碘化丙啶染色实验表明p-茴香醛对病原菌细胞膜造成损伤;通过扫描电子显微镜观察到,p-茴香醛处理的酸腐病菌菌丝呈现褶皱、干瘪、不规则扭曲状。以上结果说明:p-茴香醛能有效抑制柑橘酸腐病菌的生长,并能有效延缓柑橘酸腐病的发病进程,其作用机制可能与p-茴香醛诱导病原菌菌丝体细胞壁和细胞膜损伤有关。     

保鲜剂对柑橘贮藏病菌的敏感性及贮藏保鲜效果

研究了4 种保鲜剂对柑橘采后主要病菌的毒性及对锦橙果实的贮藏保鲜效果。结果表明：250 g/L咪鲜胺乳油对青霉菌和绿霉病的毒性最大,半数有效质量浓度（median effective concentration,EC50）值分别为0.429 3 μg/mL和0.532 9 μg/mL,450 g/L噻菌灵悬浮剂对炭疽病的毒性最大,EC50值为14.238 3 μg/mL,经4 种保鲜剂处理的锦橙果实的可溶性固形物、总糖、有机酸和VC含量高于空白对照。根据保鲜效果来看：250 g/L咪鲜胺乳油效果最好,在30 d时保鲜效果在90%以上,45 d和60 d的保鲜效果在85%以上,其次为生物源保鲜剂1×1011活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂,30 d和45 d的保鲜效果在85%以上,60 d时上保鲜效果在80%以上,效果最差的为450 g/L噻菌灵悬浮剂,保鲜效果只能达到60%。根据实验筛选到的最佳的防腐保鲜药剂为250 g/L咪鲜胺乳油。     

戊唑醇对油菜菌核病菌作用机制的探讨

为探明戊唑醇对油菜菌核病的防治效果及作用机制,采用生物测定方法,研究戊唑醇的室内毒力、油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）的菌丝干重、菌丝蛋白质含量、菌核萌发、菌核致病力和菌丝体细胞膜电导率。结果表明：戊唑醇对油菜菌核病菌具有极强的抑菌作用,EC50和EC90值分别为1.3μg/mL和11.2μg/mL;用戊唑醇处理后,菌丝体干重差异显著,蛋白质含量、菌核萌发率和致病力均随处理浓度的提高而降低;戊唑醇对菌丝体电导率无影响,但对菌丝体的生长有抑制作用。表明戊唑醇通过抑制菌丝干重、菌核萌发率、蛋白质含量和致病力而控制病害发生。     

银杏叶提取物对柑橘青霉病菌的抑菌效果

研究银杏叶乙醇提取物(EGb)对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用.采用95%乙醇提取银杏叶,用针刺伤柑橘后以青霉病菌菌液和EGb处理柑橘进行药效试验,测试EGb对柑橘青霉病菌的抑菌效果.结果表明,EGb对储藏期柑橘青霉病菌具有较强的抑菌作用,且随着EGb浓度的增大抑菌作用增强,随着储藏时间的延长,EGb的抑菌作用降低.     

壳聚(寡)糖对柑橘酸腐、黑腐病菌的抑制作用及对采后病害的防治

通过体外实验测定不同浓度的壳聚糖和壳寡糖对酸腐和黑腐病菌孢子萌发、芽管长度和菌丝生长的抑制作用;采用刺伤接种方法评价壳聚糖和壳寡糖对柑橘果实两种病害的防治作用。离体实验结果表明,壳聚糖和壳寡糖浓度为10mg/mL时几乎完全抑制两种病原菌的菌丝生长;浓度为0.5mg/mL壳聚糖和壳寡糖能完全抑制柑橘酸腐病菌(Geotrichum candidum)孢子萌发和芽管伸长的效果,而2mg/mL的壳聚糖才能完全抑制柑橘黑腐病菌(Alternaria citri)孢子萌发和芽管伸长,但相同浓度的壳寡糖抑制A.citri的孢子萌发和芽管伸长效果较差。体内实验结果表明,其病害防治效果具有浓度依赖性,高浓度(1%)的壳聚糖和壳寡糖对果实病害的防治效果较低浓度的防治效果好。      

表达豌豆防御素基因的重组酵母对采后柑橘酸腐病的生物防治

抗菌肤(Antimicrobial peptides,APMs)是一类对细菌、真菌等微生物及某些昆虫和动植物细胞具有抑制作用的小分子多肽.将碗豆防御素基因Psd1插入甲醇酵母Pichia pastoris的分泌表达质粒pPIC9K中,并将含有目的基因的重组质粒电转化P.pastoris GS115 (his4),得到重组酵母GS 115/PSD菌株.试验结果表明,重组酵母菌株经扩大培养,诱导表达的菌体被破碎后,酵母悬浮液含量达到5×108细胞/mL时,可以很好地抑制采后柑橘的酸腐病.     

松针提取物对柑橘青霉病菌的抑制作用及活性成分分析

本试验研究了马尾松松针提取物对柑橘青霉病菌意大利青霉的抑制作用及其活性成分。采用孢子萌发的方法测定了马尾松不同溶剂提取物对意大利青霉抑制作用,结果表明马尾松松针提取物的抑菌活性因提取溶剂的极性而异,其强弱顺序依次是乙酸乙酯提取物乙醇提取物二氯甲烷提取物水提取物石油醚提取物;选取乙酸乙酯提取物进行气质联用分析,发现样品中主要包括α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、β-石竹烯、莰烯、β-荜澄茄油烯等20种化学成分。其中含量最多的α-蒎烯和β-蒎烯抑制柑橘青霉菌的活性最强,是马尾松松针抑制柑橘青霉病菌的主要活性成分;其次为月桂烯;莰烯、罗勒烯、3-蒈烯、β-石竹烯对柑橘青霉病菌的孢子抑制作用最弱。因此,α-蒎烯和β-蒎烯作为安全、高效的熏蒸型柑橘采后抑菌剂具有进一步研究与开发的意义。     

抗菌肽zp37抑制果汁中单核细胞增生李斯特菌的活性及其作用机制

单核细胞增生李斯特菌（简称单增李斯特菌）作为一种常见的食源性致病菌,是影响果汁食用安全性的主要威胁因子。本实验设计并获得一种抗菌肽zp37,通过测定抗菌肽zp37最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,分析抗菌肽zp37处理后单增李斯特菌的生长曲线、膜电位、膜完整性、细胞微观结构、细胞聚集率、DNA结合情况以及胞内活性氧等,研究抗菌肽zp37抑制果汁中单增李斯特菌的活性及其作用机制。结果表明,抗菌肽zp37对单增李斯特菌的MIC为16μg/mL,当其质量浓度大于4MIC时,单增李斯特菌生长受到明显抑制。同时,8MIC的抗菌肽zp37处理1h能杀死绝大部分的单增李斯特菌,且在7 d贮藏期内,2MIC的抗菌肽zp37能将草莓汁、猕猴桃汁和苹果汁中的单增李斯特菌控制到检测限以下。抗菌肽zp37处理后,单增李斯特菌细胞膜离子通透性增加、膜电位消失,细胞膜完整性被破坏,细胞出现明显的凹陷变形,细胞间发生聚集。荧光标记示踪法结果显示,抗菌肽zp37同时作用于单增李斯特菌的细胞膜和细胞质。在细胞质中,当抗菌肽zp37质量浓度大于DNA质量浓度的1/4...     

茉莉酸甲酯处理对猕猴桃软腐病菌作用机制及果实品质的影响

以‘贵长’猕猴桃为试材,探究茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）对猕猴桃软腐病菌葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）作用机制及采前MeJA处理猕猴桃果实对其软腐病的防控和果实品质的影响。结果表明：随MeJA浓度（0～0.80 mmol/L）升高,其对猕猴桃软腐病菌葡萄座腔菌抑制作用增强,菌丝相对电导率、蛋白质与核酸相对泄漏度逐渐升高;0.80 mmol/L MeJA处理可引起菌丝细胞壁溶解、线粒体增多且形状不规则、空腔明显增加,细胞壁β-1,3-葡聚糖酶活力增强。田间实验结果显示：采前一个月用0.50 mmol/L MeJA浸果处理对猕猴桃软腐病防控效果可达77.70%,且可有效改善果实外观品质,提高果实VC、可溶性固形物质量分数;还可抑制猕猴桃贮藏过程中硬度下降,延缓可溶性固形物、可溶性糖质量分数的上升和VC的损失,从而提高其贮藏性能。综上,MeJA可影响葡萄座腔菌细胞壁结构完整性,具有抑菌活性,应用于田间防治猕猴桃果实软腐病效果理想,且能改善果实外形与品质、延长贮藏期。     

The Mechanism of Action of Pterostilbene in Xinjiang Wine Grape Against the Growth of Geotrichum citri-aurantii

Pterostilbene controlled the growth of Geotrichum citri-aurantii effectively through experiments of arthroconidium germination on agar plate, which displayed a strong antifungal activity. Observations using light microscope, scanning electron showed that the morphology and inner structure of the G. citri-aurantii treated with the pterostilbene changed notably. Some of the cells were abnormal or lysed. In order to further clarify the molecular mechanism of action, we examined the binding properties exerted by the pterostilbene on DNA and RNA of G. citri-aurantii fungal cells. Results showed that DNA and RNA of the G. citri-aurantii fungal cells were degraded by the pterostilbene. Moreover, three differentially expressed apoptosis genes of fungi were further examined by semi-quantitative RT-PCR. The results indicated that pterostilbene could cause the expression of up-regulated genes involved in RLM1, RTG1, and RTG3, of which the former two genes were significantly up-regulated.     

盐酸小檗碱抑制指状青霉的作用机制

本实验主要对盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)抑制指状青霉(Penicillium digitatum)生长的活性以及可能的作用机制进行探讨.结果表明,BH抑制指状青霉生长的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌质量浓度(m...     

柑橘果酒发酵特性参数消长规律研究

以柑橘为原料,通过对去皮果汁和带皮果汁发酵参数的对比分析,得出其消长规律。实验表明,果酒干酵母能利用去皮果汁和带皮果汁发酵,发酵力强,而用去皮果汁所酿制出的果酒在风味、口感、品质等方面要优于带皮果汁所酿制出的果酒。     

Overexpression of the Bivalent Antibacterial Peptide Genes in Pichia pastoris Delays Sour Rot in Citrus Fruit and Induces Geotrichum citri-aurantii Cell Apoptosis

Genetic manipulation of antagonists shows tremendous potential for improving biocontrol activity of antagonists. Here, bivalent antibacterial peptide Cecropin A/PsdI gene was transformed and expressed in methylotrophic yeast, Pichia pastoris GS115. The bivalent yeast GS115/CEC-PSD showed a great ability in delaying sour rot in citrus fruit and based on observations of restrained growth of geminated Geotrichum citri-aurantii spores relative to non-transformed strain. Although there was no remarkable discrepancy between growth rates of strain GS115 and GS115/CEC-PSD in vivo and vitro, plenty of vacuoles were observed in the cellular space of G. citri-aurantii treated with the CEC-PSD via transmission electron microscopy. Meanwhile, a gel-retardation assay exhibited that the DNA of G. citri-aurantii was degraded by CEC-PSD. Furthermore, our research revealed apoptosis genes in G. citri-aurantii were expressed at different levels with the CEC-PSD levels, among these genes, the expression level of RLM1 and RLM1was decreased remarkably, and the expression level of others changed relatively a little. These findings suggest that bivalent antimicrobial peptides can inhibit G. citri-aurantii by harming cell membrane, disrupting the cell metabolism, inducing programmed cell death and can therefore heighten the inhibition effect of the biocontrol yeast against postharvest diseases and this provides a new approach for the biological control of postharvest diseases.     

几种柑橘果实白皮层中过氧化物酶特性的比较研究

分离出柑橘果实的白皮层,充分切细使其粒径为0.5～1mm,用冷磷酸缓冲液浸提24h后四层纱布过滤,所得过氧化物酶(POD)粗酶液用于酶特性研究.结果表明,几种柑橘果实之间酶活性差异很大,最适宜的pH和温度均为5.0和40～60℃;随着底物浓度的升高,酶活力也升高,并在H2O2:为0.07%时达到饱和状态.以塔希提柠檬白皮层中POD为研究对象,添加不同剂量的VC和Na2S03作抑制剂,在浓度分别达到0.1%和0.5%时POD活力受到明显长时抑制.     

银耳多糖对淀粉消化酶的抑制作用及其机理研究

目的:研究银耳多糖对胰α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用及机制。方法:以干银耳为原料,分别采用碱法提取、酶法脱蛋白和柱层析分离,得到总糖含量为92.45%的银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide,TP）,采用可见光分光光度法分析了TP对胰α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,采用荧光光谱法和圆二色谱法表征了TP对该两种酶结构的影响。结果:TP能抑制该两种酶的活性,其对胰α-淀粉酶的抑制作用明显高于α-葡萄糖苷酶,对该两种酶的半抑制浓度（IC₅₀）分别为7.6835和16.9306 mg/mL。TP通过与该两种淀粉消化酶发生相互作用抑制其活性。TP与胰α-淀粉酶相互作用明显,可静态猝灭此酶,改变其二级结构;TP与α-葡萄糖苷酶相互作用微弱,不能改变其二级结构。结论:TP通过与淀粉消化酶发生相互作用抑制其活性。     

松针香橙抗氧化功能果酒酿造工艺研究

以马尾松松针、香橙为主要原料,开发一种具有抗氧化活性的松针香橙复合果酒。通过单因素试验、正交试验确定最佳发酵工艺。结果表明,发酵的最佳加工工艺为酵母添加量0.4%、发酵温度35℃、初始糖度25%、发酵时间72 h。此条件下发酵得到的松针香橙复合果酒不仅具有独特的香橙和松针风味,且具有较强抗氧化活性,其总抗氧化能力为67.587 U/m L。