食用油中致癌物苯并芘的快速免疫检测胶体金层析试纸条研制

采用免疫胶体金技术,首次建立了一种快速检测苯并芘的试纸条方法。先合成了苯并芘半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原。再利用人工免疫的方法成功获得了单克隆抗体,通过酶联免疫检测方法的建立对制备的单克隆抗体性能进行了验证。将单克隆抗体用以标记胶体金,并将苯并芘包被抗原与二抗(羊抗鼠IgG)分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫依次粘贴在PVC衬板上制备成了胶体金层析试纸条。经验证该试纸条检测限可达5~10 ng/mL,具有检测速度快、操作简单、灵敏度高等优点,且该试纸条与大部分苯并芘结构类似物无交叉反应。经实际食用油样品的加标实验,证明了该试纸条可实现对当前食用油中致癌物苯并芘的快速、准确判定。     

胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中土霉素残留

目的 建立用于快速检测动物源性食品中土霉素残留的胶体金免疫层析试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金粒径选用20 nm,将经鉴定制备成功的胶体金溶液与土霉素多克隆抗体结合得到金标抗体.优化金标抗体的制备条件,将包被抗原(1.0 mg/mL)和羊抗鼠二抗(0.75 mg/mL)分别作为检测线和质控线包被在硝...     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

伏马菌素B_1胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

目的:为制备一种快速检测玉米中伏马菌素B_1(FB_1)胶体金免疫层析试纸条。方法:采用碳化二亚胺法合成检测抗原FB_1-BSA,柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,辛酸-饱和硫酸铵法对抗FB_1单克隆抗体腹水进行纯化,将金标抗体喷于金标垫,检测抗原FB_1-BSA(T线)和羊抗鼠二抗(C线)喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)。结果:得到的单克隆抗体效价为1.28×105。该试纸条的NC膜喷涂的检测抗原浓度为200μg/m L,羊抗鼠二抗浓度为1.0 mg/mL,喷涂量分别为0.74μL/cm,试纸条灵敏度为20 ng/mL,检测时间只需5 min,试纸条于4℃至少可保存12个月。结论:采用制备的试纸条对玉米实际样品进行检测,检测结果与高效液相和酶联免疫吸附法检测结果相一致,说明该试纸条适合现场快速检测伏马菌素B_1。     

双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6 种血清型沙门氏菌

为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1 株产抗6 种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）。实验采用6 种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西兰大白兔进行免疫,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备出抗沙门氏菌单克隆抗体以及多克隆抗体,并建立双抗夹心ELISA体系检测冷鲜肉中沙门氏菌。结果表明,成功筛选出1 株能稳定分泌抗沙门氏菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株6E7,保藏编号为CGMCC 10313以及多克隆抗体,效价分别为1∶1.28×106和1∶8.0×105 ;将多抗作为包被抗体吸附于96 孔酶标板上,并用辣根过氧化物酶标记单抗,建立双抗夹心ELISA体系;检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800 CFU/g;并与其他血清型沙门氏菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌均无交叉反应,特异性良好。     

两株高特异性抗恩诺沙星单克隆抗体的研制

为自主研制抗恩诺沙星的高亲和力、高特异性单克隆抗体, 提供动物源食品中恩诺沙星药物残留生物学快速检验方法试剂, 利用碳二亚胺法(carbodiimide, EDC)制备恩诺沙星(enrofloxacin, ENR)的人工抗原, 免疫Balb/c小鼠, 采用PEG融合法, 通过有限稀释法筛选出抗恩诺沙星的单克隆抗体, 获得了两株抗恩诺沙星的单克隆抗体(克隆号:6A4和8D6).经过离子交换法纯化得到的抗体纯度在95%以上, 其中, 纯化后的6A4抗体在1 mg/mL时, 效价达到1.28×10-5, 8E6抗体在1 mg/mL时, 效价达到1.024×10-6.两株单克隆抗体与环丙沙星的交叉反应率为1.5%, 与其他氟喹诺酮类药物不反应.在酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)中, 6A4和8E6抗体的检测限分别为3.125 μg/kg和0.3 μg/kg.采用的半抗原合成以及单克隆抗体筛选的方法可以获得高灵敏度、高特异性的抗恩诺沙星的单克隆抗体, 经后续研究证实单克隆抗体(8E6)可以用于免疫胶体金和酶联免疫法检测食品中残留的恩诺沙星.     

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

目的 制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法 首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r²=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC₅₀)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%～110.35%,...     

抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究

目的 了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据.方法 在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对.结果 不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均最优.结论 经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11 (V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件.     

同时检测玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1,AFB1)和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条.采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB1和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠Ig...     

胶体金免疫层析法快速检测烟叶中三唑酮残留量

[目的] 应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测烟叶中三唑酮残留量的方法。 [方法] 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其与抗三唑酮抗体标记制备得金标抗体。三唑酮-OVA偶联物和残留量羊抗鼠IgG抗体分别结合于醋酸纤维膜上,依次将样品垫、醋酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。 [结果] 测试结果表明,三唑酮胶体金试纸条检测烟叶中三唑酮、三唑醇残留量的灵敏度为1mg/kg,检测时间为5~10 min,特异性高,重复性好,与气相色谱-串联质谱检测法符合率为98%。      

胶体金免疫层析法同时检测果蔬中四种农药残留

目的：研制一种胶体金免疫层析四线卡,可同时检测果蔬中毒死蜱、氟虫腈、克百威、多菌灵4种农药残留。方法：以硝酸纤维素膜为载体,农药竞争抗原为包被抗原,胶体金为标记材料,制备胶体金免疫层析四线卡,并对标记抗体浓度、检测线包被浓度、样品提取剂、提取时间等参数条件进行优化,评价四线卡的灵敏度、特异性、稳定性和准确性。结果：优化后四线卡制备工艺参数中毒死蜱、氟虫腈、克百威、多菌灵的最适标记抗体浓度为3.2、2.4、3.2、3.2μg/mL,T₁、T₂、T₃、T₄抗原包被浓度分别为0.65、0.80、0.65、0.5 mg/mL。毒死蜱检出限为0.1 mg/kg、氟虫腈为0.02 mg/kg、克百威为0.02 mg/kg、多菌灵为0.05 mg/kg,除了克百威与丁硫克百威的交叉反应率为20%,毒死蜱、氟虫腈和多菌灵与结构类似物的交叉反应率均小于5%,在室温条件下可保存至少12个月。经验证,对60份果蔬样品检测结果与仪器法检测结果一致。结论：本研究制备的四线卡操作简便、准确度高、快速、稳定,可以用于果蔬中毒死蜱...     

可视化微阵列蛋白芯片法同时检测蜂蜜中3种农药残留

目的建立可视化微阵列蛋白芯片法同时检测蜂蜜中多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷3种农药残留含量的分析方法。方法依次向制备好的微孔板芯片里加入50μL标准品工作液和50μL相应的抗体,在25℃、600 r/min下反应30 min;再向每孔中加入50μL纳米银标记的羊抗鼠IgG, 37℃、600 r/min下反应30 min;最后显色并用芯片专用软件(MiELISA)进行自动化分析。结果该方法对多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷的定量检测范围分别为0.4~6.4、0.3~4.8、0.75~12 ng/mL,相关系数r>0.99,检测限分别为3.21、2.47、2.52 ng/mL,准确度为83.6%~126.4%,变异系数均<10%,且三者之间具有极低的交叉反应;向不同种类的空白蜂蜜中添加2种不同浓度的标准品时,检测结果具有较高的准确度和重复性。结论本研究建立的可视化微阵列蛋白芯片检测法操作简便,检测限低,准确度、重复性、特异性均很好,且具有高通量、多指标同时检测等优点,适用于蜂蜜中多菌灵、啶虫脒、蝇毒磷3种农药残留同时检测。     

气相色谱法测定蔬菜、水果中氟环唑的研究

用乙腈提取,GC-ECD毛细柱测定蔬菜、水果中氟环唑残留的方法。质量浓度在0·016～3·95mg·L-1范围内,浓度与峰面积的线性相关系数为0·999以上,蔬菜和水果回收率在89·1%～117%之间,RSD为9·0%和1·1%;精密度的RSD为3·2%和4·9%;重现性的RSD为5·9%和3·4%;检出限:蔬菜在0·37～0·87μg/kg之间,水果在0·64～0·85μg/kg之间。      

呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法的建立及性能测定

建立动物源性食品中呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法。采用自制的呋喃西林代谢物抗原、抗体为基础原料,通过优化反应条件,建立间接竞争酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法,并对方法的性能进行测定。结果表明:建立的检测方法在0.03μg/L^2.43μg/L范围内呈线性,检测灵敏度为0.03μg/kg,鱼肉组织样本、虾肉组织样本的检测限分别为0.236、0.229μg/kg,回收率均在75%~120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,通过与标准方法液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrum/mass spectrum,LC-MS/MS)对比验证,两种方法用于鱼肉样本的检测呈现较好的相关性,相关系数R2为0.9944。建立的呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法的灵敏度、准确度和精密度等参数均符合我国动物源性食品中兽药残留检测方法的规定。     

茶鲜叶中拟除虫菊酯类农药残留的检测方法

拟除虫菊酯农药用量少,杀虫效果好,广泛应用于茶园害虫的控制,是我国出口茶叶中必检的农药。为实现茶叶生产危害分析关键控制点(HACCP)体系中农药残留的源头控制,提供农残源头监督检验方法依据,避免大量使用农药对茶园土壤环境造成的污染,开发茶鲜叶中菊酯类农药的多残留检测方法有重要的实践意义。本实验用V(石油醚)∶V(丙酮)=1∶1混合溶剂提取,经弗罗里硅土柱层析净化除去干扰物质,采用气相色谱,微电子捕获检测器(μECD)测定茶鲜叶中主要的6种拟除虫菊酯类农药残留量。方法最低检出浓度为0.005～0.01mg/kg;茶鲜叶中拟除虫菊酯农药的添加浓度为0.05、0.2、1.0mg/kg,其回收率在83.6%～104.5%,相对标准偏差(RSD)为2.7%～10.2%,符合农药残留分析要求。     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蔬果中34 种植物生长调节剂的残留量

建立蔬菜水果中34?种植物生长调节剂残留量的测定方法。样品经粉碎后,用QuEChERS法进行前处理,5?g样品经10?mL乙腈溶液提取,4?g无水硫酸镁＋1?g氯化钠＋1?g柠檬酸钠＋0.5?g三水合二柠檬酸氢二钠盐析脱水后,根据不同样品状态,取上清液用不同净化粉末进行净化;色谱条件以Waters?Acquity?HSS?T3柱进行分离,乙腈-水作为流动相,梯度洗脱;质谱离子化为电喷雾正负离子切换模式,多反应监测模式分段扫描检测;基质匹配外标峰面积法定量。化合物在2～100?μg/kg范围内呈良好线性关系,34?种植物生长调节剂的检出限为2～10?μg/kg,该方法前处理快速、灵敏、准确,满足目前国内外对植物生长调节剂残留限量的要求,可为常见蔬菜水果中植物生长调节剂的监管提供技术支撑。     

磁性化学发光酶免疫法检测猪肉中的氯霉素

建立以磁性微球为固定相的化学发光酶免疫法,定量检测猪肉中的氯霉素含量。此方法为在微孔中加入羊抗鼠磁性微球、样品和抗体,反应一定时间,之后补加酶标抗原,继续反应一定时间后清洗磁珠,加入发光液反应10 min后分析测定。通过磁珠用量、酶标抗原量、抗体量和反应模式的优化,成功建立了一种高灵敏度、高准确度的检测猪肉中氯霉素的磁性化学发光酶免疫方法。该方法的检出限为0.013μg/kg,线性范围在0.060~2.421μg/kg之间,回收率在85.24%~93.57%之间,相对标准偏差小于11.5%。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定山野菜中5种农药的残留

建立超高效液相色谱-质谱联用法[ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S]测定人工栽培山野菜中啶虫脒、吡虫啉、多菌灵、嘧霉胺、苯醚甲环唑5种农药残留。以乙腈为提取溶剂,采用多重反应离子监测（MRM）模式,ACQUITY UPLC BEH C18为分析色谱柱、0.1%甲酸乙酸铵-乙腈为流动相,对样品进行检测分析。结果表明:5种农药在0.0005².0000 mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数在0.9947⁰.9999之间。在农药混合标准溶液0.005⁰.200 mg/kg的水平下,添加回收率均在73.43%¹15.84%之间,相对标准偏差为2.04%¹8.19%。检出限在0.020⁰.510μg/kg范围内;定量限在0.066¹.699μg/kg范围内。本方法操作简单、快捷、准确度和精密度高,可应用于山野菜中5种农药残留测定。      

成都市售果蔬中农药残留水平分析及慢性膳食风险评估

了解成都市果蔬中农药残留污染现状及其对成都市居民的膳食风险水平.采集成都市果蔬大型农贸市场和超市的9类果蔬共203份样品,采用改良的GB 23200.113-2018 QuEChERS前处理方法,结合气相色谱-三重四级杆串联质谱对48种农药进行检测,分析成都市果蔬中农药残留现状,并结合大城市居民的果蔬消费情况和食品安全...