包装饮用水生产工艺过程微生物污染的检测与评估

为全面了解包装饮用水生产工艺中微生物的污染现状,从生产工艺过程各环节中采集样品,进行微生物培养,然后分离并纯化菌株进行微生物菌种鉴定,以掌握其背景资料,从而为合理、有效地控制生产工艺中潜在的微生物危害提供科学依据。     

中国传统纳豆中纳豆菌的分离筛选及其发酵特性初步研究

根据待分离菌株的耐热性、菌落形态特征和个体形态特征进行初筛,脱脂牛奶水解试验复筛,分别从纳豆胶囊分离纯化得到菌株C-1,从加纳豆胶囊的纳豆中分离纯化出菌株D-1,从不加菌种制作的传统纳豆(中国民间做法,不加任何菌种制作的纳豆)中分离纯化得到菌株F-1,并对这3个菌株进行理化试验,结果均与枯草芽孢杆菌的特性一致。同时对C-1和F-1两个菌株产生纳豆粘液的拉丝情况和得率进行了考察,结果表明:F-1比C-1纯种纳豆的拉丝长5.94cm,粘液产率高1.62%。     

扳倒井酒用微生物的分离鉴定及功能性、抗逆性研究

利用梯度稀释法和划线纯化法,对扳倒井大曲、酒醅及窖泥中的微生物进行分离纯化,共得到112株菌种,包括61株细菌、32株霉菌和19株酵母菌。经过形态特征观察和分子生物学鉴定后,对其进行冻干管制作,并保藏至扳倒井微生物菌种资源库。分别对112株菌种的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活力进行测定,筛选出高酶活菌株;同时对112株菌种进行耐高温和耐酸性能筛选,筛选出具有抗逆性能的菌株。     

某企业婴儿肉毒中毒乳粉相关样品中肉毒梭菌的分离与分型

目的 对从某企业获取的30批次婴儿配方乳粉样品进行肉毒毒素和肉毒梭菌检测，对分离到的1株B型肉毒梭菌进行全基因组测序分析。方法 参照GB 4789.12—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对样品进行肉毒梭菌分离及肉毒毒素分型实验；对分离到的菌株进行全基因组测序，并分析菌株的遗传特征。结果 30批次样品中均未检出肉毒毒素；将增菌液进行小鼠腹腔注射后，4批次乳粉样品出现了典型小鼠肉毒中毒症状，但仅从1批次乳粉样品中分离到肉毒梭菌。基因组测序分析显示，该菌为Ⅰ群B型肉毒梭菌，毒素基因簇为Ha型，毒素基因为B2亚型。结论 针对背景微生物复杂的婴儿配方乳粉中肉毒梭菌检测，不应以菌种分离作为金标准，而应以增菌液小鼠毒性实验结合肉毒抗血清保护实验作为确认方法。全基因组测序可对分离菌种进行精准鉴定和相关遗传特征分析，为中毒事件处理提供可靠的技术支撑。     

荔枝干微生物菌落分析及其霉菌的分离鉴定

为了研究荔枝干贮藏销售期内普遍存在的微生物超标及霉变问题,对市场零售的散装荔枝干样品进行了微生物数量的测定,并对散装和真空包装的荔枝干样品中的霉菌进行了分离、纯化、鉴定。结果表明:20%样品菌落总数>750cfu/g,80%样品霉菌总数>50cfu/g,抽样合格率为20%;从荔枝干样品中分离得到5株霉菌,通过形态学观察鉴定为黄曲霉、黑曲霉、烟曲霉、红曲霉和黑绿青霉,并确定曲霉属菌株为荔枝干表面霉菌的优势菌群。      

荔枝干微生物菌落分析及其霉菌的分离鉴定

为了研究荔枝干贮藏销售期内普遍存在的微生物超标及霉变问题,对市场零售的散装荔枝干样品进行了微生物数量的测定,并对散装和真空包装的荔枝干样品中的霉菌进行了分离、纯化、鉴定。结果表明:20%样品菌落总数>750cfu/g,80%样品霉菌总数>50cfu/g,抽样合格率为20%;从荔枝干样品中分离得到5株霉菌,通过形态学观察鉴定为黄曲霉、黑曲霉、烟曲霉、红曲霉和黑绿青霉,并确定曲霉属菌株为荔枝干表面霉菌的优势菌群。     

肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究

目的:通过参加中国食品药品检定研究院组织的能力验证,比对不同检验方法对巧克力样品中沙门氏菌的检出及鉴定效果,找出不同检验方法对样品中不典型沙门氏菌分离及鉴定的特性,有效提升实验室对不典型沙门氏菌检验能力及质量控制水平。方法:实验中样品前处理按照考核方案作业指导书进行,沙门氏菌的分离按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)要求进行操作,通过BAX~? system Q7快速筛查可疑样品,MALDI-TOF-MS定位可疑菌株,VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统确认阳性菌株,MLST技术对沙门氏菌阳性菌株进行分子生物学分型。结果:3个样品中两个样品检出沙门氏菌,样品CODE-0695检出鼠伤寒沙门氏菌,样品CODE-0050未检出沙门氏菌,样品CODE-0542检出肠道沙门菌双相亚利桑那亚种。结论:实验发现肠道沙门菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上菌落形态及生化表征与常见沙门氏菌不一致,易漏检,实际工作中应加强对不典型沙门氏菌检验能力的建设。     

中式干酪生产用菌种的筛选研究

对泡菜中乳酸菌进行了初步分离纯化,共筛选出4种菌株,对这4种菌株进一步进行了发酵性能研究,通过测定发酵产酸、双乙酰含量、pH4.6可溶性氮和胞外多糖产生量对菌种进行筛选,结果确定菌株1和菌株2较适合用于干酪的制作。     

红曲色素高产菌株的诱变筛选及液态发酵初探

从不同的红曲样品中分离纯化获得红曲霉菌株 5株 ,以此为菌种液态发酵制备红曲 ,选出发酵后菌丝体色价与发酵原液色价都相对较高的编号为M3的菌株为出发菌株 ,进行了6 0 Co γ射线的诱变 ,获得了编号为M 3 2相对高产的色素菌株 ,其发酵后菌丝体总色价和发酵液总色价分别提高了 2 7 0 8%和 2 5 90 %。并对其液态发酵制备的红曲色素进行了质量分析。     

机械化黄酒中糖化菌的初步培养与研究

对保存的黄酒糖化茵进行分离、纯化、筛选，并与原始菌种制备麸曲、麦曲，对其进行糖化力、液化力测定。检验结果表明：筛选后的菌株糖化力和液化力均高于原始菌株。     

真空包装免泡豆杆优势腐败细菌分离鉴定及其致腐能力分析

以真空包装免泡豆杆为研究对象,分离鉴定其中的腐败细菌,并分析耐高温优势腐败菌的腐败能力,为产品质量控制提供参考。采用选择性培养基对免泡豆杆中腐败细菌进行分离纯化,并测定菌株的耐高温及产蛋白酶能力,通过形态、生理生化特征结合16S?rRNA、gyrB基因序列分析对优势腐败细菌进行分类鉴定。将优势腐败菌接种到无菌免泡豆杆中,通过样品感官评价、质构特性、挥发性盐基氮值（TVB-N）、蛋白酶活力及pH值的分析,比较不同腐败菌株对免泡豆杆的腐败能力。从腐败样品中共分离获得20?株不同的腐败菌,其中有12?株可耐受110?℃、20?min高温处理,且具有较强的产蛋白酶能力。回接验证实验结果表明,接种4?株优势耐高温腐败菌的免泡豆杆样品,37?℃贮藏至第7天发生明显腐败变质,样品TVB-N、蛋白酶活力及pH值显著高于未接菌对照样品;此外,硬度、弹性、胶着性、耐咀性等产品质构特性也显著低于对照样品。4?株优势腐败菌均为芽孢杆菌,通过比较TVB-N产量因子确定腐败能力最强的是解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）DY1a,其次依次分别为解淀粉芽孢杆菌DY1b,枯草芽孢杆菌（B. subtilis）DY3和DY2a。     

冷鲜牛肉贮藏中菌群结构及优势菌致腐性的分析

为探究牛肉在0?℃冷藏下微生物菌群变化和优势腐败菌,采用培养依赖的16S rRNA结合高通量测序技术分析牛肉样品的微生物多样性变化。通过定期测定接种牛肉汁的生长、感官、蛋白酶活性、pH值和挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）值,分析分离株的致腐特征。结果表明,牛肉冷藏中感官品质保持良好,15?d出现异味,18?d有腐臭味。而样品中菌落总数第3天快速上升,15?d菌落总数为8.73（lg（CFU/g））,之后呈现稳定,假单胞菌（Pseudomonas spp.）、热死环丝菌（Brochothrix thermosphacta）、肠杆菌（Enterobacter）和乳酸菌4 种分离培养基中细菌与菌落总数增长趋势相似,其中假单胞菌增长最快,肠杆菌数和乳酸菌数生长最慢。两种菌群鉴定结果显示,冷鲜牛肉初始微生物构成复杂,包括热死环丝菌、不动杆菌属（Acinetobacter spp.）、气单胞菌属（Aeromonas spp.）和假单胞菌等多种菌属构成,而腐败末期菌群构成趋于单一,假单胞菌和热死环丝菌为优势腐败菌,特别是莓实假单胞菌（P. fragi）。将腐败分离株10?株假单胞菌、4?株热死环丝菌和1?株蜂房哈夫尼菌（Hafnia alve）接种于冷藏的牛肉汁,发现假单胞菌和蜂房哈夫尼菌的接种组感官评分、pH值和TVB-N值高于热死环丝菌,且假单胞菌有较强的蛋白酶活性。研究表明,结合感官和微生物评价冷鲜牛肉贮藏期为15?d,且菌群多样性下降,假单胞菌和热死环丝菌是优势腐败菌,其中假单胞菌致腐性较强。     

解冻猪肉中优势腐败菌致腐能力研究

将解冻猪肉中的优势腐败菌(假单胞菌属、热死环丝菌和肠杆菌科)接种到灭菌肉上研究其在不同温度贮藏过程中腐败的特点。在贮藏期间每天进行感官评价,测定各腐败菌的菌落数(CFU)、挥发性盐基氮(TVB-N)、脂肪氧化值,并以产生腐臭味时的TVB-N产量因子Y(TVB-N/CFU)作为各优势腐败菌腐败能力的定量指标。研究结果表明：至贮藏期第5天时解冻猪肉已产生强烈的腐臭味,热死环丝菌菌数在4、0℃和－5℃贮藏时分别达11.28lg(CFU/g)、9.63lg(CFU/g)和6.62lg(CFU/g),而相应的TVB-N值分别达14.92、14.50mg/100g和9.10mg/100g;与之类似,假单胞菌属菌数4、0℃和－5℃贮藏时分别达9.46lg(CFU/g)、8.87lg(CFU/g)和5.37lg(CFU/g),TVB-N值分别达21.59、14.49mg/100g和8.97mg/100g。研究表明热死环丝菌和假单胞菌属导致解冻猪肉腐败能力较强。     

南极磷虾品质变化对蛋白酶酶活及可溶性蛋白质的影响

探讨南极磷虾在不同的贮藏温度、时间的条件下,蛋白酶活力及可溶性蛋白含量与品质（TVB-N、菌落总数）的关系。10℃贮藏15h,4℃贮藏36h后TVB-N和菌落总数均超出腐败范围,即使在-20℃贮藏条件下,南极磷虾也依然腐败较快。-80℃是理想的南极磷虾贮藏温度,在超低温条件下南极磷虾能够较好的保持其品质和活性。南极磷虾品质下降时（TVB-N、菌落总数对数值上升）,蛋白酶活力及可溶性蛋白含量减少,且在10、4、-20℃贮藏过程中存在显著相关性。-80℃贮藏时蛋白酶活力与TVB-N、菌落总数没有显著相关性,可溶性蛋白与TVB-N、菌落总数对数值存在显著相关性。      

肉制品中亚硝酸盐测定能力验证

为加强肉制品安全监督管理,进一步提升检验检测机构对肉制品中亚硝酸盐含量的检测能力,确保提供的检测数据准确、可靠,组织实施肉制品中亚硝酸盐含量检测能力验证计划。制备含亚硝酸钠的鸡肉火腿肠,向42家实验室随机发放样品,在规定时间内回收检测数据。对检测结果进行稳健统计分析,以Z值评价各个实验室的检测能力,并对非满意结果的实验室通过查阅原始记录进行技术分析。结果表明：制备的能力验证样品均匀、稳定,满足能力验证计划要求;42家实验室总体结果满意率为81.0%,表明实验室对肉制品中亚硝酸盐含量的检测能力较好;部分实验室发现检测过程中所存在的问题,并加以改正,使自身检测能力进一步提高。     

冷藏鲣鱼优势腐败产胺菌分离鉴定及其致腐产胺能力分析

为探究鲣鱼中优势腐败产胺菌的种类,从冷藏的鲣鱼中筛选出3种优势腐败产胺菌,通过16S rDNA分子鉴定技术对菌株进行鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）,将鉴定出的优势腐败产胺菌接种至无菌鱼肉中4 ℃条件下贮藏,通过测定菌落总数和挥发性盐基氮（TVB-N）变化,以腐败代谢产物产量因子（Y_TVB-N/CFU）分析3种优势腐败产胺菌对鲣鱼的致腐能力,并通过样品中生物胺的含量比较3种优势腐败产胺菌的产胺能力。结果表明:在贮藏8 d后接种荧光假单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌和嗜水气单胞菌组的菌落总数分别达到8.36、8.27和8.13 lg CFU/g,TVB-N值分别为28.21、30.30和31.29 mg/100 g,3种优势腐败产胺菌对鲣鱼的致腐能力大小为嗜水气单胞菌>弗氏柠檬酸杆菌>荧光假单胞菌。接种荧光假单胞菌组、弗式柠檬酸杆菌组和嗜水气单胞菌组的组胺含量分别为196.23、83.43和261.22 mg/kg,3组样品中总生物胺含量为嗜水气单胞菌>荧光假单胞菌>弗氏柠檬酸杆菌。综合比较得出,嗜水气单胞菌对4 ℃冷藏鲣鱼致腐产胺能力最强,本研究增加对冷藏鲣鱼中优势腐败产胺菌种类的了解并提供了部分理论基础。     

冷藏三文鱼片特定腐败菌致腐能力测定与分析

以接种三文鱼片特定腐败菌（荧光假单胞菌）的无菌三文鱼片和灭菌三文鱼汁为研究对象,通过定期测定其在0℃冷藏过程中腐败菌数、腐败代谢产物及感官的变化情况,并以其产生腐败臭味时的TVB-N产量因子（YTVBN/CFU）作为其腐败能力的定量指标,探究三文鱼片特定腐败菌荧光假单胞菌的致腐能力。结果表明:接种荧光假单胞菌的无菌鱼片和灭菌鱼汁的货架期分别为216 h和144 h,此时假单胞菌的菌落数分别为7.54 lg cfu/g和7.03 lg cfu/m L;TVB-N的含量分别为30.82 mg/100 g和29.76 mg/100 m L;产量因子YTVB-N/CFU分别为6.36×10-9 mg TVB-N/CFU和0.22×10-9mg TVB-N/CFU。该研究可为靶向抑制三文鱼腐败优势菌的生长,提高三文鱼的品质及延长其货架期提供一定的参考。      

Eggshell factors influencing eggshell penetration and whole egg contamination by different bacteria, including Salmonella enteritidis

Trans-shell infection routes and whole egg contamination of 7 selected bacterial strains; Staphylococcus warneri, Acinetobacter baumannii, Alcaligenes sp., Serratia marcescens, Carnobacterium sp., Pseudomonas sp. and Salmonella enteritidis, recovered from egg contents, were studied. The first objective was to correlate bacterial eggshell penetration with various eggshell characteristics and bacterial strains. An agar approach was used to assess the eggshell penetration. The second objective was to assess the contamination of whole eggs with the bacterial strains; whole intact eggs were used in this case. The intact shells of agar-filled and whole eggs were inoculated with 10(3) -10(4) cfu of the selected strains. During 3 weeks storage at 20 degrees C and 60% relative humidity, the bacterial eggshell penetration was regularly monitored. The whole egg contamination was only analyzed after 3 weeks. The eggshell characteristics such as area eggshell, shell thickness and number of pores did not influence the bacterial eggshell penetration. For each individual bacterial strain the mean cuticle deposition was lower for penetrated compared to non-penetrated eggshells. For the individual strain Carnobacterium sp. and for the global results of all strains this difference was statistical significantly. The whole egg contamination was not influenced by neither the area of the eggshell nor the porosity of the eggshell. The results of the agar approach indicate that the Gram-negative, motile and non-clustering bacteria penetrated the eggshell most frequently; Pseudomonas sp. (60%) and Alcaligenes sp. (58%) were primary invaders followed by S. enteritidis (43%). All selected strains were able to penetrate; penetration was observed most frequently after ca. 4-5 days. Particularly S. enteritidis was a primary invader of whole eggs: the membranes and/or the content of 32% of the whole eggs was contaminated. The remaining bacterial eggshell contamination with the selected strain was determined after 3 weeks storage. Penetrated eggshells and contaminated whole eggs showed a significantly higher bacterial contamination on the eggshell compared to non-penetrated eggshells and non-contaminated whole eggs respectively (global results of all strains). The influence of hen age on bacterial eggshell penetration and egg content contamination was not significant. While the agar approach is suitable to study the influence of the eggshell characteristics on the bacterial eggshell penetration, the intact egg approach gives an estimation of the penetration of the shell followed by the probability of survival and migration in whole eggs.     

腐败希瓦氏菌及其与蜂房哈夫尼亚菌共培养对冷藏大菱鲆的致腐能力

本研究将腐败希瓦氏菌SP22及其与蜂房哈夫尼亚菌Ha-01混合菌液分别接种到大菱鲆无菌鱼块中,以微生 物及理化参数（菌落总数、挥发性盐基总氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）值、K值、Ca2＋-ATPase活力及肌 肉蛋白显微结构）为指标,探讨腐败希瓦氏菌SP22及其与蜂房哈夫尼亚菌Ha-01共培养对冷藏大菱鲆的致腐能力。 结果表明：在4 ℃冷藏过程中,随着贮藏时间的延长,各接菌组鱼块的菌落总数、TVB-N值及K值上升速度明显 高于空白对照组,且接种混合菌组的上升速度高于接种单菌组;接菌组的Ca2＋-ATPase活力下降速度明显高于空 白对照组,其中接种混合菌组下降最快;利用扫描电子显微镜可观察到接菌组肌肉蛋白质变性降解速度明显快于 空白对照组。腐败希瓦氏菌SP22能够造成大菱鲆的腐败变质,且其与蜂房哈夫尼亚菌Ha-01共培养时能够产生明 显的致腐效果。     

优势腐败菌对暗纹东方鲀冷藏期间品质变化影响及致腐能力分析

为分析暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)优势腐败菌的不同接种方式对其冷藏期间品质变化影响及致腐能力.将荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)分别以单一和联合法接种到无菌整鱼上,依次分为荧光假单胞菌接种(P.fluore...