酶解核桃蛋白制备ACE抑制肽及其功能特性研究

对木瓜蛋白酶酶解核桃蛋白制备ACE抑制肽条件进行优化,测定不同条件下酶解液的抗ACE功能特性。用葡聚糖凝胶G-25分离活性肽段,测定其ACE抑制率。结果表明:酶解条件是:酶用量6 000 U/g底物、底物质量分数3%、p H 7.5、温度50℃,酶解240 min。此时酶解液的ACE抑制率较高,达88.86%。通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃蛋白产物高ACE抑制率的活性肽段集中在分子质量612~307u范围,其抑制率为93.56%。     

亚麻多肽制备及其抗氧化活性分析

该研究以脱脂亚麻籽粕为原料,比较不同酸性蛋白酶和中性蛋白酶的酶解多肽的得率,评价了酶解多肽的抗氧化活性。结果表明:3.350黑曲酸性蛋白酶的酶解效果最好,多肽得率可达28.52%。通过蛋白酶的单因素和正交试验,确定亚麻多肽制备的最佳工艺条件为:酶解温度60℃、pH2.7、加酶量6 500 U/g,酶解时间2.5 h,此条件下亚麻多肽得率为38.80%。凝胶色谱分析表明,该酶多肽的分子量主要分布在1 000 Da～7 600 Da范围内。酶解后的亚麻多肽具有良好的还原力,当酶解液质量浓度为1.5 mg/mL时,DPPH自由基清除率为89.99%,当酶解液质量浓度为0.6 mg/mL时,超氧阴离子的清除率为85.57%。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。     

酶解条件对核桃多肽抗氧化活性的影响

以核桃蛋白粉为原料制备核桃蛋白抗氧化活性肽,分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶对核桃蛋白进行酶解,测定了不同酶作用下的核桃多肽抗氧化活性,确定碱性蛋白酶是酶解核桃蛋白的最适蛋白酶。研究了酶解温度、酶解时间、酶解pH、底物浓度、酶添加量等酶解条件对酶解产物抗氧化活性的影响。结果表明:不同的酶解条件对酶解产物核桃多肽的抗氧化活性有显著影响,最佳酶解条件为:温度50℃,时间120 min,pH8,底物浓度3%,酶添加量3%,在此酶解条件下制得的核桃多肽对羟基自由基和超氧阴离子的清除率分别为53.8%和50.0%,还原能力为51.7%。     

木瓜蛋白酶水解核桃粕制备抗氧化活性多肽的研究

利用木瓜蛋白酶水解核桃粕,得到核桃多肽。采用Box-Behnken中心组合分析优化水解条件,以羟基自由基和超氧阴离子自由基清除率为响应值,得到最优水解条件为:pH值6、温度50℃、酶解时间3h、底物浓度3%。在此条件下,核桃多肽对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为32.7%和24.6%。结果表明,木瓜蛋白酶水解核桃粕得到的核桃多肽具有一定的抗氧化活性;并且与VC做对比,其还原能力是VC的37.9%。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的研究

利用木瓜蛋白酶酶解核桃分离蛋白制备小分子活性肽,并研究了不同分子量段核桃小分子肽的抗氧化性能。通过单因素实验和正交实验,确定了木瓜蛋白酶制备抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH8.5,温度50℃,酶与底物浓度之比[E]/[S]=3:100,底物浓度[S]=3.5g/100mL,酶解时间5h。用截留分子量分别为3kDa和10kDa的超滤膜将核桃粗肽液分离成<3kDa、3～10kDa及>10kDa3个分子量段,并对不同分子量段核桃多肽的抗氧化性进行了研究,结果表明,分子量<3kDa的核桃多肽的抗氧化性大于其他两个分子量段。     

核桃蛋白的分离制备及其酶解物的抗氧化特性

根据蛋白在水溶液、盐溶液、醇溶液及碱性溶液中的溶解性不同,从核桃粕中分离得到四类不同性质的蛋白组分:清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,其中球蛋白和谷蛋白含量较高,分别为16.90%和71.40%。以脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白为原料,分别制备蛋白酶解液,以DPPH自由基清除率和蛋白质回收率为指标,对蛋白酶解工艺条件进行优化,探讨蛋白酶解液的分子量分布与抗氧化活性的关系。结果表明:在碱性蛋白酶、pH8及酶解9h的条件下,蛋白酶解液有较高的DPPH·清除率和蛋白回收率;脱脂脱酚核桃粕酶解液DPPH·清除率83.29%高于谷蛋白酶解液79.25%和球蛋白酶解液72.27%,蛋白回收率分别为69.83%、66.42%和73.71%。脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白酶解液以小分子肽居多,其中相对分子量≤1000的肽段分别占总量的42.73%、63.91%和55.10%,推测其抗氧化活性可能与小分子肽含量有关。     

牛骨胶原蛋白肽的超声辅助提取及抗氧化活性研究

该文采用超声辅助酶解法提取牛骨胶原蛋白肽，并研究其抗氧化性能。以牛骨为原料，蛋白水解度为评价指标，在单因素基础上结合响应面法优化得出最佳提取工艺条件。研究了多肽液中游离氨基酸组成和肽分子质量分布规律，并在多肽液1～5 mg/mL质量浓度梯度下对DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除能力进行测定，评价牛骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明，在超声功率为400 W,超声时间120 min,底物浓度4.4 g/100 mL和加酶量6 000 U/g的酶解条件下，牛骨胶原蛋白水解度为20.94%,与预测值21.33%接近。多肽液中疏水性氨基酸和必需氨基酸含量丰富，1 000 Da以下的肽段含量达到86.83%。体外抗氧化指标的结果显示，DPPH自由基清除率最高为43.80%,超氧阴离子自由基清除率最高为64.74%,均显著高于未超声处理组的37.33%和57.41%(P<0.05),表明超声波辅助酶解法提取的多肽液具有明显的抗氧化性。因此，超声波辅助酶解法提取牛骨胶原蛋白肽是一种绿色、高效的提取方法，对牛骨蛋白的利用和活性肽的开发具有重要意义。