miR-195表达调控对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-195对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:应用脂质体转染的方法,将miR-195 mimics转染入HT-29细胞,q RT-PCR检测转染后miR-195的表达,分别采用CCK-8法及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测转染后VEGFA mRNA和蛋白表达变化。结果:与NC组比较,miR-195 mimics转染组明显上调HT-29细胞miR-195的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,下调VEGFA mRNA及蛋白表达,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:上调HT-29细胞的miR-195表达,可明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与抑制其靶基因VEGFA表达相关。     

miR-381-3p靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法 RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1 mRNA的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic 质粒、miR-control质粒、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞，基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因，双荧光素酶报告检测靶向关系，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹分析检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴细胞瘤2（B-celllymphoma，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein， Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartic acid protease 3，Caspase-3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、p70s6激酶(The p70s6 kinase，p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果 miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达（P < 0.01），而SP1高表达（P < 0.01）；miR-381-3p与SP1 3’UTR区存在结合位点，且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达；过表达miR-381-3p后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01）、Ki67和PCNA蛋白表达明显下调（P < 0.01），细胞凋亡率明显降升高（P < 0.01）、Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调（P < 0.01），mTOR和p70s6k磷酸化明显减少（P < 0.01）；而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01），细胞凋亡率明显增加（P < 0.01），增殖标记蛋白Ki67表达明显下调（P < 0.01），凋亡标记蛋白Cleaved caspase-3表达明显上调（P < 0.01），而SP1蛋白表达无明显变化。结论 miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果 miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P<0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P<0.05)。结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

miR-140靶向LRP4基因对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-140对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测甲状腺癌TPC-1细胞和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-140和LRP4的表达水平;将miR-con组(转染miR-con)、miR-140组(转染miR-140 mimics)、si-con组(转染si-con)、si-LRP4组(转染pcDNA-LRP4)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-140组(转染anti-miR-140)、miR-con+WT-LRP4组(转染miR-con和WT-LRP4)、miR-con+MUT-LRP4组(转染miR-con和MUT-LRP4)、miR-140+WT-LRP4组(转染miR-140 mimics和WT-LRP4)、miR-140+MUT-LRP4组(转染miR-140 mimics和MUT-LRP4)、miR-140+pcDNA组(转染miR-140 mimics和pcDNA)、miR-140+pcDNA-LRP4组(转染miR-140 mimics和pcDNA-LRP4)均用脂质体法转染至TPC-1细胞;采用CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:甲状腺癌TPC-1细胞在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、miR-140的表达水平显著降低,LRP4 mRNA和蛋白质的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-140、抑制表达LRP4均可抑制TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭;miR-140可靶向负调控LRP4的表达。过表达LRP4可逆转miR-140过表达对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-140可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向LRP4有关,将可为甲状腺癌的诊断、治疗提供新靶点。     

AEG-1抑制miR-137对非小细胞肺癌增殖调控作用

目的探讨AEG-1在miR-137抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法收集2013年2月~2014年5月在本院手术治疗的65例NSCLC患者肿瘤标本,提取RNA,qRT-PCR检测NSCLC组织、A549、H460及16HBE细胞中miR-137与AEG-1的表达,统计分析NSCLC组织中miR-137与胶质细胞上调基因1(AEG-1)表达的相关性;将A549细胞根据不同转染试剂分成4组:转染miR-137 mimics及空载体组,转染miR-137mimics及AEG-1表达载体组,转染miR-137 inhibitor及siRNA无关序列组,转染miR-137 inhibitor及AEG-1 siRNA组。用Lipofectamine 2000进行转染,生长曲线实验检测转染后细胞增殖情况。结果在NSCLC组织中miR-137与AEG-1的表达呈负相关;miR-137表达高的NSCLC细胞中AEG-1表达降低;共同转染miR-137 mimics与AEG-1过表达载体的A549细胞在48 h的细胞数高于对照组,而共同转染miR-137 inhibitor与AEG-1 siRNA的A549细胞在48 h、72 h的细胞数低于对照组。结论 miR-137与AEG-1在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;AEG-1逆转miR-137对NSCLC细胞增殖的作用。     

CYTOR通过调控miR-125b-5p/HK2通路促进宫颈癌细胞有氧糖酵解、增殖和侵袭

探讨细胞骨架RNA(CYTOR)及其下游分子轴对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。选取宫颈癌组织及细胞,检测CYTOR的表达水平;采用CCK-8、Transwell、有氧糖酵解方法检测探讨CYTOR对宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解的影响;同时利用双荧光素酶报告基因验证CYTOR、小分子RNA miR-125b-5p、己糖激酶2(HK2)之间的相互作用关系。结果显示,CYTOR在宫颈癌组织及细胞中明显上调(P<0.05);抑制CYTOR可明显降低宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解(P<0.05);荧光素酶报告基因证实CYTOR可竞争性吸附miR-125b-5p,而miR-125b-5p可负调控HK2的表达。研究表明,CYTOR/miR-125b-5p/HK2分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和有氧糖酵解,是一个潜在的宫颈癌治疗分子靶点。     

miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖

目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-124对DNMT3B3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-124 mimics转染胃癌细胞MKN-45,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-124 mimics 24、48和72 h后OD值(0.264±0.023、0.377±0.041、0.524±0.029)分别与对照组(0.414±0.051、0.619±0.065、0.898±0.072)比较,差异均有显著性(均P<0.05),且具有时间依赖性;荧光素报告载体系统证实DNMT3B是miR-124直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-124可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-124通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞增殖能力。     

长链非编码RNA PTV1通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制甲状腺癌细胞的增殖、侵袭及诱导凋亡

目的探究长链非编码RNA PTV1在甲状腺癌细胞株中的表达情况及其调控PTC细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的作用机制。方法qRT-PCR检测细胞中PTV1的表达情况；将PTC细胞随机分为3组，分别转染PTV1-siRNA沉默载体（PTV1-siRNA组）、PTV1-siRNA空表达载体（siNC组）及空白对照PBS（Blank组）。采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力；利用Western Blot法检测Wnt信号通路相关蛋白β-catenin、c-myc和cyclin D1的表达水平。结果与正常甲状腺细胞株HT-ori3相比，人甲状腺癌细胞株IHH-4（PTC）、FTC-133、8505C的PTV1表达水平明显增加（P<0.05）；沉默PTV1表达可明显抑制PTC细胞的增殖和侵袭能力，诱导细胞凋亡、降低β-catenin、c-myc和cyclin D1的蛋白表达水平（P<0.05）。结论LncRNA PTV1在甲状腺癌细胞中高表达；沉默LncRNA PTV1可抑制PTC细胞的增殖和侵袭，促进凋亡，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的表达有关。     

miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长(P<0.05)。结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

转录共刺激因子对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关蛋白的影响

目的:探讨转录共刺激因子(TAZ)对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关增殖蛋白的影响,分析其影响结直肠癌肿瘤生物学行为的可能作用机制。方法:采用合成TAZ小干扰RNA(TAZ-siRNA)转染结直肠癌细胞株HCTT116抑制TAZ表达,检测细胞活性、侵袭迁移能力、细胞凋亡,采用实量定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TAZ与基质金属蛋白酶mRNA表达,采用Western blot法相关蛋白表达。结果:转染组TAZ mRNA与蛋白表达均明显低于对照组与空白组(t=27.116、17.600、24.051、16.168,P<0.01);HCT116细胞活性、侵袭迁移能力均明显低于对照组与空白组,细胞凋亡率均明显高于对照组与空白组(t=12.944、17.613、20.489、12.639、18.324、20.051,P<0.01);基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等mRNA表达均明显低于对照组与空白组,金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达均明显高于对照组与空白组(t=13.588、10.041、6.678、13.164、10.479、6.705,P<0.05或<0.01);B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组与空白组,bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt C)表达均明显高于对照组与空白组(t=9.358、7.670、15.205、19.163、5.937、17.063,P<0.05或<0.01)。结论:抑制转录共刺激因子(TAZ)能够抑制结直肠癌肿瘤细胞增殖与转移,可能与调节基质金属蛋白酶、相关蛋白表达水平有关。