双水相亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶

采用双水相金属螯合亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶,考察了豆壳过氧化物酶在不同类型双水相系统中金属螯合亲和配基聚乙二醇(PEG)-亚氨基二乙酸(IDA)-Cu(Ⅱ)对亲和分配的影响,发现PEG/羟丙基淀粉(PES)系统适合于金属螯合亲和分配豆壳过氧化物酶。进一步考察亲和配基加入量、成相聚合物分子量、系统组成、pH等因素对PEG/PES系统亲和分配的影响,优化分离条件为:PEG20009%,PES20014%,PEG-IDA-Cu(Ⅱ)1%,豆壳过氧化物酶的分配系数达40,纯化因子为2.8,回收率达到93%。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

木瓜蛋白酶在金属螯合亲和双水相中分配行为的研究

利用金属螯合双水相亲和分配技术对木瓜蛋白酶的萃取进行了研究。考察了不同无机盐和浓度、PEG的分子量和浓度、亲和配基的加入量、pH、酶添加量对木瓜蛋白酶分配的影响,对不含亲和配基的双水相和含亲和配基的双水相萃取木瓜蛋白酶的效果进行比较。优化的分配条件为:质量分数17%PEG 4 000,1%PEG-IDA-Cu~(2+),18%Na_2SO_4,pH 7.0,酶添加量为2 mg/g,在此条件下,木瓜蛋白酶的酶活性回收率可达到90%左右,蛋白分配比达到5.11。结果表明,PEG 4 000/Na_2SO_4系统比PEG 4 000/(NH_4)_2SO_4系统更有利于木瓜蛋白酶亲和分配;无机盐的浓度和亲和配基的加入量是影响木瓜蛋白酶分配的关键因素;与不含亲和配基的双水相系统相比,亲和配基的加入可以提高木瓜蛋白酶在PEG相的分配,酶活性回收率和蛋白分配比可分别提高10%和2.0左右,表明金属鳌合双水相分配技术分离木瓜蛋白酶是可行的,为该体系的放大试验或规模化生产奠定了相应的试验基础。     

木瓜蛋白酶的分离方法及其应用进展

对亲和层析法、超滤膜分离法、沉淀分离法、溶剂萃取法、双水相萃取法等分离提取木瓜蛋白酶的方法进行了评述;综述了木瓜蛋白酶在食品、化工、纺织、医药等行业的应用进展。木瓜蛋白酶的产率、活性及应用性与其分离方法相关,指出今后需深入进行木瓜蛋白酶的亲和双水相萃取等新型分离方法的研究。     

PEG/Na_2SO_4双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠(Na2SO4)双水相体系对木瓜蛋白酶进行分离提取。考察各成相试剂及pH对木瓜蛋白酶活性的影响,研究体系中不同相对分子量PEG、硫酸钠和PEG的质量分数、pH、酶添加量等因素对木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的影响,采用响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件,并进行了实验室规模的放大。结果表明:Na2SO4的质量分数对分配行为的影响极显著,其次是PEG的质量分数,pH对分配行为的影响不显著。当两相体系中PEG的相对分子量为6000,质量分数为16.0%、Na2SO4质量分数为18.0%、pH7.0、酶添加量为1.0mg/g时,木瓜蛋白酶在两相体系中的分配系数最高可达3.1,可获得木瓜蛋白酶活性回收率82.6%。实验证明:响应面法优化双水相萃取木瓜蛋白酶的条件是可行的,可用于实际预测。     

双水相萃取法提取木瓜蛋白酶的研究

对以PEG(聚乙二醇)/(NH4)2SO4为双水相系统提取的木瓜蛋白酶进行了研究。实验考察了不同分子量PEG对木瓜蛋白酶活性的影响以及PEG浓度、(NH4)2SO4浓度、pH和温度对木瓜蛋白酶分配系数的影响。结果表明:双水相体系最佳条件为PEG60027%,(NH4)2SO421%,pH7·0和温度60℃。在上述条件下,木瓜蛋白酶的分配系数可达9·28。     

PEG/(NH4)2SO4双水相相平衡数据的关联及木瓜蛋白酶在该体系中分配模型的建立

为了研究木瓜蛋白酶在双水相中的分配行为,用浊点法测定了聚乙二醇(2000、4000、6000)/硫酸铵双水相体系在298.15K下的双节线和液液相平衡数据,采用Merchuk方程、Othmer-Tobisa方程和Bancroft方程对双节线数据、液液相平衡数据进行了关联,并建立了木瓜蛋白酶在PEG/(NH4)2SO4双水相体系中的分配模型。通过相关系数考察双水相各组分浓度与分配系数的相关度,得到分配系数的对数与上下相组分的浓度差相关度较高,提出了木瓜蛋白酶分配系数与双水相成相组分浓度差的经验关系式,木瓜蛋白酶分配系数的计算值与实验值之间的相对偏差小于10%且小于其他同类模型,表明实验建立的模型对木瓜蛋白酶在聚乙二醇(2000、4000、6000)/硫酸铵双水相体系中关联效果较好,可用于木瓜蛋白酶分配系数的计算,为双水相体系中木瓜蛋白酶酶活分配系数的工程计算和双水相萃取过程的设计提供参考。     

双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG/(NH4)2SO4双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH值、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等对果胶酶分配系数的影响,结果表明,双水相最佳提取条件为PEG1000 27%,(NH42)SO4 19%,NaCl 0.002%,pH 5.0,温度50℃,在此条件下果胶酶分配系数(K)可达14.0。     

PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG（聚乙二醇）／（NH4）2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究，考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响，结果表明：双水相最佳提取条件为PEG 100027％，（NH4）2SO419％，Na-Cl0．002％，pH5．0，温度50℃，在此条件果胶酶分配系数可达到14．0。     

双水相萃取法提取条斑紫菜R-藻红蛋白工艺

以条斑紫菜为原料,采用双水相萃取法对R-藻红蛋白进行提取,讨论不同工艺条件聚合物分子大小及质量分数、成相盐质量分数、离子强度对藻红蛋白的提取效果,通过正交试验确定藻红蛋白的最佳提取条件。结果表明当6%聚乙二醇4000、13%硫酸钠、1.5%氯化钠时,蛋白纯度可由粗液的0.187上升至0.727,是传统硫酸铵盐析法的2.25倍,说明双水相萃取法比硫酸铵盐析法更适合提取R-藻红蛋白。     

双水相萃取结合硼酸亲和吸附分离纯化辣根过氧化物酶

开发一种结合两步双水相萃取和亲和吸附分离的新型集成化方法,用于从辣根中分离和纯化辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP).首先,将两步双水相萃取工艺用于糖和色素的分离,然后将"多价"苯硼酸亲和磁性石墨烯复合材料(d-PBA-GO@Fe3O4@PEI)用作进一步吸附分离,实现从杂质蛋白中选择...     

双水相分离火龙果皮中色素和果胶

利用双水相系统同时分离火龙果皮中的天然红色素和果胶,提高火龙果皮资源的利用.以火龙果皮为原料,采用PEG/硫酸铵双水相体系分离火龙果皮中的色素和果胶.分析PEG相对分子质量、PEG质量分数、体系pH、硫酸盐质量分数4个因素对色素与果胶分离的影响.结果表明,随着双水相PEG和盐的质量分数增加,火龙果皮中的色素和果胶得率随...     

发酵液中3-羟基丁酮的乙醇-磷酸氢二钾双水相体系分离

微生物发酵法生产3-羟基丁酮亟待解决的一个问题是它的下游分离工艺的确定,双水相萃取技术作为一种高效而温和的分离技术,已经在有机物质的分离提取中得到了广泛的应用,本文开展了该双水相萃取技术分离发酵液中3-羟基丁酮的研究,考察了双水相体系的种类以及组成比例对3-羟基丁酮萃取的影响,确定最佳的双水相体系为无水乙醇/磷酸氢二钾,当无水乙醇的质量浓度为26%(m/m),磷酸氢二钾的质量浓度为25%(m/m),此时的3-羟基丁酮分配系数为16.81,回收率高达98.2%,放大操作表明该双水相体系的稳定性较好,体系规模的改变不会影响到3-羟基丁酮的分配系数和回收率,适用于大规模工业化生产,并且通过减压蒸馏和结晶得到了3-羟基丁酮二聚体产品,进一步验证了该工艺在3-羟基丁酮分离中的应用潜力。     

金银花叶中绿原酸的提取及抗氧化活性研究

本研究利用双水相体系分离金银花叶中的绿原酸并分析其抗氧化活性。探讨4种乙醇/无机盐双水相体系提取绿原酸的能力,在乙醇浓度、盐浓度、提取时间和温度4个单因素实验的基础上,通过响应面法研究NaH₂PO₄添加量、乙醇浓度和提取时间3因素及其交互作用对绿原酸提取率的影响。研究结果显示,4种乙醇/无机盐双水相体系中,乙醇/NaH₂PO₄双水相体系具有最佳的绿原酸提取效果。优化的提取工艺为NaH₂PO₄添加量3.15 g、乙醇浓度28.5%和提取时间49 min,提取率可达80.2%。当金银花叶绿原酸浓度为0.5 mg/mL时,其DPPH自由基清除率达84.2%;绿原酸浓度为1 mg/mL时,脂肪过氧化抑制能力达88%。这些研究结果表明乙醇/NaH₂PO₄双水相体系能有效提取金银花叶中的绿原酸,具有较好的应用前景。     

Albacore tuna (Thunnus alalunga) spleen trypsin partitioning in an aqueous two-phase system and its hydrolytic pattern on Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) shells

Partitioning behaviors of trypsin from the spleen of albacore tuna (Thunnus alalunga) in an aqueous two-phase system (ATPS) were investigated. Partitioning behaviors of proteins were influenced by polyethylene glycol (PEG) molecular mass and concentration, types and concentration of salts, NaCl concentration, and temperature. Trypsin was preferentially partitioned into the PEG-rich top phase. The best ATPS conditions for trypsin partitioning from albacore tuna spleen were 15% PEG 4000–15% NaH₂PO₄ at 40°C without the addition of NaCl, which increased the purity by 5.54-fold with the recovered activity of 71.92%. Based on SDS-PAGE, the enzyme after ATPS separation was near homogeneity and the result of SDS-substrate gel electrophoresis revealed that the band intensity of enzyme in ATPS fraction increased, indicating the enhanced specific activity of splenic extract. The study further investigated the effect of fractionated trypsin on the hydrolysis of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) shells. Electrophoretic study revealed that trypsin after ATPS separation was a potential enzyme for extraction of carotenoprotein from Pacific white shrimp shell waste. Therefore, ATPS was an effective method for purification and recovery of trypsin from the spleen of albacore tuna and it could be used as an alternative cheap proteinase for the extraction of carotenoprotein from shrimp shells.     

天花粉蛋白的盐析工艺和亲和双水相分离工艺

近年,随着天花粉蛋白(TCS)在抗癌细胞和HIV病毒方面的临床性研究进展,天花粉蛋白生产工艺也需在保证效益的前提下精细化。本实验利用硫酸铵分级沉淀、硫酸铵粗提后亲和双水相进一步纯化,得到精制的天花粉蛋白。并对提取工艺进行了优化,最后利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对其纯度进行了鉴定以及相对分子质量的测定,并对比了盐析法和亲和双水相分离法,研究结果表明:硫酸铵沉淀法最佳分离条件为固液比为1∶12、浸泡时间为24h、pH在5左右,最终得率0.8mg/g;亲和萃取最佳条件:染料CibacronBlue F3GA-吐温80在成相吐温80中的含量8%,成相吐温80的占双水相含量为4.0%,(NH4)2SO4的含量2.0mol/L,充分混合的时间9h,反萃取氯化钠的含量为0.5mol/L,反萃取的时间为8h,得率0.6mg/g,但凝胶电泳显示其纯度较高。     

浸提法提取、双水相体系纯化红花红色素及稳定性研究

对红花进行预处理后,用一定浓度的丙酮溶液提取红花红色素,将提取液加入无机盐形成双水相对红色素进行纯化。研究讨论了丙酮的浓度、提取时间、料液比对提取率的影响,并对产品稳定性进行试验。实验结果表明红色素的提取工艺为:50%的丙酮料液比1g:10mL室温下超声辅助提取60min,采用丙酮-硫酸铵双水相体系对红色素进行纯化2次,将上相中的丙酮挥发、离心得纯化产品,提取率为84.9%。稳定性试验结果表明,红花红色素对温度、光和部分金属离子敏感。