鹿茸和大豆蛋白酶解物3ku超滤组分的制备及其对小鼠脾细胞增殖影响的研究

以鹿茸水溶性蛋白和大豆分离蛋白为原料,采用模拟胃肠消化和碱性蛋白酶水解,根据游离氨基含量变化优化水解时间,制备鹿茸蛋白和大豆分离蛋白酶解物。通过超滤分离获得各酶解物分子量3ku的组分:鹿茸蛋白模拟胃肠消化物组分(VAWP-SGD)、鹿茸蛋白碱性蛋白酶解物组分(VAWP-APH)、大豆分离蛋白模拟胃肠消化物组分(SPI-SGD)、大豆分离蛋白碱性蛋白酶解物组分(SPI-APH),探究各组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明:模拟胃肠消化时间为胃蛋白酶2h+胰酶5h;碱性蛋白酶水解时间4h。在无诱导剂时,VAWP-SGD和SPI-SGD对小鼠脾细胞增殖均有显著促进作用(≥100μg/m L)。VAWP-SGD对Con A诱导的小鼠脾T细胞增殖促进作用最显著,其次是VAWP-APH,SPI-APH无明显作用,SPI-SGD对脾细胞增殖有轻微抑制作用。VAWP-SGD对LPS诱导的小鼠脾B细胞增殖促进作用最强,其次是VAWP-APH,SPI-APH及SPI-SGD。综上,VAWP-SGD对小鼠脾细胞增殖影响最大,对进一步开发鹿茸产品和免疫活性肽具有重要意义。     

酶解大豆蛋白工艺及其对面团流变特性的影响

采用响应面优化中性蛋白酶酶解大豆分离蛋白工艺条件,确定了最佳水解条件为加酶量6%、水解时间6 h、底物浓度3.7%、温度42℃、pH 7.0,得到水解度为7.74%。酶解得到水解度为3.1%、4.4%、5.2%、6.2%、7.4%的五种样品,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳来分析其分子量的变化规律。在小麦粉中分别添加2%的大豆分离蛋白和酶解样品,通过粉质仪和拉伸仪研究其对面团流变学特性的影响。结果表明,大豆分离蛋白酶解后产生两条新的肽段,其分子量约为30.5ku和26.4 ku;添加大豆分离蛋白的面团吸水率、稳定时间、面团拉伸能量、拉伸阻力、拉伸比例均有所增大;而添加酶解样品则均有所降低,并随着水解度的增加其对面团流变特性的破坏越严重。     

蛋白酶水解大豆分离蛋白的分子水平表征

采用两种蛋白酶(胃蛋白酶和碱性蛋白酶)对大豆分离蛋白进行水解,水解结束调节pH至4.8,离心分离得到酸可溶蛋白和酸不可溶蛋白.考察不同的蛋白酶、水解时间、温度以及未添加蛋白酶的情况下,酸不可溶蛋白所占比例,并采用SE-HPLC和SDS-PAGE对这些酶解物进行了分子水平的表征.结果发现:胃蛋白酶选择性地水解大豆球蛋白(11S),在pH 2.0、37℃条件下水解6h,酸不可溶蛋白所占比例为51.14％,其相对分子质量大于10 kDa的部分占到50％以上.水解温度对碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响较大,在pH 8.0、60℃条件下水解1h获得的大豆分离蛋白碱性蛋白酶酶解物的相对分子质量主要分布在20 kDa以下.不同蛋白酶水解大豆分离蛋白,其水解进程存在显著差异,即使是采用同一种蛋白酶进行水解,不同的水解条件下得到的酶解物分子结构也大不相同.     

乳清蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究在不同的酶种类、[E/S]、酶解时间下,乳清蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,在胃蛋白酶37℃,[E/S]为0.15%,水解温度水解时间2 h;胰蛋白酶[E/S]为0.4%,水解温度50℃,水解时间2 h的条件下,乳清蛋白的酶解物有较强的抗氧化活性。     

响应面优化转谷氨酰胺酶改善大豆分离蛋白酶解液乳化稳定性的研究

实验以大豆分离蛋白为原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用截留分子量为20ku与6ku的中空纤维膜组件对大豆分离蛋白酶解液进行超滤,然后利用转谷氨酰胺酶分别对分子量20ku、6~20ku以及6ku的大豆分离蛋白酶解液进行交联。经比较得到:分子量20ku的大豆分离蛋白酶解液的乳化稳定性上升最为明显,为16.1。采用响应面实验设计,以分子量20ku的大豆分离蛋白酶解液为研究对象,以反应时间、反应温度、酶添加量及p H为实验因素,乳化稳定性为响应值,获得最佳交联条件为:反应时间1.2h、酶添加量20.6U/g、p H=7.5、反应温度40℃,在此条件下,其乳化性为0.696,较改性前略有降低,但其乳化稳定性为16.25,较改性前提高了33.20%。     

大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析

建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。     

变性脱脂豆粕酶解物的特性研究

为探讨变性脱脂豆粕在胰蛋白酶作用下的水解特性及酶解物的特性,选用国产胰蛋白酶为水解酶对变性豆粕进行水解。研究了变性豆粕中多肽溶出率随温度、pH值、时间、底物浓度及酶用量的变化规律。用正交实验法找出水解变性豆粕的最佳实验条件,并对脱脂豆粕酶解物的性质进行初步研究。结果表明:胰蛋白酶水解变性豆粕的最佳条件为:温度50℃、时间6h、底物质量分数5%、用酶量10000U/g、pH值8.0。在最佳酶解条件下的多肽溶出率为69.34%。脱脂豆粕蛋白酶解物的溶解度比大豆分离蛋白有很大提高,粘度明显低于大豆分离蛋白。此外脱脂豆粕蛋白酶解物有一定的乳化性和乳化稳定性。     

还原前后大豆球蛋白酶解物的性质

主要研究了还原前后大豆球蛋白不同酶解物的抗氧化特性,首先制备了不同的大豆球蛋白酶解物,然后对酶解物进行了表征(巯基含量、水解度、分子量等),并研究了还原前后不同酶解物的抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、铁还原能力及二价铁螯合能力)以及抗氧化活性与巯基含量的关系,结果表明还原后的大豆球蛋白具有较好的酶解特性,还原后酶解物具有较高的巯基含量和抗氧化活性,还原后酶解物的DPPH自由基清除能力和铁还原能力与巯基含量具有显著相关性,二价铁螯合能力与巯基含量也呈现一定的相关性。     

高浓大豆分离蛋白酶解制备鲜味基料的研究

首次研究了预处理对高浓大豆蛋白酶解产物蛋白水解度和蛋白回收率测定方法的影响,并通过酶种类、pH、温度和加酶量单因素试验和感官评价,对高浓大豆分离蛋白酶解工艺进行优化。研究结果表明:在高浓蛋白酶解体系中,水解度测定采用不离心直接测酶解物的预处理方法,蛋白回收率测定采用稀释离心的预处理方法较能反映真实水解效果。高浓蛋白酶解体系中离心处理会导致水解度显著降低,且固形物浓度越高,离心预处理造成的误差越大。利用酸性蛋白酶(PR23)酶解高浓大豆分离蛋白,当pH为3.0,温度为55℃,加酶量为1%的条件下,酶解8h,水解度和蛋白回收率分别达到13.08%和51.13%,以0.1%高浓蛋白酶解物与0.3%食盐进行调配时,能获得鲜味和综合感官评分较佳的产物。     

响应面优化南极磷虾蛋白酶解工艺及蛋白肽组分分析

以南极磷虾蛋白酶解液中的氨基氮含量为指标,采用甲醛电位滴定法测定胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶6种生物酶在其最适酶解条件下对南极磷虾蛋白酶解效果,筛选出酶解南极磷虾蛋白最佳生物酶。在单因素试验基础上,以酶解液中氨基氮含量为响应值,选择酶解温度、时间、pH为自变量,通过三因素三水平Box-Bohnken响应面分析法对筛选出来的生物酶解工艺进行优化。在优化酶解工艺的基础上,利用SDS-PAGE凝胶电泳方法分析南极磷虾酶解蛋白肽及南极磷虾蛋白的分子量分布范围。结果表明:胰蛋白酶为酶解南极磷虾蛋白的理想蛋白酶;响应面分析法建立二次多项回归方程:Y=51.07-0.83A+1.72B-2.06C+0.25AC+1.15BC-3.06A2-2.77B2-3.69C2,模型p0.0001,而失拟项p0.05,表明模型极显著且比较稳定,通过模型分析得最佳条件:酶解温度44.48℃、酶解时间8.52 h、pH 7.88,考虑实际应用可行性,我们在酶解温度45.0℃、酶解时间8.5 h,pH 7.9条件下实验得到的氨基氮含量为50.96±1.07mg/g,与理论预测值51.57mg/g基本一致。通过电泳分析得到南极磷虾蛋白分子量范围在15 ku以上,主要集中分子量范围为15 ku～45 ku;胰蛋白酶解多肽分子量在25 ku以下,主要分子量分布在5 ku以下。     

酶水解大豆蛋白物理化学性质的综合表征

大豆分离蛋白分别用AS1.398中性蛋白酶和黑曲霉3.4310酸性蛋白酶在不同条件下水解后,测定其水解度(DH)、三氯乙酸(TCA)溶解度、等电点(IP)溶解度,以及不同分子量区段的相对含量等13个参数.通过主成分分析将这些参数线性组合为4个主成分,但是中性蛋白酶和酸性蛋白酶水解产物参数在主成分中的组合方式不同.以主成分为指标对全体样品进行聚类分析时,两种酶水解产物各自聚为一类;中性蛋白酶和酸性蛋白酶的水解产物单独进行聚类分析则分别得到5个和4个子类,其中包括水解条件差别较大的水解产物,说明水解工艺参数之间存在某种协同或互补效应.     

大豆蛋白酶法水解产物抗氧化活性的研究

人豆蛋白水解产物具有很强的抗氧化性质,山于人豆种植面积广、价格低廉,满足了人们崇尚天然、安全食品的需求,凶此_JF发抗氧化人豆肽具有较好的经济价值和社会意义。该文以人豆分离蛋白为原料,进行了人人豆蛋白酶觯工艺参数的优化研究,在此基础上,研究了人豆肽的分了最分布变化和人豆肽的抗氧化特性。探索人豆制备抗氧化肽的途径。     

水解度对牡蛎酶解液特性的影响

利用胰蛋白酶限制性酶解牡蛎肉,研究水解度(degree of hydrolysis,DH)对牡蛎酶解液的感官评分、肽分子量分布和游离氨基酸组成的影响。实验结果表明,随着水解度的增大,牡蛎酶解液的鲜味、酸味和甜味先增加后降低,而咸味和苦味则一直增加;分子量>10 kDa和5~10 kDa肽比例逐渐减少,3~5 kDa肽比例先增加后减少,1~3 kDa和<1 kDa肽比例逐渐增大。<1 kDa和1~3 kDa肽比例最高的是DH62.02%酶解液。6种水解度牡蛎酶解液中各游离氨基酸含量、游离氨基酸总量、必需氨基酸含量随着水解度的增大而升高。鲜味氨基酸、甜味氨基酸和苦味氨基酸含量均随着水解度的增大而增加,芳香族氨基酸含量先增加后降低。随着水解度的增大,6种酶解液中TAV>1的氨基酸数量逐渐增多。6种水解度牡蛎酶解液中谷氨酸TAV值均大于1,且随着水解度的增大TAV值逐渐增大。     

大豆蛋白的酶水解产物研究

大豆蛋白含有多种蛋白成分,其酶水解物非常复杂.为探索其中规律,采用Protamex酶对大豆蛋白进行有限水解,测定了水解液中氨基氮含量、三氯乙酸中可溶性氮含量随水解度的变化曲线,并采用凝胶层析过滤色谱分析了不同水解时间水解物分子量的变化,发现大豆分离蛋白中存在一些Protamex不容易水解成分,大豆分离蛋白的Protamex水解过程是一个不均匀的过程.     

Effects of soy protein hydrolysates on the growth and fermentation performances of brewer's yeast

Soy protein isolate was hydrolysed with Alcalase, Papain, Flavorzyme and Protemax, respectively, and further fractioned by ultrafiltration. The resulting soy protein hydrolysates (SPH) and their ultrafiltration fractions were used to examine their effects on the growth and fermentation performances of brewer's yeast. Results showed that degree of hydrolysis, molecular weight distribution and amino acid composition of SPH significantly affected the growth, viability and fermentation performance of brewer's yeast. The SPH prepared from different proteolytic enzymes exhibited distinct growth‐ and fermentation‐promoting activity for brewer's yeast. The SPH treated with Protemax for 9 h and with the molecular weight below 3 kDa showed the highest growth‐promoting activity and induced more rapidly reducing sugar consumption and higher ethanol production. The relatively lower molecular weight and the hydrophilic and electropositive amino acid residues (Lys, His, Arg and Ile) in SPH might be responsible for its functionality, promoting the growth and fermentation of brewer's yeast.     

几种蛋白酶对文蛤肉的水解效果

在一定的酶解条件下,用Alcalase 2.4L、胰蛋白酶、复合风味酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶等几种蛋白酶对文蛤内进行水解,测定了这几种蛋白酶的水解度,以及其水解物的氨基态氮含量、可溶性蛋白含量和透明度,并用凝胶过滤色谱(Sephedex G-25)对水解物的分子质量分布进行了粗略分析。结果表明,Alcalase水解物分子质量的分布范围较广,适合制备具有一定肽链要求的短肽,酸性蛋白酶水解物分子质量较小,适合制备文蛤调味品,中性蛋白酶水解物分子质量主要集中在1 000 u左右与10 000u左右,胰蛋白酶和复合风味酶的水解物分子质量大部分在1 500 u以上。     

Effects of Enzyme Modified Soy Protein on Rennet-Induced Reconstituted Nonfat Dry Milk Coagulum Properties

Soy protein was hydrolyzed by trypsin, pepsin and α-chymotrypsin. Effects of adding hydrolyzed soy protein on rennet-induced nonfat milk coagulum texture and syneresis were studied. Pepsin-modified soy protein increased coagulum firmness and syneresis greater than untreated soy protein. Soy protein hydrolyzed with trypsin for 150 min and added to nonfat milk increased coagulum firmness greater than nonfat milk with no soy protein added. Chymotrypsin-modified soy protein acted similarly to the trypsin modified soy protein except the coagulum firmness was less than nonfat milk alone. Soy protein hydrolyzed by trypsin followed by pepsin increased coagulum firmness more than hydrolysis by a single enzyme and was close to nonfat milk without soy protein.     

Enzymatic hydrolysis of soy proteins and the hydrolysates utilisation

Soy proteins are very important protein source for human being and livestock. Enzymatic hydrolysis of soy protein can enhance or reduce its functional properties and improve its nutritious value. Soy protein hydrolysates were primarily used as functional food ingredients, flavour and nutritious enhancers, protein substitute, and clinical products. Conditions for hydrolysis were usually mild, whereas recently high pressure treatment attracted more interest. Degree of hydrolysis (DH) was usually between 1% and 39.5%. The main problem associated with proteolytic hydrolysis of soy protein was production of bitter taste, hydrolysates coagulation and high cost of enzymes. Bitterness reduction can be achieved by control of DH, selective separation of bitter peptides from hydrolysates, treatment of hydrolysates with exo‐peptidases, addition of various components [adenosine monophosphate (AMP), some amino acids, monosodium glutamate (MSG), etc.] to block or mask the bitter taste, and modification of taste signalling. Hydrolysates coagulation can be resolved by selecting appropriate enzymes and by applying immobilisation technology the production cost can be reduced. Enzymatic hydrolysis also enhances bioactivity of soy proteins through conversion of glycosides to aglycones, increasing antioxidant and immunoregulatory properties. Finally, future works have been discussed.     

THERMAL BEHAVIOR, SOLUBILITY AND STRUCTURAL PROPERTIES OF SOY CONCENTRATE HYDROLYZED BY NEW PLANT PROTEASES

A soy concentrate prepared by alcoholic extraction of defatted soy flour was hydrolyzed with three plant proteases: hieronymin and macrodontin, cysteine proteases, and pomiferin, a serine protease. A commercial microbial protease (alcalase) was included for comparative purposes. Working at optimal conditions for each enzyme, 5–15% degree of hydrolysis (DH) values were obtained. Hydrolysates exhibited a characteristic SDS-PAGE pattern: the plant proteases attacked the polypeptides of 7S and 11S proteins with different intensity and selectivity, especially the A and B polypeptides of the 11S protein. Intermediate molecular weight peptides (24 and 60 kDa) were produced as the hydrolysis progressed. Differential Scanning Calorimetry (DSC) thermograms of flour. concentrate and hydrolysates were analyzed to evaluate the thermal stability and denaturation enthalpies of the major proteins. An increase in the degree of protein denaturation resulting from enzymatic action and a lower thermal stability at low pH were detected. The surface hydrophobicity of all hydrolysates, unlike expected, did not increase. Solubility at pH 7.0 is closely related to the DH, independent of the protease used. Solubility at pH 4.5 appeared to be related to the extent of hydrolysis of polypeptide A by each protease.     

高乳化特性大米蛋白酶解产物的结构与性能研究

为了探究大米蛋白酶解产物中乳化性较好的关键组分,采用酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶限制性酶解大米蛋白,分析表面疏水性、二级结构、乳化活性及乳液稳定性以探究不同酶解产物结构特性和乳化特性的关系;筛选最优乳化特性样品后对其超滤分离得到<5 kDa、5~10 kDa和>10 kDa组分,通过界面张力、耗散型石英晶体微天平、粒径、微观结构及贮藏稳定性等指标,探究不同分子量肽的界面特性和乳液稳定性的关系。结果表明,胰蛋白酶酶解产物的得率最高;与大米蛋白相比,除水解度为6%的胰蛋白酶酶解产物外,其他酶解产物的表面疏水性均降低;酶解后β-折叠显著降低,蛋白结构更加舒展;胰2%具有较好的乳化性能;<5 kDa制备的乳液稳定性最差,贮存7 d后粒径由2.59 μm增加到7.82 μm;而>10 kDa组分界面张力较小,界面层较厚,具有较好的乳液贮藏稳定性,表明分子量较大的肽更能有效地稳定乳液。