Characterisation of vitamin B12 immunoaffinity columns and method development for determination of vitamin B12 in a range of foods,juices and pharmaceutical products using immunoaffinity clean-up and high performance liquid chromatography with UV detection

New rapid and simpler procedures, using immunoaffinity columns, have been developed for the determination of vitamin B12 in a range of samples including three different US National Institute of Standard and Technology (NIST) Reference Materials, infant formula, powdered energy drinks and bars, wheat breakfast cereal, carbonated soft drinks, fruit juices and vitamin B12 tablets. The procedures involved extraction of vitamin B12 using water or sodium acetate buffer and enzyme digestion (using pepsin or α-amylase, or both) if necessary. The extract was clarified and passed through “EASI-EXTRACT® Vitamin B12”, an immunoaffinity column containing monoclonal antibody with high affinity and specificity to vitamin B12. Subsequently, the vitamin B12 immunoaffinity column was washed with 10 ml water and the vitamin B12 was released from the column with 3 ml methanol. Following evaporation, the samples were reconstituted in mobile phase and analysed by HPLC–UV at 361 nm on an ACE 3AQ analytical column using a gradient elution consisting of 0.025% trifluoroacetic acid in water and acetonitrile. Analysis of three types of NIST Standard Reference Materials in triplicate demonstrated the results of the immunoaffinity column method were comparable to microbiological assay results. Method repeatability was determined for all samples analysed and ranged between 0.8 and 10%, demonstrating the method was repeatable with complex matrices (NIST 2383) containing low levels of vitamin B12 (0.44 μg per 100 g), as well as simpler matrices, such as vitamin tablets containing high levels (2000 μg per 0.849 g) of vitamin B12.     

微孔板法检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量

目的 建立用微孔板检测婴幼儿配方乳粉中维生素B12的方法。方法 基于微生物原理的检测方法, 缩小样品的培养体积。样品经提取后, 分装到96孔细胞培养板中, 在培养基中加入0.05%的菌悬液, 混匀后分配到含有样品和标准品的微孔中, 培养后直接用酶标仪测定吸光度值。结果 本方法标准曲线相关系数0.9987, 加标回收实验回收率在92.7%~98.7%之间, 重复性实验相对标准偏差在1.03%~1.73%之间, 6种不同含量的样品同时用GB 5413.14-2010方法和本方法检测维生素B12, 检测结果无显著性差异。结论 该方法快速, 操作简单, 稳定性高, 检测成本低, 可大批量样品同时检测, 适合测定婴幼儿配方乳粉中维生素B12的含量。     

SPR技术对奶粉中维生素B12检测方法的建立

目的 利用表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)技术, 建立快速定量测定牛奶中维生素B12的方法。方法 将钴胺素共价偶联到表面等离子共振芯片CM5表面, 并对竞争结合的维生素B12结合蛋白的结合浓度及芯片的再生条件进行优化, 检测芯片的稳定性。在无抗生素牛奶中添加系列质量浓度的维生素B12, 利用免疫竞争抑制原理构建标准曲线, 并对市售10个奶粉样品进行检测。结果 制备的芯片稳定, 50个循环相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小于10%。日间批内同一样品差异为0.54%, 该方法的检测限为0.006 μg/100 g, 回收率为92.1%~104.1%。测得的10个牛奶产品中维生素B12含量与对应商品标签值全部在标准规定的范围内。结论 所建立的方法可以在6 h内完成样品的前处理和检测, 是一种简便、快捷的定量检测方法。     

高效液相色谱法测定婴儿奶粉中维生素B12

建立了奶粉中维生素B12的反相高效液相色谱的测定方法,奶粉经去蛋白质-糖分-超声提取-富集浓缩超滤后进高效液相色谱仪,采用C18色谱柱,水-乙腈流动相体系,梯度洗脱能够快速有效地分离奶粉中的维生素B12.线性范围为0.010μg/mL～10μg/mL,相关系数为0.9998,检出限为0.1 μg/100g,加标回收率为78.8％～84.0％.该方法适用于实际样品的测定,速度快、成本低,结果令人满意.     

微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B12含量的不确定度评定

目的建立微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B₁₂含量的不确定评定方法。方法依据JJF1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》及GB 5413.14—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B₁₂的测定》分析微生物法测定婴幼儿乳粉中维生素B₁₂含量过程中产生的各测量不确定度分量,计算测量结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。结果当样品中维生素B₁₂含量为3.97μg/100 g时,其扩展不确定度为0.53μg/100 g(k=2)。结论标准溶液配制和标准曲线拟合计算待测溶液含量产生的不确定度对检测结果影响较大。     

利用甘蔗糖蜜生产维生素B12发酵条件

以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产维生素B12,通过单因素试验确定的培养条件为接种量20％,种龄48h,装液量75／300ml三角瓶,培养基初始pH值6．8,30％静止发酵,周期为96h,维生素B12的产量为2．86mg／g。     

微生物法测定发酵食品中维生素B12含量的研究

为明确发酵食品中维生素B12的含量及分布,利用微生物法对大豆发酵食品（3种类型腐乳、韩国大酱、纳豆、豆汁）及奶酪中维生素B12的含量进行了测定。结果表明,在3种腐乳中,臭腐乳维生素B12含量最高,达到（3.57±1.08） μg/100 g,红腐乳和白腐乳分别为（0.48±0.21） μg/100 g和（0.41±0.16） μg/100 g;除腐乳外,纳豆（0.50 μg/100 g、0.20 μg/100 g）、韩国大酱（0.97 μg/100 g、0.10 μg/100 g）、豆汁（熟）（0.52 μg/100 g）的维生素B12含量均低于臭腐乳。虽然个别奶酪样品中维生素B12含量最高可达1.54 μg/100 g,但其总体维生素B12的分布及含量也均低于臭腐乳。     

Comparative effect of low levels of dietary cobalt and parenteral injection of vitamin B(12) on carcass and meat quality characteristics in Omani goats

The effect of low levels of dietary cobalt (Co) on carcass and meat quality characteristics were investigated in 36 male goats of three different Omani breeds namely Batina, Dhofari and Jabal Akdhar. Goats were randomly divided into two groups at 10 weeks of age, control (18 animals) and treated (18 animals). Goats from both groups were fed Rhodesgrass hay and a commercially prepared diet containing 0.10 and 0.12 mg Co/kg DM, respectively from 10 to 46 weeks of age. Animals in the treated group were supplemented with subcutaneous injections of 2000 μg of hydroxocobalamin (vitamin B₁₂) on week 10 and thereafter for 46 weeks at 8-week intervals. At 46 weeks of age, the animals were slaughtered and their carcass and meat quality characteristics compared. Serum vitamin B₁₂ levels were significantly higher in goats from the treated group from week 16 till the end of the experiment. The final live and carcass weights were significantly higher (P<0.05) for the treated Batina group by 13.4 and 8.3% compared with the control group, respectively. Shoulder, rack, loin and leg cut weights were also significantly higher (P<0.05) for the Batina treated group compared with the control group by 14.7, 16.8, 12.8 and 13.1%, respectively. Carcass length, leg length, width behind shoulder, maximum shoulder width and longissimus muscle area were significantly higher (P<0.05) for the Batina treated breed than for the control group by 6.7, 5.8, 10.1, 10.1 and 28.5%, respectively. Four muscles (Mm. longissimus dorsi, biceps femoris, semimembranosus, and semitendinosus) from treated and control groups were evaluated for ultimate pH, expressed juice, cooking loss%, colour (L*, a* and b*), and Warner–Bratzler shear force values. There were significant treatment effects on these muscle quality characteristics for the Batina breed only. Muscles from the treated group showed significantly lower (P<0.05) shear force values of between 15 and 27% than those from the control group. Moreover, the treated Batina goats tended to have significantly lower (P<0.05) ultimate pH, expressed juice, L* and higher a* values than those from the control group for longissimus dorsi and biceps femoris muscles only.     

微生物法测定肠内营养粉剂中微量维生素 B12的含量

目的建立微生物法测定肠内营养粉剂中微量维生素B_(12)的含量。方法以莱士曼氏乳酸杆菌为实验菌,在测定用培养基中供给除维生素B_(12)以外的所有营养成分,(36±1)℃培养19~20 h,采用比浊法测定。结果维生素B_(12)在0.001~0.010 ng/mL浓度范围内线性关系良好,肠内营养粉剂中维生素B_(12)的含量为2.9μg/100 g。结论该方法检测结果准确、可靠,适用于肠内营养粉剂中微量维生素B_(12)的含量测定。     

液相色谱-串联质谱法测定咀嚼片中B12含量

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定多种维生素咀嚼片(儿童型)中维生素B12的分析方法,为维生素B12及其制剂的含量测定提供参考。方法样品中的维生素B12用10 mmol/L乙酸铵超声提取,三氯甲烷沉淀蛋白质,以10 mmol/L乙酸铵-甲醇作为流动相经SUPELCO DiscoveryHS C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)梯度洗脱分离,流速0.6 m L/min,采用LC-MS/MS在正离子模式下检测,外标法定量。结果 LC-MS/MS法在30~150 ng/m L范围内,维生素B12的浓度和峰面积的线性良好,相关系数r=0.993,精密度为2.4%,在不同的添加水平下,方法的回收率85.9%~95.7%,检出限为5 ng/g。结论液相色谱-串联质谱法简单快速、灵敏度高、准确性强,适用于保健食品中维生素B12的分析。     

高效液相色谱法快速测定多维片中的维生素B12

目的建立高效液相色谱法快速测定多种维生素片中的维牛素B_(12)含量。方法样品用水作为溶剂经超声波提取,以0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=2.5)和乙腈作为流动相采用高效液相色谱法测定,以外标法定量。结果本研究将检测波长改为546 nm,可减少多维片中其他组分的干扰。维生素B_(12)在0.5~10 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999),在1、2和5 mg/L的添加水平下测得回收率分别为98.1%、97.2%和99.0%(n=6),相对标准偏差分别为3.6%、2.0%和4.6%,方法检出限为0.2 mg/L,定量限为0.5 mg/L。结论该方法快速、简便、准确且干扰少,可适合于多种维生素片中维生素B_(12)的定量分析。     

高效液相色谱法检测婴幼儿配方食品中维生素B12的含量

目的 建立高效液相色谱法快速检测婴幼儿配方食品中维生素B12的分析方法.方法 选择C18柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm)作为色谱柱,流动相为水+甲醇,流速0.5 mL/min等度洗脱,进样量35μL,柱温40℃,波长361 nm,样品经超声提取15 min,后在8000 r/min下冷冻离心10 min,离...     

高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的维生素B1、维生素B2

目的建立高效液相色谱法快速测定婴幼儿配方乳粉中的维生素B1、B2的含量。方法样品进行前处理后,采用Waters Xbridge C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)进行分离。以0.05 mol/L乙酸钠溶液-甲醇为流动相等度洗脱,柱温为30℃,流速为1 mL/min,荧光检测器进行检测,外标法定量。结果在优化的实验条件下,维生素B1、维生素B2可以有效分离,线性范围为0.05～1.00μg/mL,相关系数均大于0.999。维生素B1的加标回收率为87.4%～99.1%,相对标准偏差为1.2%～3.06%,检出限为0.03 mg/100 g;维生素B2的加标回收率为90.6%～97.8%,相对标准偏差为0.97%～3.44%,检出限为0.02 mg/100 g。结论此方法简单、快捷、高效,适用于婴幼儿配方乳粉中维生素B1、维生素B2的测定。     

培养基质量控制对维生素B12含量测定的影响

目的 探究维生素检测培养基质量和配方对维生素B12含量测定的影响.方法 比较不同配方菌株活化培养基、种子液制备肉汤培养基、不同品牌测定培养基对维生素B12结果测定的影响.利用莱士曼氏乳杆菌对维生素B12的特异性和灵敏性,定量测定质控样品1849A中维生素B12的含量,并通过质量控制措施对测定结果进行分析评价.结果 检测...     

偏重亚硫酸钠对微生物法测定维生素B12含量的影响

摘 要: 目的 探究偏重亚硫酸钠对微生物法测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12(VB12)含量的影响。方法 通过在标准工作液和样品待测液中添加质量浓度梯度为0、0.0025、0.005、0.02、0.08和0.16 mg/mL偏重亚硫酸钠, 测定不同处理组实验样品中VB12含量值并对质控样品进行质控结果分析, 研究偏重亚硫酸钠对莱士曼氏乳杆菌生长的促进作用及其对原生VB12提取的影响。结果 在标准溶液中添加质量浓度为0~0.16 mg/mL的偏重亚硫酸钠都可以促进莱士曼氏乳杆菌的生长。偏重亚硫酸钠能促进样品中原生VB12的提取。偏重亚硫酸钠终浓度在0~0.16 mg/mL的范围内都不会抑制莱士曼氏乳杆菌的生长, 同时在0~0.05 mg/mL的范围内, 随偏重亚硫酸钠质量浓度增加, 原生VB12的提取会成比例增加。结论 偏重亚硫酸钠在0~0.16 mg/mL浓度范围内可以促进莱士曼氏乳杆菌的生长, 提高食品原生VB12的提取率, 进而增加检测结果的稳定性和准确度。     

固相萃取-高效液相色谱法测定饼干中的维生素B12

目的建立固相萃取-高效液相色谱法测定饼干中维生素B12的分析方法。方法样品中的维生素B12用0.1mol/L乙酸钠溶液(pH=4.5)提取,二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(N-vinylpyrrolidonecopolymer)HLB固相萃取柱净化, 10%的乙腈水溶液定容后用高效液相色谱仪测定。结果维生素B12含量在0.5～10 mg/L线性关系良好,线性相关系数r=0.9999,检出限为0.1 mg/kg。在精密度实验中,相对标准偏差为0.74%～3.75%,在0.3、0.8、1.7mg/kg的添加水平下,加标回收率为93.9%～99.4%。结论该方法准确、高效,适合饼干中维生素B12的测定。     

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B12的研究

目的建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B_(12)的含量。方法以Tris缓冲液稀释样品,加入冻干的莱士曼氏乳酸杆菌测试菌球,采用Costar 3599细胞培养板培养,使用酶标仪测定结果。采用本法同时检测了47批次婴幼儿乳粉和12批次功能饮料中维生素B_(12)的含量。结果本试剂盒方法回收率为89.9~110.2%,定量检测限为0.01 ng/g(mL),日间精密度为9.0%,日内精密度为5.8%。采用试剂盒方法与GB5413.14-2010试管法同时检测47批次婴幼儿乳粉中维生素B_(12)的含量,检测结果无显著性差异,乳粉的合格率为80.9%。检测功能性饮料12批次,合格率为33.3%。结论该方法操作简单,灵敏度高,重现性好,可用于测定婴幼儿乳粉及功能性饮料中维生素B_(12)的含量。     

维生素B12的研究进展

本文对维生素B12的吸收与代谢、缺乏原因及疾病、营养水平鉴定、人群维生素B12营养状况、食物强化的研究进展进行了综述,以期提高对维生素B12的认识和重视、为解决维生素B12缺乏人群的健康问题提供参考。     

无机氮源对脱氮假单胞杆菌产维生素B12代谢过程的影响

通过摇瓶培养的方式研究了无机氮源对脱氮假单胞杆菌发酵产维生素B12的代谢调控作用。首先考察了硫酸铵、硝酸铵、硝酸钠、磷酸氢二铵和氯化铵等5种不同无机氮源对脱氮假单胞杆菌代谢过程的影响。结果表明,硫酸铵是维生素B12发酵较为适宜的无机氮源;在此基础上进一步研究了NH4+浓度对脱氮假单胞杆菌发酵过程的影响,结果发现高浓度的NH4+能明显促进菌体的生长,但是会对维生素B12的合成产生一定的负作用;基于此,提出了脱氮假单胞杆菌摇瓶发酵过程的NH4+限制性补加策略,以克服NH4+在菌体生长与维生素B12合成上的矛盾。