螺旋藻多糖提取新工艺的研究

采用双酶法提取螺旋藻多糖,脱蛋白效果接近100% .通过DEAE-Sepharose和Sephadex-G50纯化粗多糖,得到2个多糖组分.经测定组分1的单糖组成为D-葡葡糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸;组分2的单糖组成为:D-葡萄糖、D-甘露糖、L -鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸.     

南海鸢乌贼墨汁多糖分离纯化及组分分析

目的:从南海鸢乌贼墨汁中分离纯化多糖,并分析其多糖组分。方法:利用水提醇沉法得粗多糖,通过固相萃取层析法除色素对多糖进行纯化,纯化多糖依次经DEAE-52离子交换柱、Sephacryl HR-300凝胶柱分级纯化,按峰收集得单一组分,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)衍生化方法,通过超高效液相色谱分析多糖组分。结果:粗多糖经DEAE-52离子交换柱、Sephacryl HR-300凝胶柱后收集得到3个糖组分,分别为SIP1、SIP2、SIP3;通过PMP衍生化方法分析单糖组成,得:SIP1是由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖3种单糖缩合而成;SIP2和SIP3分别是由D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖及L-(-)-岩藻糖5种单糖按照不同比例缩合而成。     

红曲霉菌胞外多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性测定

目的:分离纯化红曲霉菌胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS),测定各组分的抗氧化活性并对其结构进行初步表征。方法:红曲霉菌发酵液经乙醇沉淀获得胞外多糖,经精制除杂和DEAE-纤维素柱层析法分离纯化获得多糖组分,再分别用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)、柱前衍生PMP-HPLC法测定相对分子质量(Mw)和单糖组成,测定多糖组分清除DPPH和羟自由基的能力,评价其体外抗氧化活性。结果:EPS经分离得到三个组分EPS-1、EPS-2和EPS-3,相对分子质量分别为8673、143537、238742 Da。EPS-1、EPS-2均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1∶0.301∶2.052∶3.614和1∶2.475∶1.950∶1.532,EPS-3由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1∶0.401∶0.066∶0.307∶2.974。三个多糖组分对DPPH·和羟自由基均有清除能力,并与多糖浓度呈现正相关。当多糖浓度为1 mg/m L时,三个组分对DPPH清除率分别为16.4%、15.9%和14.8%;对清除羟自由基的清除率分别为40.4%、39.6%、63.8%。结论:红曲霉菌胞外多糖各组分的相对分子质量和单糖组成比例均有差异;对羟自由基、DPPH·的清除作用也存在差异,这种活性差异可能与各组分Mw及结构差异相关。     

PMP柱前衍生化HPLC法测定黄秋葵多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立同时测定黄秋葵多糖中8?种单糖组分的方法。采用InfinityLab Poroahell C18色谱柱为固定相,流动相为磷酸盐缓冲液（0.1?mol/L,pH?6.85）-乙腈（82∶18,V/V）,流速为1.0?mL/min,柱温25?℃,紫外检测器,波长250?nm。各单糖组分的线性范围较宽,相关系数均大于0.999,检出限为0.13～0.45?mg/kg,定量限为0.43～1.49?mg/kg,相对标准偏差小于5%,加标回收率为94.51%～106.44%。方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于黄秋葵多糖的单糖组分分析。同时测定从黄秋葵中顺序提取的热水浸提物（hot buffer soluble solution,HBSS）、螯合剂浸提物（chelating agent soluble solution,CHSS）和碱提物（dilute alkaline soluble solution,DASS）的单糖组成,确定其单糖组分的物质的量比。HBSS中,甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=0.1∶7.0∶0.4∶5.8∶0.9∶14.6∶1.5;CHSS中,鼠李糖∶半乳糖醛酸∶半乳糖∶阿拉伯糖=4.7∶61.8∶9.6∶5.3;DASS中,甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=9.5∶5.4∶1.3∶10.8∶2.4∶7.6。     

PMP柱前衍生HPLC法测定八月瓜果皮多糖中单糖组成

为建立同时测定八月瓜果皮中6 种单糖组分的色谱分离方法,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP） 柱前衍生和高效液相色谱法测定八月瓜果皮中6 种单糖组分。色谱柱为SHIMADZU-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈（A）-0.05 mol/L 甲酸铵溶液（B）梯度洗脱（0～10 min：18% A;10～20 min：18%～20% A;20～40 min：20%～23% A;40～60 min：23% A）,柱温30 ℃,流速1 mL/min,检测波长245 nm。结果表明,所建立的PMP-HPLC 柱前衍生化法可准确地测定八月瓜果皮中的D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和D-阿拉伯糖含量,6 种单糖成分在各自质量浓度范围内线性关系良好（R2≥0.998 3）,加样回收率为92.58%～100.02%。10 批八月瓜果皮样品中均检出6 种单糖,D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和D-阿拉伯糖平均物质的量比为1.18 ∶1.00 ∶23.25 ∶11.73 ∶3.51 ∶5.88,其中D-半乳糖醛酸含量为51.84～212.84 mg/g,D-葡萄糖含量为22.44～73.23 mg/g,D-阿拉伯糖含量为6.14～60.01 mg/g,是八月瓜果皮中的单糖主要成分。该试验所建立的方法操作简便、重复性好和准确度高,适用于八月瓜果皮多糖中单糖成分的分析。     

地皮菜多糖的分离纯化及结构组成分析

以地皮菜为原料,采用水提醇沉法获得地皮菜多糖(Nostoc Commune polysaccharides,NCP),经Sevage法脱蛋白、DEAE-Sepharose CL-6B柱色谱法分离纯化、透析、冻干等制备地皮菜精制多糖。利用紫外和红外光谱对其进行纯度及结构分析,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生HPLC法测定其单糖组成及含量。结果表明:地皮菜多糖经DEAE-Sepharose CL-6B柱色谱分离可得到5种多糖组分,其主要组分NCP-3具有典型的多糖吸收峰。HPLC分析表明NCP-3主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖构成,其摩尔比为2.17∶7.14∶2.56∶1。     

高效毛细管电泳法测定黄泥螺黏液中活性多糖的单糖组成

目的:测定经提取纯化后黄泥螺黏液中3种活性多糖EBPA、EBPB1和EBPB2的单糖组成。方法:7种单糖标准品经α-萘胺衍生化以后,用不同浓度(55～85mmol/L)的硼砂作为电泳介质,探寻最佳电泳条件实现高效毛细管电泳分离,得到标准的a-萘胺衍生单糖的毛细管电泳区带电泳图谱。将提纯后的黄泥螺黏液中的3种活性多糖分别水解成单糖,用相同的方法在最佳电泳条件下经毛细管电泳分离,得到水解单糖的毛细管电泳图谱。结果:最佳工作条件:运行缓冲液为75mmol/L、pH10.4的硼砂水溶液,分离电压10kV,进样压力0.5Psi,进样时间10s,柱温25℃。通过与标准谱图对照分析,黄泥螺黏液中的活性多糖EBPA由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,EBPB1由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成,EBPB2由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成。结论:高效毛细管电泳能有效分析多糖中单糖组分,灵敏度高,分离效果好。     

藜麦多糖的分离纯化及结构初步分析

以藜麦粉为原料,采用超声波辅助法提取得到藜麦粗多糖。粗多糖经AB-8大孔树脂吸附,DEAE纤维素柱分离得到QPs-Ⅰ、QPs-Ⅱ、QPs-Ⅲ3种多糖。通过Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析柱对QPs-Ⅰ进一步纯化得到QPs-Ⅰ-Ⅰ。采用气相色谱、紫外光谱和红外光谱对藜麦多糖QPs-Ⅰ-Ⅰ的结构进行初步研究。结果表明:多糖QPs-ⅠⅠ由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖6种糖组成,且各组成比例为:鼠李糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶半乳糖∶葡萄糖=0.61∶0.85∶0.92∶1.19∶2.22∶23.41。紫外光谱检测显示QPs-Ⅰ-Ⅰ在260～280nm处未见核酸和蛋白质等大分子的吸收峰,红外检测证实QPs-Ⅰ-Ⅰ具有多糖的特征吸收峰。     

中国被毛孢发酵虫草菌丝体多糖的提取、纯化及其理化性质

利用中国被毛孢虫草菌液体深层发酵培养得到的菌丝体,通过正交试验优化得到了虫草多糖的提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间120 min,料液比1∶15,提取次数4次。粗多糖经Sevag法脱蛋白、透析袋透析、DEAE-cellulose离子交换和Sephadex G-100柱层析纯化后,得到3种多糖(命名为HSP-1、HSP-2和HSP-3)。经紫外扫描、Sephacryl S-300 HR柱层析检测确定HSP-1和HSP-2为均一组分,HSP-3为非均一组分。苯酚-硫酸法测得HSP-1和HSP-2的含糖量分别为89.42%和85.63%。Sephacryl S-300 HR柱层析测得HSP-1和HSP-2的相对分子质量分别为1.7×104Da和9.8×103Da。GC-MS测得HSP-1的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖=4.522∶1∶1.378,HSP-2的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖∶D-阿拉伯糖=2.687∶4.591∶1∶0.212。红外光谱测定结果显示HSP-1和HSP-2都含有α型糖苷键。     

生姜皮多糖的分离纯化及其结构组成分析

以生姜皮为原料,经热水浸提法,乙醇醇沉得到生姜皮粗多糖。再经DEAE-纤维素-52阴离子交换柱和Sephadex?G-100凝胶柱对所得粗多糖进行层析纯化,得到3种水溶性生姜皮多糖(GE-1、GE-2、GE-3)。利用高效液相色谱与蒸发光散射检测器联用测定各多糖组分的分子质量,利用柱前衍生高效液相色谱法分析各多糖组分的单糖组成,通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描进一步分析各组分多糖结构。结果表明3种纯化多糖组分总糖含量分别为(98.06±0.15)%、(97.41±0.42)%、(97.89±0.22)%,分子质量分别为462、194 k D和376 k D。GE-1的单糖组成主要为甘露糖、葡萄糖、木糖,含有微量的半乳糖,其物质的量比为1.25∶6∶1;GE-2的单糖组成主要为甘露糖、葡萄糖和岩藻糖,其物质的量比为2.51∶9.25∶1;GE-3的单糖组成主要为甘露糖、核糖、半乳糖、阿拉伯糖,其物质的量比为17.39∶1∶1.89∶1.23。紫外光谱扫描结果显示3种多糖组分无明显的核酸和蛋白质吸收峰,红外光谱结果分析得出GE-1、GE-2和GE-3含有多糖类物质的特征吸收峰。     

天麻多糖的结构表征

对分离提纯得到的川产天麻多糖结构进行分析,结果如下:天麻粗多糖重均分子量为4.23×105,分散系数3.66,最大值达到1.38×106u.经HPLC分析,GPSa的分子量为4.97×105u,主要由葡萄糖构成,还含有少量的鼠李糖和甘露糖,其鼠李糖:甘露糖:葡萄糖=1:1.07:67.24.经红外光谱(IR)、1H和13C核磁共振(NMR)结构分析确定其糖链主要结构为α-(1→4)吡喃型D-葡萄糖.     

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。     

双孢菇菇柄多糖柱层析纯化及单糖组成

以双孢菇菇柄为试材,首先对经超声提取得到的菇柄多糖进行柱层析分离纯化,然后对柱层析得到的多糖组分别采用紫外光谱和柱层析进行纯度分析,并进行红外光谱分析和单糖组成分析。结果表明,脱蛋白双孢菇菇柄多糖经DEAE Sephadex A-25柱层析纯化共得到4个组分,收集其中两个较多的组分(蒸馏水和0.1 mol/L NaCl洗脱组分),经紫外光谱扫描无核酸和蛋白质,经Sephadex G-200柱层析鉴定均为单一峰。所得两种多糖组分经FT-IR红外光谱分析,均含有多糖特征吸收峰,且均为吡喃糖环β-异构体的多糖。菇柄蒸馏水洗脱多糖组分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖组成,0.1 mol/L NaCl洗脱组分是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖组成。     

火麻种子中水溶性多糖的提取、分离和纯化

火麻种子粉碎后经乙醇脱脂后用冷水抽提,经胃蛋白酶酶解后,透析和冷冻干燥得粗多糖H。利用离子交换柱DEAEsephadexA50(Cl-),琼脂糖凝胶SepharoseCL-2B和葡聚糖凝胶SephadexG-100对粗多糖H进行分离纯化,得到两种精制多糖HS1和HS2,并用凝胶过滤法测定了两种多糖的分子量,分别为42795和15396。多糖HS1经过气相色谱分析,结果表明其单糖组成主要为D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖组成,其摩尔比为0.12∶0.09∶0.15∶0.11∶0.12。     

茶叶多糖的提取纯化及其单糖组分的鉴定

研究了用水煮醇沉法提取茶叶多糖,用savage法除蛋白,苯酚-硫酸法测多糖含量,通过正交试验确定茶叶多糖的最佳提取条件;粗多糖经Sephadex-100柱层析纯化,得到精制茶叶多糖;薄层层析法鉴定单糖组分。结果表明:最佳提取条件为95℃,料液比1∶20(g:mL),提取时间2h,提取3次,茶叶多糖含量为35.92mg/g。茶叶多糖中含有2种不同的多糖,水解得到单糖D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、L-阿拉伯糖等。     

不同产地大花红景天多糖的单糖组成分析

通过气相色谱-质谱联用技术对不同产地大花红景天水提和碱提粗多糖的单糖组成及其比例进行分析。结果表明:西藏3个产地大花红景天水提粗多糖ST-Ⅰ、ST-Ⅱ、ST-Ⅲ均由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,摩尔比分别为:1∶2.86∶0.43∶2.12∶0.63、1∶2.81∶0.28∶1.72∶0.37、1∶3.37∶0.58∶2.36∶0.66;碱提粗多糖JT-Ⅰ、JT-Ⅱ由甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,摩尔比分别为:1∶0.93∶2.90、1∶2.01∶2.92,JT-Ⅲ与其他两地相比,单糖组成有较大差异,由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其摩尔比为5.60∶1.02∶13.20∶1∶9.27∶0.92。     

石莼多糖的单糖组成成分分析

目的:建立测定分析石莼多糖的单糖组成方法。方法:超声辅助提取石莼多糖,三氟乙酸(TFA)水解多糖,采用薄层色谱法(TLC)和1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成。结果:TLC法推断石莼多糖的单糖组成为甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖。PMP-HPLC法表明石莼多糖含有甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖,其摩尔比为:0.08∶0.08∶1.00∶0.97∶0.04∶0.68。结论:TLC法可以对多糖的单糖组成进行定性,但难以进行定量测定。PMP-HPLC法,操作简便,灵敏度高,分离效果好,可用于测定石莼多糖中单糖的组成定性、定量测定。     

香料烟烟叶多糖的热裂解产物研究

为了研究香料烟叶纯化多糖的热裂解产物,采用Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对香料烟叶粗多糖进行分离纯化得到2个多糖组分。通过气相色谱和气质联用分析得出,组分1的单糖组成为甘露糖∶半乳糖∶核糖∶鼠李糖∶阿拉伯糖(2.5∶2∶1.5∶1∶1),组分2的单糖组成为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖(1.7∶1.5∶1)。并利用裂解-气相色谱-质谱联用(Py-GC/MS0),定性定量测定分析热裂解产物,比较不同多糖组分分别在600℃,900℃下的裂解产物差异,对裂解产物进行归类分析,研究纯化后香料烟叶多糖在无氧条件下的热裂解情况。并分析主要裂解产物致香成分的致香效果,以期为烟草多糖成分在卷烟中的作用提供一些理论基础。     

红阳猕猴桃多糖组分的分离纯化、单糖组成及其抑制癌细胞活性

研究红阳猕猴桃果实多糖组分的分离纯化、单糖组成及其对癌细胞增殖的抑制作用。用水提取总多糖,层析法分离纯化多糖组分;高效凝胶渗透色谱测定组分的纯度和分子质量;高效液相色谱法测定多糖纯组分的单糖组成;傅里叶变换红外(Fourier transform-infrared,FT-IR)光谱鉴定多糖纯组分的特征官能团;用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法测定多糖纯组分对肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌和结肠癌这5种癌细胞的体外抑制活性。总多糖分离出ACP-1、ACP-2、ACP-3、ACP-4这4种单组分多糖;其中ACP-3纯度最高,分子质量为2 663 k D,主要含有L-鼠李糖(17.78%,物质的量分数,后同)、D-半乳糖醛酸(25.25%)、D-半乳糖(25.45%)、L-阿拉伯糖(20.51%)、D-葡萄糖(6.14%)、D-甘露糖(2.13%)、D-木糖(1.03%)、D-葡萄糖醛酸(0.97%)及少量D-岩藻糖(0.74%);其FT-IR光谱图有多糖特征官能团的吸收峰。ACP-3对5种癌细胞增殖的半数最大抑制浓度依次为0.646、0.310、0.642、0.281、0.575μmol/L,对癌细胞增殖有抑制活性。     

壶瓶枣多糖的纯化及结构初步分析

采用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化壶瓶枣多糖（polysaccharides from Zizyphus jujube Mill. cv. Hupingzao,简称ZJP）ZJP-2和ZJP-5组分,并对纯化后多糖的结构进行分析。结果表明：经纯化后得到ZJP-2b和ZJP-5a两种组分均一的壶瓶枣活性多糖,分子质量分别为89.21、61.60 kD,均具备多糖的特征吸收峰,且均以β-构型的吡喃糖为主;ZJP-2b中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比为32.4∶9.5∶9.4∶14.7∶9.7,而ZJP-5a中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖,其物质的量比为20.2∶42.9∶2.2∶7.5∶14.5;当质量浓度为3.5 mg/mL时,ZJP-2b和ZJP-5a的羟自由基清除率分别为30.51%和57.22%。