大豆分离蛋白酶法有限水解工艺过程及动力学分析

采用pH-stat法在pH8.0,T=50℃条件下,以Alcalasa酶对大豆分离蛋白进行有限水解处理,探讨了酶与底物摩尔浓度比[E]/[S]和反应时间t对产物水解度及溶解性的影响;研究了相应的有限水解(x＜6.0)过程的动力学特征。实验结果显示,控制主要影响因素为[E]/[S]＜0.4％,pH8.0和T=50℃条件下,在25min内可使产物的水解度x达到约6.0％,并且产物在酸性pH范围的溶解性明显改善。对实验结果的分析显示,水解过程中底物与酶之间的相互作用引起酶的抑制和失活。在此基础上推导出底物存在临界浓度,在实验条件下,其值为96.77mg/ml。     

Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

为优化大豆分离蛋白酶水解条件，本试验采用二次回归正交旋转组合设计方法对Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的条件进行研究。建立了水解度(DH)与pH值、反应温度、反应时间、底物浓度、酶与底物浓度比之间的数学模型；并获得最佳水解工艺条件：pH值6．5，温度40℃，水解时间10h，底物浓度14％，酶与底物浓度比4．5％；主成分分析表明，pH对DH的贡献率最大。     

菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白工艺优化研究

以水解度为指标,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度等因素对菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响。影响菠萝蛋白酶水解大豆蛋白的影响因素顺次为酶浓度、温度、底物浓度、pH。最佳参数组合是酶浓度为6％、温度为65℃、底物浓度为5％、pH为8．0。在此条件下,菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的水解度在半小时内可以达到8．18％。     

酶法有限水解对大豆分离蛋白乳化性能的影响

以蛋白酶Ａｌｃａｌａｓｅ作用于大豆分离蛋白,分析了有限水解作用对产物乳化性能的影响。在实验条件下,当水解度〈６．０时,水解产物的乳化性能随其溶解性的增加而改善。在广泛ＰＨ范围内,乳化能力、乳化活性及等电点附近的酸凝性比未处理前有明显提高。     

中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

本研究利用大豆分离蛋白为原料，选用枯草杆菌中性蛋白酶As1．398对其进行酶水解，在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对大豆分离蛋白酶解条件进行优化，得出的最佳水解条件为：温度52℃，pH值7．5、E／S％。4．5％、S％=3％、水解时间2h，此条件下蛋白质的溶出率为67.2％。     

酶法水解大豆分离蛋白的研究

以大豆分离蛋白为原料,通过单因素试验和正交试验L9(34)研究了蛋白液的浓度、水解的温度、水解时间、酶的加入量及pH值等因素对大豆分离蛋白水解度的影响,确定了适宜的范围值和因素组合。试验结果表明,大豆分离蛋白在蛋白液浓度8%,加入的酶量为14μl,水解温度50℃,水解时间6h,pH值为6.5时水解率最高,水解率可达到10.0%以上。     

S9碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白优化条件研究

研究了S9碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽工艺,分析了底物浓度、温度、酶用量和水解时间对酶水解的影响。通过正交试验设计和统计分析获得S9碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解工艺,工艺参数为底物浓度4%,温度60℃,酶用量3000U/g,水解时间120min。     

蛋白酶水解大豆分离蛋白的分子水平表征

采用两种蛋白酶(胃蛋白酶和碱性蛋白酶)对大豆分离蛋白进行水解,水解结束调节pH至4.8,离心分离得到酸可溶蛋白和酸不可溶蛋白.考察不同的蛋白酶、水解时间、温度以及未添加蛋白酶的情况下,酸不可溶蛋白所占比例,并采用SE-HPLC和SDS-PAGE对这些酶解物进行了分子水平的表征.结果发现:胃蛋白酶选择性地水解大豆球蛋白(11S),在pH 2.0、37℃条件下水解6h,酸不可溶蛋白所占比例为51.14％,其相对分子质量大于10 kDa的部分占到50％以上.水解温度对碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响较大,在pH 8.0、60℃条件下水解1h获得的大豆分离蛋白碱性蛋白酶酶解物的相对分子质量主要分布在20 kDa以下.不同蛋白酶水解大豆分离蛋白,其水解进程存在显著差异,即使是采用同一种蛋白酶进行水解,不同的水解条件下得到的酶解物分子结构也大不相同.     

木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

研究了大豆分离蛋白经过加热预处理后用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解的可行胜.以水解度(DH)为指标,考察了单因素水解条件得出:木瓜蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度3.0%,pH 7.0,反应温度55℃,酶用量30μg/g;中性蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度5.0%,pH 7.0,反应温度55℃,酶用量40 μg/g.在此条件下,大豆分离蛋白水解度分别为3.69%和9.80%.在一定条件下复合酶分步水解优于单一酶水解.     

碱牲蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

采用Alcalase碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白,利用扫描电镜观察不同预热温度对大豆分离蛋白结构的影响.研究了温度、pH、底物浓度、酶与底物比和时间对水解度的影响.通过正交实验及验证实验确定了最佳水解条件为:预热温度90℃、pH8.5、温度55℃、底物浓度为5%、酶与底物比为15%、水解时间4h,水解度为25.12%,多肽得率78.85%.     

酶解大豆分离蛋白乳化特性的研究

利用枯草芽孢杆菌AS1．398中性蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解，并利用浊度法测定了不同水解度、不同pH条件下酶解大豆分离蛋白的乳化特性，结果表明：AS1．398蛋白酶对大豆分离蛋白的最大水解度为36％，水解度为9％时乳化活性最大，水解度为3％是乳化稳定性最好。同一水解度时，pH越高，蛋白质的乳化特性越好。水解度为3％、9％、15％的大豆分离蛋白在pH等于或高于5．0时的乳化活性明显地高于原蛋白质，且水解度为3％时乳化稳定性也明显地高于原蛋白质。     

大豆分离蛋白乳化性的研究

采用蛋白质乳化容量电导法,对不同浓度、ＰＨ和酶水解条件下大豆分离蛋白乳化容量和乳化稳定性进行测定,结果表明：大豆蛋白的乳化性在低密度时随浓度上升而增加,浓度达到６％以后趋于稳定;等电点时（ＰＨ４．５）,乳化性最差,偏离等电点后尤其在偏碱性条件下,乳化性明显增加,酶水解后,乳化性变化产大,水解度１７％时,乳化性最佳。     

轻度酶解对大豆蛋白胶凝性和疏水性的影响

以豆奶浆料的凝胶强度H以及大豆分离蛋白的表面疏水性指数So为主要指标，研究了热处理后的豆奶浆料经Alcalase碱性蛋白酶和As 1．398中性蛋白酶分别轻度酶解后，豆奶浆料中大豆蛋白胶凝性质随水解度的变化，并考察了限制性酶水解对大豆蛋白表面疏水性So的影响。     

等电点附近大豆分离蛋白乳化稳定性的研究

等电点附近的大豆蛋白由于所带电荷减少、疏水相互作用增强而以聚集体的形式存在且其溶解性较差,故鲜有研究者关注该条件下大豆蛋白的乳化特性。本研究从颗粒稳定乳液的角度出发,分别以等电点附近(p H 5.0)和远离等电点(p H 7.0)两个条件制备了大豆分离蛋白(soy protein isolate,SPI)稳定的乳液,比较了两种条件下SPI的界面性质及所得乳液的储藏稳定性。结果发现,p H 5.0时SPI的溶解度仅为4.70±0.15%,远远低于p H 7.0时的93.28±1.89%;然而SPI浓度为0.50%时,p H 5.0的界面压却高于p H 7.0;以p H 5.0条件制备的SPI乳液,其界面蛋白吸附量高达87.03±1.28%,而p H 7.0制备的乳液仅为36.15±1.48%;p H 5.0的乳液两个月后液滴的平均粒径为63.15±0.30μm,与新鲜制备乳液(62.36±0.41μm)相比基本不变;p H 7.0的乳液经过两个月储藏后其液滴平均粒径从45.78±0.38μm增加至55.19±1.86μm。可见,以等电点附近条件制备的SPI乳液依然具有良好的储藏稳定性。     

高速剪切对大豆分离蛋白限制性酶修饰的影响

研究高速剪切预处理对大豆分离蛋白限制性酶修饰制备等电点处高分散性蛋白的影响。以酶修饰产物的水解度、分散性为指标进行综合评价,揭示水解度与分散性的关系。结果表明,以常规酶修饰为对照,高速剪切处理能有效地促进大豆分离蛋白的酶修饰,在0.5～2.0h 范围内,随水解时间的延长,水解度逐渐增大,分散性也随之增加。该处理方式的最适参数为底物质量浓度100g/L、剪切速率6000r/min、剪切时间4min,该条件下酶修饰物的水解度从1.29% 提高到4.16%,等电点处分散性由20.62% 提高到46.82%,分别提高了3.22 倍和2.27 倍(P ＜ 0.05),并将改性时间由4.5h 缩短至2.0h。     

pH偏移结合热处理对大豆蛋白柔性与乳化性的影响

研究pH偏移（pH?7.0、pH?2.0、pH?11.0）结合热处理（90、120?℃）对大豆分离蛋白（soy?protein?isolate,SPI）柔性的影响,并探索SPI柔性与结构和乳化性质的关系。结果表明,在各个pH偏移处理条件下,SPI柔性随着处理温度的升高而增加。相比于pH?7.0条件下,pH?2.0和pH?11.0偏移处理促进了SPI在加热过程中柔性的增加,其中pH?11.0条件下热处理对柔性影响更加强烈。pH?7.0条件下,游离巯基浓度随热处理温度的升高而增加,SPI柔性的增加与SPI内二硫键的断裂有关。pH?11.0偏移处理条件下,SPI在加热过程中发生了解离,SPI柔性增加。在实验条件下,SPI柔性与乳化活性和乳化稳定性呈显著正相关,相关系数分别为0.945和0.936。紫外扫描、内源性色氨酸荧光光谱研究发现随着柔性的增加,SPI结构变的更加舒展。     

超声和Alcalase 酶复合处理水解大豆分离蛋白工艺研究

以大豆分离蛋白为底物,通过单因素试验和正交试验,确定超声和Alcalase 酶复合处理对大豆分离蛋白水解的最佳条件。结果表明,最佳水解条件为大豆分离蛋白质量分数5.0%、超声处理时间30min、加酶量5.0%、酶解pH8.0、酶解温度55℃、酶解时间4.0h,在此条件下,大豆分离蛋白水解度为12.21%。