脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因的克隆及序列分析

为了获得脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria meningitidis,Nm)表面蛋白A(NspA)基因,从脑膜炎患者的血液中分离出脑膜炎奈瑟氏菌并对其进行鉴定.然后根据NspA基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)技术体外扩增得到NspA基因.进行克隆、测序及序列分析.结果显示,其核苷酸序列同源性与Genbank报道的标准菌株相比同源性为100%.克隆获得的基因保持了脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NspA基因的完整性,保留了其抗原性,为以后进一步开发脑膜炎基因工程疫苗奠定了实验基础.     

甜菜夜蛾核多角体病毒Se29基因的克隆与序列分析

[目的]克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua muhicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF29全长基因(Se29).[方法]用PCR的方法扩增Se29基因,将其克隆至pMD18-T载体上,获得了重组质粒T-Se29,进行序列测定和分析.[结果]获得大小为642 bp左右的序列.扩增序列与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性100%.序列分析结果表明,Se29基因编码蛋白(SE29)存在一个可能的跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,1个微体C末端靶信号位点.蛋白序列比对结果表明,SE29与棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nueleocapsid nucleopolyhedrovir-as,HaSNPV)ORF128(Ha128)的编码蛋白(HA128)具有较高的同源性,其在病毒侵染过程中的作用值得关注.[结论]成功克隆出Se29基因,为研究其在病毒侵染过程中的作用奠定了试验基础.     

薯蓣皂苷糖苷酶基因的克隆及同源性分析

[目的]从分子生物学水平上研究Absidia sp.G3d产薯蓣皂苷糖苷酶,对该酶基因CDS区的序列进行调取和分析.[方法]根据薯蓣皂苷糖苷酶的N端序列设计简并引物,以总RNA为模板进行RT-PCR调取cDNA,然后采用3RACE和5RACE技术,调取CDS区基因全序列.[结果]测序得到序列长度为1 497 bp.该基因的同源性比较分析表明,薯蓣皂苷糖苷酶基因与α-鼠李糖苷酶没有同源性,与α-淀粉酶的基因序列具有很高的同源性,达到93%以上.[结论]蛋白质结构存在差异,酶反应特性不同.     

固原鸡线粒体基因组ATPase 8基因的克隆及序列分析

[目的]扩增固原鸡(白羽、麻羽、红羽)、肉鸡品种AA鸡及蛋用品种罗曼鸡线粒体ATPase 8(ATP酶第8亚基)基因.[方法]从鸡血液中提取基因组DNA.然后,利用已经公布的鉴别检测鸡的源性成分的特异性引物,PCR扩增线粒体ATPase 8基因并测序.[结果]固原鸡不同品系和AA鸡的ATPase 8基因全序列为165 bp,罗曼鸡为168 bp.[结论]不同品系固原鸡的ATPase 8基因序列与罗曼鸡和AA肉鸡均有较高的同源性,但是与鹌鹑、鹧鸪、鸵鸟、鹅、火鸡的同源性相对较差.     

黑木耳YBS-3菌株ras启动子的克隆与分析

[目的]从黑木耳(Auricuralia auricular)基因组中克隆内源ras启动子,为黑木耳利用基因工程培育优良品种提供启动子元件材料.[方法]利用PCR技术,以黑木耳菌株YBS-3基因组DNA为模版,克隆得到4条ras启动子片段.采用启动子序列分析软件Place、Promoter prediction和TFSEARCH ver.1.3对其进行序列结构分析.[结果]4条启动子片段均含有核心启动子序列,除典型的基本作用元件TATA bo、和CAAT box外,还有许多其他重要作用元件如GATA BOX、GGGC BOX和CCAAT BOX1等,同时每条片段中均至少具有1个转录起始位点,且检测到HSF、AP-1、GCN4等多个转录因子结合位点.[结论]4条目的的序列在理论上具有较有的高动子活性功能.     

稀土微肥对盐胁迫下黄豆幼苗抗氧化酶的影响

采用稀土微肥对盐胁迫下黄豆幼苗抗氧化酶活性的影响进行了研究.结果表明,随着盐浓度增加,黄豆幼苗的丙二醛(MDA)含量增多,细胞膜透性增大,抗氧化酶SOD、CAT的活性呈先上升后下降的趋势,POD呈逐渐上升趋势;与盐胁迫处理组相比,施用稀土微肥后的复合处理组SOD、CAT活性均增大,且活性最高峰向盐浓度增大的方向推移,POD活性、MDA均有所降低,细胞膜透性变小.说明稀土微肥对盐胁迫造成幼苗的损伤具有一定的修复作用.     

外源赤霉素对盐胁迫下盐角草种子萌发及幼苗生长的影晌

[目的]研究外源赤霉素(CA3)对盐胁迫下盐角草种子发芽及幼苗生长的影响.[方法]通过不同浓度(0、100、300、500、700mmol/L)的NaCl结合10μg/mlGA3处理,研究了外源GA3对盐胁迫下盐角草种子萌发及幼苗生长的影响.[结果]外源GA3提高了盐胁迫条件下盐角草的发芽率、发芽势、发芽指数以及活力指数.在外源GA3处理下,盐角草的根系活力、幼苗根茎长及耐盐性都高于单盐处理.[结论]在一定浓度范围内,外源GA3能缓解盐胁迫对盐角草种子萌发及幼苗生长的抑制作用.     

家蚕TPR基因的克隆

[目的]克隆家蚕TPR基因,为研究该基因功能提供依据.[方法]利用Trizol法提取家蚕蛹期总RNA,再用RT-PCR方法对家蚕TPR基因进行克隆.[结果]成功得到家蚕TPR基因全cDNA序列,并用PCR扩增得到了TPR基因的ORF,全长858 bp.[结论]首次对家蚕TPR家族基因进行了克隆,为今后对该基因功能研究奠定了坚实的基础.     

黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的克隆与序列分析

[目的]克隆鞘翅目昆虫黄粉酷氨酸羟化酶(TmTH)基因.[方法]采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术和PCR方法克隆了鞘翅目昆虫黄粉虫TmTH基因,并对其进行了生物信息学分析、[结果]TmTH cDNA全长2103bp,包含1605bp的开放式阅读框,可编码534个氨基酸残基,蛋白质分子量为60.66kD,等电点为5.70,构建了其系统进化树.[结论]TmTH基因的克隆为鞘翅目昆虫酪氨酸羟化酶的研究提供了参考.     

犬IL-2基因克隆及原核表达

[目的]研究犬IL-2基因的克隆和表达,为开发新型免疫增强荆和基因工程疫苗提供理论支持.[方法]从犬全血中分离出白细胞,经刀豆素刺激培养20 h后,提取总RNA;根据GenBank 中犬IL-2基因序列,设计1对引物,进行PCR扩增,并构建原核表达载体pET-28a,将其转化到宿主菌B121中,经IPTG 诱导表达.表达产物用SDS-PAGE进行分析.[结果]RT-PCR 扩增出一条约500 bp的条带,与预期结果相符;重组质粒pMD18-T-IL2 经双酶切后,产生一个约500 bp基因片段,说明目的基因被成功克隆;表达载体pET-28a-IL2 经双酶切和PCR鉴定后,分别产生一个约500 bp目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE 分析,分子量约为20 kDa,与预期蛋白大小基本相同.[结论]IL-2基因被成功克隆和表达.     

分段崩落法回采顺序对进路受力状态影响分析

某金矿主要开采 7-2# 矿脉,矿体及围岩节理裂隙发育,且矿体赋存深度超过 500m,在较大地应力条件下围岩受采动影响极易冒落。该矿浅部资源采用干式嗣后充填采矿法时岩层不易控制,且留设矿柱造成高品位矿石损失率较高,冒落的围岩混入矿石中使贫化率居高不下。为解决上述问题,在开采深部资源时变更为进路式无底柱分段崩落法开采,而不同进路的回采顺序对与之相邻的回采进路受力状态影响较大,为提高进路内凿岩、出矿作业的安全性,需深入分析回采顺序与进路稳定性之间的关系。结合实际,本文提出了 5 种进路回采顺序,并通过 FLAC3D 数值模拟对各回采顺序条件下进路的受力进行了分析,结果表明采用双翼阶梯式回采方式,进路周边围岩应力分布较为均匀,回采进路一定时期内能够保持稳定,可大幅提高进路内作业安全性。