紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌

紫外线辐射是目前最为广泛的物理诱变因子之一,其引起菌体DNA结构变化的形式很多,如DNA链的断裂、碱基的破坏等,但最主要的作用是使同链DNA的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配对,从而引起微生物突变或死亡.以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外诱变的方法,以获取可高效发酵生产蛋白酶的突变株.通过大量筛选及连续传代实验,确定了一株突变性状能稳定遗传的突变株,其蛋白酶产量较出发菌株有大幅度提高.     

紫外诱变选育高产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌

选育高产3-羟基丁酮的枯草芽孢杆菌新菌株。采用紫外诱变(15W,25cm),对一株产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌YD-1进行紫外诱变处理,并对菌株的遗传稳定性进行测定。筛选获得4株高产菌MB-2、MB-6、MB-10和MB-11,经过20代传代培养后MB-2的遗传稳定性最好,其遗传物质经RAPD分析,与出发菌株YD-1相比有较大差异。该菌遗传性状稳定,是一株高产3-羟基丁酮的新菌株。     

紫外诱变芽孢杆菌选育木聚糖酶高产菌株

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）为出发菌株，采用紫外诱变的方法获得了2株木聚糖酶高产菌株，酶活分别是原来的17．50倍和17．20倍。选取酶活最高的菌株进行发酵条件的研究。     

枯草芽孢杆菌淀粉酶高产菌株的复合诱变研究

该研究以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外和硫酸二乙酯（DES）复合诱变的方法,从大量突变菌株中获取可高效发酵生产淀粉酶的菌株。又通过连续传代实验,确定了该突变菌株突变性状能稳定遗传。结果表明,菌株D-2具有较高的的淀粉酶活力,其淀粉酶活力可达N6．599U／mL,较出发菌株提高到4倍。并在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性。该文探讨了一种高效的发酵生产淀粉酶菌株的选育方法,为下一步菌种生长条件优化打下了基础。     

高产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌菌株选育及其水解条件的研究

通过对三种枯草芽孢杆菌的比较分析,以其中酶活力最高的一株作为出发菌株,用15W紫外灯于30cm处照射120s,获得菌株UV-12-3,酶活力为4238.6u/mL。通过正交实验,确定其最适水解条件为:pH6.5、温度32℃、水解42h、接种量为8%。在此条件下水解度可达到46.7%。     

高产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌菌株选育及其水解条件的研究

通过对三种枯草芽孢杆菌的比较分析,以其中酶活力最高的一株作为出发菌株,用15W紫外灯于30cm处照射120s,获得菌株UV-12-3,酶活力为4238.6u/mL。通过正交实验,确定其最适水解条件为:pH6.5、温度32℃、水解42h、接种量为8%。在此条件下水解度可达到46.7%。      

枯草芽孢杆菌凝乳酶高产菌株的微波诱变

以1株产凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株为对象,对其进行微波诱变处理,考察诱变时间、诱变频率对菌株诱变效果影响,得到最佳诱变条件为:诱变时间为4 min,诱变功率为450 W;获得1株高凝乳酶活菌株(菌株编号为BsB1.1),其遗传稳定性良好,凝乳酶活达到516.12 U/g,比出发菌株提高了29.0%。     

常压室温等离子体诱变选育高产核黄素枯草芽孢杆菌

该研究以BS120作为出发菌株,通过常压室温等离子体诱变(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)技术进行诱变处理,第一轮以40 mg/L 8-氮鸟嘌呤为筛选拮抗物进行筛选,得到核黄素产量和得率分别提升61. 60%和58. 12%的菌株BSG1。第二轮诱变以300 mg/L寡霉素为筛选拮抗物进行筛选,筛选获得菌株BSG3,核黄素产量和得率较BS120分别提升83. 59%和78. 76%。将核黄素操纵子表达质粒pMX45转入BSG3中,得到菌株BSG5,核黄素产量达到(4 467. 08±99. 47) mg/L,得率为(42. 56±1. 25) mg/g葡萄糖,较BS120分别提高140. 94%和120. 52%,展现了良好的核黄素发酵性能和遗传稳定性。     

原生质体紫外诱变选育鸟苷高产菌株

以一株鸟苷产生菌Bacillus subtilis JSIM-G518为出发菌株,采用原生质体紫外诱变的方法,选育具有核苷水解酶缺失,磺胺胍,德夸菌素、狭霉素C等抗性的突变株,摇瓶的鸟苷产量达到24.0 g/L,比出发菌株提高了30%.该突变株遗传性状稳定,连续传代10次,仍维持较高的鸟苷产量.     

紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应研究

枯草芽孢杆菌是一种无毒副作用、无残留的绿色饲料添加剂,研究表明,可以利用枯草芽孢杆菌进行生物防治或生产微生物杀菌剂以替代剧毒化学药品。利用紫外线对枯草芽孢杆菌进行诱变,通过实验紫外线处理150s时致死率几乎为100%,120s时诱变效果最好,对大肠杆菌的抑菌效果最明显。     

高产胞外葡萄糖-1-磷酸菌株的筛选及鉴定

采用平板初筛、摇瓶复筛结合TLC和HPLC-MS检测的方法,从有机物丰富的土壤中筛选到一株以麦芽糖为底物直接发酵高产胞外葡萄糖-1-磷酸的菌株;经形态学、生理生化特性及16S rDNA基因序列分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌.     

紫外诱变筛选高产可溶性葡聚糖PS202菌株的研究

采用紫外诱变的方法筛选可溶性葡聚糖产生菌,最大正变率可达19%。所得菌株遗传稳定。并采用红外分析方法对所得多糖进行一级结构分析,确定了该种多糖的组成为β糖苷键连接,含有coo- 的一类酸性细菌胞外多糖。     

丙酸杆菌素高产菌株的诱变选育

丙酸杆菌素是乳品丙酸杆菌代谢合成的一种重要的多肽或蛋白质,能抑制革兰氏阴性菌、部分革兰氏阳性菌、霉菌和酵母菌的生长。以丙酸杆菌Propionibacterium feudenreichiiCS01为出发菌株,采用紫外(UV)和亚硝基胍(NTG)复合诱变的方法,获得高产突变株N11和N42,其抑菌活性达到28.63、28.83AU/mL,分别比原始出发菌株(21.14AU/mL)提高了35.4%和36.4%。     

复合诱变法选育生产乳果糖高产菌株的研究

选育生产乳果糖的高产菌株,为生物法（酶法）合成乳果糖提供技术保障。以乳酸克鲁维酵母变种（JN-187）为出发菌,经紫外线诱变选育出水解活性最高的JU74—09突变菌株;然后以JU74—09菌株为出发菌,经亚硝基胍（NTG）诱变选育出转糖基活性最高的JN91—08突变菌株;该菌株经7次传代实验,显示出良好的遗传稳定性。说明紫外线诱变与亚硝基胍（NTG）复合诱变是一种行之有效的用于生产乳果糖菌株选育的诱变方法。     

细菌纤维素产生菌选育与突变株发酵特性的研究

为了获得细菌纤维素高产菌株,采用紫外线和硫酸二乙酯对实验室保存的木葡糖酸醋杆菌BC13进行复合诱变。通过诱变、筛选和连续传代实验,获得1株产量达15.6g/L的高产突变株Y19-11,该菌株遗传稳定性良好,比原出发菌株产量提高44.4%。同时,通过比较不同温度、不同初始pH下的菌体量和细菌纤维素产量,确定突变株Y19-11的最适温度和初始pH分别为30℃和5.5。      

芽孢杆菌B15的分子生物学鉴定及高产蛋白酶菌株选育

利用16S rDNA序列分析法,对分离自土壤产蛋白酶和淀粉酶及拮抗物质的芽孢杆菌B15进行菌种鉴定.通过序列比对及构建系统发育树,表明菌株B15与Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum AS43.3相似性达99％,鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种.菌株B15经过2次紫外线诱变,蛋白酶产量提高到初始菌株的147.1％.试验发现诱变株的淀粉酶产量与蛋白酶产量呈正相关.     

枯草芽孢杆菌R21-4的诱变育种及其抗菌蛋白性质的研究

实验室筛选到的BacillussubtilisR21-4对某些革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌及真菌均有抑制作用,为了进一步提高该菌株对食品中常见腐败菌大肠杆菌的抑菌效果,对枯草芽孢杆菌R21-4进行了自然选育、紫外诱变,从而筛选到一株抑菌活性有较大提高的稳定突变株Bacillussp.R21-15,其抗菌效价比原始菌株提高了58.49%。Bacillussp.R21-15的抗菌蛋白具有良好的热稳定性,对蛋白酶部分敏感。Tricine-SDS电泳初步显示出这一抗菌蛋白的分子量在6.4～7.2kDa之间。      

微波诱变选育核酸酶P1高产菌株

以核酸酶P1产生菌桔青霉（Penicillum citrinum）为出发菌株,通过微波诱变,得到1株产核酸酶较高的生产菌SL5。在适宜条件下（004250MHz、800W、150s）,其产生的核酸酶P1酶活由667．50U/mL提高到1228．20U／mL,提高了84．00％。传代试验表明,该突变株SL5的高产性能遗传特性较稳定。