烟草种子携带病原真菌的分离与鉴定

采用无菌滤纸培养烟苗的方法对贵州主栽的4个烤烟品种裸种进行了带菌检测,并对种子携带真菌进行了分离与鉴定。结果表明,K326、贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号的种子带菌率分别为15%、77.78%、21.67%和61.39%。分离和鉴定发现种子携带的真菌有链格孢菌属（Alternaria sp.）、拟茎点霉属（Phomopsis sp.）、支顶孢属（Acremonium sp.）、柄孢壳属（Zopfiella sp.）、曲霉属（Aspergillus sp.）、镰孢菌属（Fusarium sp.）、青霉菌属（Penicillium sp.）、赤霉菌属（Gibberella sp.）、芽枝孢菌属（Cladosporium sp.）、离蠕孢属（Bipolaris sp.）和Stagonosporopsis cucurbitacearum等。获得40株真菌中共有22种真菌,优势菌群主要为链格孢属、芽枝孢菌属、镰孢菌属和赤霉菌属。链格孢菌属在4个烤烟品种上均有发现。镰孢菌属主要来自于贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号,其中南江3号种子上最多。芽枝孢菌属仅来自贵烟4号。贵烟4号和南江3号种子上的真菌种类和数量较多。这些种子携带真菌的发现对烤烟种子的生产与加工具有重要的意义。     

芝麻种子带菌检测及药剂消毒处理效果

采用吸水纸检测法对我国6个芝麻主产区的13个广泛栽培的芝麻品种进行了带菌检测,并测定了5种杀菌剂对芝麻种子的消毒效果。结果表明,芝麻种子外部携带的真菌主要类群包括镰孢属（Fusarium spp.）、棒孢属（Corynespora spp.）、长蠕孢属（Helminthosporium spp.）、壳球孢属（Macrophomina spp.）、链格孢属（Alternaria spp.）、曲霉属（Aspergillus spp.）和青霉属（Penicillium spp.）,其中引起芝麻茎点枯病的壳球孢属分离频率和带菌率最高。种子内部携带的真菌类群主要包括镰孢属、棒孢属、壳球孢属和曲霉属等,引起芝麻叶枯病的棒孢属真菌分离频率和带菌率最高。供试的5种杀菌剂对芝麻种子均有一定的消毒效果,其中50%扑海因和80%多菌灵处理对芝麻种子消毒效果最显著。     

山西葡萄中链格孢菌分离鉴定与污染水平分析

本研究对山西葡萄主产区的巨峰葡萄（Kyoho grapes）和红提葡萄（Redglobe table grapes）上的主要病原真菌（链格孢菌）进行纯化分离、真菌形态学鉴定、分子生物学鉴定,并对链格孢菌产毒能力进行检测分析。研究表明,链格孢菌（Alternaria alternata）侵染山西葡萄具有一定的品种选择性。链格孢菌菌株产生的毒素主要以细交链孢菌酮酸（TEA）为主。本研究初步明确了山西葡萄（巨峰葡萄和红提葡萄）中链格孢菌的污染水平。     

不同油菜品种种子带菌检测

以油菜主产区的10个主栽品种的种子为材料,将吸水纸检测法与分子指纹分析相结合,对种子携带的真菌进行分离和鉴定。结果表明,供试油菜种子携带有7属9种真菌,其优势菌群为镰刀菌属（Fusarium sp.）、链格孢属（Alternaria sp.）以及青霉属（Penicillium sp.）,且不同油菜品种之间种子所携带的真菌种类有较大差异。     

烟草种子附生真菌群落结构与多样性

为了解烟草种子附生真菌的群落结构和多样性。采用Illumina MiSeq高通量测序技术测定K326、云烟85、L8、301种子的附生真菌。结果表明K326种子的优势属为链格孢属（Alternaria）、赤霉菌属（Gibberella）、隐球菌属（Cryptococcus）、镰刀菌属（Fusarium）及红酵母属（Rhodotorula）等;云烟85的优势属为赤霉菌属、小画线壳属（Monographella）、链格孢属、红酵母属及镰刀菌属;301的优势属为链格孢属;L8的优势属为链格孢属、曲霉菌属、镰刀菌属、赤霉菌属及隐球菌属等。      

链格孢霉菌侵染番茄产毒机制

为研究链格孢霉侵染番茄后的产毒机制,本实验将链格孢霉孢子悬液接种于蕃茄上,并分别置于4 ℃和25 ℃下培养,15 d内进行3 次取样。样品经高分辨质谱检测后,使用MZmine、Xcalibur软件对检测结果进行分析,原质谱数据集经Mzmine软件处理后导入全球天然产物社会分子网络平台,采用基于特征的分子网络（feature-based molecular networking,FBMN）建立真菌毒素及代谢物分子网络,实现对链格孢毒素代谢通路的可视化分析。结果表明,接种后番茄在4 ℃下未产生任何毒素,25 ℃下链格孢酚（alternariol,AOH）、链格孢甲基醚（alternariol monomethyl ether,AME）、细链格孢菌酮酸（tenuazonic acid,TeA）、腾毒素（tentoxin,TEN）在5、10、15 d时均被检出,链格孢霉烯（altenuene,ALT）直至15 d时才被检出,3 次取样中TeA含量均最高。利用MZmine软件的碎片诊断过滤功能和Xcalibur软件精确分子质量技术验证了AOH和AME硫酸盐结合的隐蔽型真菌毒素的存在。FBMN分析结果表明3 种毒素（AOH、AME、TeA）有明显的代谢通路,代谢产物的种类较多,而未在番茄中检测到TEN和ALT代谢产物。本研究阐明了链格孢霉毒素在番茄中的产生及代谢机制,可为番茄中链格孢毒素的有效控制及番茄的贮藏保鲜提供理论支持。     

鲜食葡萄表皮生物性危害因子及链格孢毒素分析

为确定链格孢属真菌发酵液和鲜食葡萄中链格孢酚(AOH)、链格孢酚甲基乙醚(AME)、链格孢霉素(ALT)和细交链孢菌酮酸(TeA)4种链格孢霉毒素的含量,对我国两个鲜食主栽品种‘巨峰’‘红地球’的50份样品表皮的生物性危害因子进行分离鉴定。结果表明,鲜食葡萄表皮的生物性危害因子主要为曲霉属、链格孢属和青霉属真菌,其中链格孢属真菌主要为Alternaria alternata,而A. alternata的产毒发酵液中能检测到AOH、AME和TeA,其中TeA的含量较高。基于链格孢毒素的毒性,要加强葡萄及其制品的风险监测。     

鳖蛋携带肠杆菌科细菌的调查

目的了解鳖蛋携带肠杆菌科细菌的情况。方法对鳖蛋内容物采用LB肉汤及SC增菌培养，麦康凯和SS琼脂分离。挑取不同类型的代表性菌落接种至克氏双糖铁及赖氨酸-动力琼脂，并进行革兰染色镜检，氧化酶试验，结合系统生化和相应的诊断血清进行鉴定。结果从87个鳖蛋中捡出86个带菌，带菌率98．85％；有75个蛋携带肠杆菌科细菌，带菌率86．21％。总共分离出121株肠杆菌科细菌，归类8个属13个种，以弗劳地柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）阳性检出率最高（57．38％），有一个蛋检出布伦登卢普血清型沙门菌（Salmonella braenderup）。鳖蛋可携带1～4种细菌，其中以带1—2种菌最多（90．66％）。结论该批鳖蛋的检验结果显示，鳖蛋不仅带菌，而且菌种类别广、多重带菌及可携带致病菌，因此必须做好鳖蛋的卫生检疫。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速检测麦类中典型链格孢霉毒素

建立一种超高效液相色谱-串联质谱结合分散液-液微萃取前处理方法测定麦类中7 种链格孢霉毒素（链格孢酚、交链格孢酚单甲醚、交链孢烯、细交链格孢菌酮酸、交链孢毒素I、腾毒素、细格菌素）的方法。样品经3 mL一级水、10 mL 1.5%甲酸乙腈-甲醇（4∶1,v/v）溶液提取,2 g无水MgSO4脱水和1 g NaCl盐析,振荡15 min、离心10 min后取1 mL上清液和100 μL三氯甲烷用于分散液-液微萃取。7 种链格孢霉毒素使用BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）进行分离,采用电喷雾正负离子的多反应离子监测模式。结果表明：7 种链格孢霉毒素在5 min内完成色谱分离分析,在0.5～100 μg/L质量浓度范围内均呈现良好线性关系,R2＞0.987 277,检出限为0.11～0.16 μg/kg,定量限为0.42～0.49 μg/kg;以小麦为样品基质,在3 个不同加标水平下,7 种链格孢霉毒素回收率在70.7%～101.3%之间,相对标准偏差为1.22%～4.11%。将该方法用于分析实际麦类样品（黑麦、荞麦、莜麦、青稞、燕麦、小麦）中7 种链格孢霉毒素的污染状况,结果发现腾毒素和细交链格孢菌酮酸是6 种麦类中都检出的毒素,含量分别为0.6～10.7 μg/kg和未检出～31 μg/kg;细格菌素虽检出率低于腾毒素和细交链格孢菌酮酸,但最高含量37.3 μg/kg与细交链格孢菌酮酸相当。本方法稳定、准确、灵敏、快速,能够满足麦类样品中7 种链格孢霉毒素残留分析的需求。     

华莱士瓜采后丝状真菌的分离及rDNA ITS区序列分析

从采后贮藏期间自然发病的华莱士瓜上分离到12 株丝状真菌,将分离菌经纯化后回接到健康无损的华莱士瓜上,发病特征与分离发病果实一致,确定其为华莱士瓜的病原菌。结合形态学观察和rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析,结果表明：分离到1 株黑附球菌（Epicoccum nigrum）、1?株草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）、2 株链格孢属（Alternaria Nees ex Wallr.）真菌、3 株曲霉属（Aspergillus Micheli ex Fr.）真菌和5 株镰刀属（Fusarium LK. ex Fr.）真菌。其中,黑附球菌（E. nigrum）为甜瓜中首次发现的病原菌,而草酸青霉菌（P. oxalicum）、细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）、泡盛曲霉菌（Aspergillus awamori）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）、轮状镰刀菌（F. verticillioides）和燕麦镰刀菌（F. avenaceum）分别为甜瓜上分离到的青霉属、链格孢属、曲霉属和镰刀属的新菌株。     

甘蓝型油菜EMS突变体库构建及抗除草剂突变体筛选

为了利用诱变技术快速创造变异类型丰富的油菜新材料用于油菜遗传改良，分别用0．4％、0．8％、1．O％和1．2％的EMS（甲基磺酸乙酯）溶液对甘蓝型油菜中双9号种子进行诱变处理。结果发现：（1）1．0％的EMS溶液是处理中双9号干种子的最适浓度，4种不同浓度处理M：表型变异率依次为11．26％、14．82％、27．19％和12．38％；（2）EMS诱变具有器官特异性；（3）M：突变体库中筛选到3株苯磺隆抗性突变体，突变率约为10^-4。现已创建了包括子叶、叶片、花器、株型、角果等多器官变异类型的突变体库，为油菜遗传研究提供了丰富的种质资源。     

外源ABA和BR在提高油菜幼苗耐渍性中的作用

以甘蓝型油菜中双9号为植物材料,应用外源脱落酸（ABA）和油菜素内酯（BR）处理渍水胁迫的油菜幼苗,研究其在缓解油菜幼苗渍水伤害中的作用。结果显示,短期（0～12d）渍水处理可促进油菜生长,长期（18d）渍水处理则抑制油菜生长;叶面喷施ABA（75.67μmol/L）和BR（0.21μmol/L）可有效缓解长期渍水胁迫对油菜幼苗的伤害作用,干物质积累量较单纯渍水处理增加19.52%和26.22%;外源ABA和BR处理还可延缓叶绿素含量的降低,提高叶片光合能力;提高抗氧化酶（SOD、POD和CAT）活性,降低膜脂过氧化（MDA含量降低）;增加叶片可溶性糖含量。说明外源ABA和BR处理通过促进渍水胁迫下油菜幼苗光合作用,提高抗氧化酶活性,提高渗透调节物质含量来增强植株抗渍能力。     

反相高效液相色谱法测定油料饼粕氨基酸含量

采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定油料饼粕氨基酸含量,条件为:C₁₈（4.6mm×250mm,5μm）柱,流动相A为0.1mol/L的醋酸钠（pH6.5）-乙腈溶液（V/V185:14）,流动相B为80%乙腈水溶液（V/V）,流速为1mL/min,梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温40℃。比较花生、菜籽和棉籽等饼粕样品中氨基酸组成和含量,分析结果表明菜籽饼粕氨基酸组成最合理,棉籽蛋白氨基酸含量最高。     

人工合成油菜与栽培油菜F1主要性状的杂种优势

以4个人工合成甘蓝型油菜（Resynthesized rapeseed lines,RS）与4个栽培油菜（Brassica napus,BN）为亲本,按Grifings I法进行完全双列杂交,将产生的56个F1组合分为人工合成种×人工合成种（RS×RS）、人工合成种与栽培油菜杂交种（NRF1）和栽培油菜×栽培油菜（BN×BN）三种类型,并系统分析NRF1农艺性状和产量性状的杂种优势。结果表明,与对照中双10号（ZS10）相比,NRF1在株高、分枝高、分枝长、分枝数和主花序长等农艺性状表现出较高的优势。32个NRF1组合的单株产量中,有7个表现正向对照优势,占22%,其中05R1×XY15的单株产量为24.47g,在所有参试材料中居第二位,说明人工合成甘蓝型油菜杂种优势具有利用可能性。产量组成因子分析结果表明,NRF1的平均单株角果数（436.96）极显著高于RS×RS（416.19）和BN×BN组合（370.89）;千粒重在三种类型组合中无显著差异;每角粒数则表现为BN×BN（17.35）〉NRF1（11.58）〉RS×RS（8.28）,说明每角粒数是NRF1杂种产量与产量杂种优势的主要限制因子。     

氮素形态对冬油菜幼苗生长的影响

通过营养液培养试验研究了硝态氮（NO3-）和铵态氮（NH4＋）不同搭配比例对甘蓝型油菜中双9号幼苗生长的影响。试验设5个处理：NO3-∶NH4＋分别为100∶0（N1）、75∶25（N2）、50∶50（N3）、25∶75（N4）和0∶100（N5）。结果发现,与N1处理相比,油菜幼苗干重、根长、根表面积、根体积、氮（N）含量及N积累量、硝酸还原酶活性等指标均以N2处理最高,之后随着营养液中NH4＋比例的升高而显著降低。而光合色素含量、铁（Fe）和锌（Zn）浓度却随营养液中NH4＋的添加而显著升高,锰（Mn）浓度随NH4＋的添加而显著降低。说明中双9号属于喜硝态氮的作物,在供应NO3-时搭配适量的NH4＋更有利于其生长,但是当NH4＋比例超过50%时,则会显著抑制其生长。     

菜籽蛋白水解物及其膜分离组分的体外抗肿瘤活性研究

应用胃肠道蛋白酶水解菜籽分离蛋白,并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子量组分(1 kDa、1~3 kDa、3~5 kDa和5~10 kDa);研究了水解物和不同组分对HepG2、HeLa和MCF-7三种肿瘤细胞的体外增殖抑制作用及其氨基酸组成。结果表明:水解物及各组分对HepG2体外增殖具有较明显的抑制作用,而对HeLa和MCF-7体外增殖的抑制效果不明显;1kDa的组分对HepG2的抑制率最强(36.4%),其氨基酸组成中以谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸含量最高。研究认为,菜籽蛋白胃肠道蛋白酶水解物及其1 kDa的膜分离组分可能作为功能性成分用于抗肿瘤相关的功能食品和保健品的开发。     

油菜根肿病菌拮抗微生物的筛选及其防治效果测定

以寻找对油菜根肿病菌具有生物防治作用的拮抗微生物为主要目的,采集茶树、红豆树、银杏树、白菜和油菜的根际土壤及根、茎、叶、枝条等样品进行分离,通过测定根肿病菌休眠孢子接种这些微生物后的萌发率来筛选拮抗菌株,并在室内盆栽及大田试验中评价了10株拮抗微生物的防治效果。实验共分离出细菌421株、真菌155株、放线菌368株,使休眠孢子萌发率低于45%的菌株仅分别占5.46%、0.65%、4.35%。其中放线菌A316、A10和真菌T1对根肿病的生防潜力最大,对休眠孢子萌发的抑制率分别高达77.11%、72.54%、69.01%,室内盆栽防效分别为73.60%、70.94%、67.10%,大田防效依次达65.84%、59.59%、61.24%。     

SSR荧光标记毛细管电泳法与国家冬油菜区试指纹鉴定平台的构建

为了油菜品种指纹检测的精确性及未来构建大规模油菜新品种指纹数据库,应用SSR荧光标记毛细管电泳检测法构建国家冬油菜区试指纹鉴定平台。以40对荧光引物对2012-2013年度163份国家冬油菜区试参试品种（系）进行分析。结果共检测到42个等位位点和131个等位变异。其中A基因组（n1～n10）检测位点25个,C基因组（n11～n19）检测位点17个。每个位点等位变异数从2到6不等,平均为3.02。42个检测位点的PIC值变化范围在0.10～0.69之间,平均值为0.36。其中引物BRGMS171的杂合度、PIC值分别高达0.67、0.70,可考虑作为以后区试杂交种纯度鉴定的核心标记。SSR位点的纯合度分析得出本年度18份常规种平均纯合度为81.9%,145份杂交种为57.9%。以131个等位变异计算品种（系）间DICE相似系数,163份品种（系）间平均遗传相似系数变幅为0.607～0.765,变幅最大的为品种（系）FC03（0.438～0.879）,变幅最小为品种（系）宜油21（0.611～0.806）。     

钾肥用量对油菜产量及钾素利用效率的影响

通过11个大田试验研究了钾肥用量对油菜产量、养分含量、养分累积量及钾肥利用效率的影响。结果表明,施钾（K2O）60、120和180kg/hm2与不施钾相比平均籽粒产量分别增加16.9%、21.6%和19.8%,籽粒含钾量增加2.7%、9.0%和7.8%,植株地上部钾素总累积量提高42.9%、63.0%和82.2%。说明施钾能提高油菜籽产量、提高油菜对钾素吸收和累积。油菜钾肥农学利用率、偏生产力、表观利用率和生理利用率均随钾肥用量的增加而显著下降,100kg籽粒需钾量随钾肥用量的增加而增加。综合结果表明,湖北省油菜钾肥高产高效生产的推荐使用范围为60～120kg K2O/hm2。