芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂代谢的影响

研究乳酸菌发酵大麦提取物(LFBE)对3T3-L1前脂肪细胞分化及其脂代谢的影响与作用途径。利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum dy-1)发酵大麦获得LFBE,采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量;凯氏定氮法测定蛋白质含量与苯酚硫酸法测定多糖含量;采用CCK-8法检测细胞增殖能力和油红O染色法分析前脂肪细胞的分化程度;采用Realtime PCR法检测LFBE对脂代谢关键基因转录水平的调控作用。结果表明,与未发酵大麦提取物相比,LFBE中总酚含量增加了20.88%;LFBE中蛋白质含量从发酵前的13.93%增加至34.94%;多糖含量从未发酵时的64.94%下降至35.43%。与未发酵大麦提取物组相比,LFBE能够有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长,其IC_(50)约为560μg/mL;与模型组和未发酵大麦提取物组相比,400μg/mL LFBE能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制率达到58.85%。与模型组相比,LFBE能显著抑制脂代谢关键基因C/EBPα、PPAR-γ、SREBP-1c、PTP1B和aP2的mRNA表达水平,上调GLUT4的mRNA表达水平(p0.05)。LFBE可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并通过调节脂代谢相关基因的转录水平抑制其分化,表明其可能具有预防肥胖的作用。     

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积研究

研究表明苦瓜具有一定减肥效果,但其确切分子机理尚未阐明,因此本实验研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉积活性及其作用机制。针对3T3-L1脂肪细胞,利用噻唑蓝法检测苦瓜正丁醇提取物对细胞活性影响;采用油红O染色检测苦瓜正丁醇提取物对细胞脂肪沉积的影响;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测苦瓜提取物对脂肪沉积转录因子和脂肪酸代谢关键基因mRNA转录水平调控作用。结果表明：相对空白对照组,苦瓜提取物能明显减少3T3-L1细胞脂肪沉积,抑制转录因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表达,对脂肪酸代谢基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表达抑制明显（P＜0.05）。总之,苦瓜正丁醇提取物对脂肪沉积具有一定抑制作用,可能通过下调脂肪沉积相关基因mRNA转录水平表达起作用。     

代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

白藜芦醇通过降低LYRM1 mRNA表达抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖

目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响,并探讨其机制。方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行培养,分别设置对照组以及25、50、75、100 μmol/L的Res干预组,噻唑蓝比色法观察不同剂量干预对细胞增殖活性的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中LYR Motif containing 1（LYRM1）基因mRNA的表达情况;Western blotting实验检测细胞中促凋亡蛋白Bak和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果：Res干预可使3T3-L1前脂肪细胞增殖活性降低;细胞中LYRM1 mRNA水平降低,Bak蛋白表达含量升高,Bcl-2蛋白表达含量降低,均具有剂量依赖效应。结论：Res可以抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,这可能与Res降低细胞内LYRM1 mRNA表达,影响线粒体功能并启动凋亡程序有关。     

绿茶成分对3T3-L1细胞的细胞增殖及脂肪代谢的影响

目的:研究绿茶成分——儿茶素、咖啡碱和茶氨酸对3T3-L1前脂肪细胞的细胞增殖及脂肪代谢的影响。方法:测定不同浓度儿茶素、咖啡碱和茶氨酸对3T3-L1细胞增殖的影响,确定无毒性浓度。在分化诱导液中添加各绿茶成分后对3T3-L1细胞进行96h诱导分化,分化后第6天测定脂肪细胞中甘油三酯(TG)含量。细胞分化后第9天,单独添加绿茶成分或同时添加去甲肾上腺素(NA)24h,分析对细胞中脂肪分解的影响。结果:添加20μg/mL以上质量浓度的儿茶素能显著抑制3T3-L1细胞增殖,但质量浓度40,80μg/mL的儿茶素对3T3-L1细胞有毒性作用,而160μg/mL咖啡碱和茶氨酸对细胞增殖无明显影响。20μg/mL儿茶素能显著抑制3T3-L1细胞中TG的合成,而咖啡碱和茶氨酸对细胞脂肪沉积无明显影响。与单独添加NA相比,同时添加咖啡碱能显著促进NA诱导细胞中脂肪分解的能力。结论:儿茶素抑制脂肪细胞的增殖和脂肪沉积,咖啡碱促进激素诱导脂肪分解。绿茶成分中儿茶素和咖啡碱对脂肪细胞内的脂肪代谢有调节作用。     

双酚S暴露对秀丽隐杆线虫行为学及生长发育的影响

双酚S(BPS)作为双酚A(BPA)的替代物,在各个产品中(奶瓶、食品罐和热敏纸等)已经得到广泛应用,但是目前关于BPS的毒理学研究甚少。本文以BPS为研究对象,秀丽线虫为模式生物,分析其对运动行为能力及生长发育的影响。研究结果表明,急性毒性试验中,暴露浓度达到1μM时,运动行为学指标身体弯曲频率显著下降,暴露浓度达到10μM时,运动行为学指标头部摆动频率显著下降;随着浓度的增加,BPS还会影响秀丽隐杆线虫的寿命和子代数目,导致寿命缩短和子代数目的减少,BPS浓度达到100μM时,与对照组相比,寿命下降了35.42%,子代数目下降了30.47%;BPS暴露会导致秀丽线虫体内活性氧自由基含量显著上升,推测高浓度的BPS可能造成秀丽线虫的氧化损伤,进而影响运动行为能力、寿命及子代数量。     

胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

为建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型,以3T3-L1前脂肪细胞为研究材料,通过3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素联合诱导其分化为3T3-L1脂肪细胞,通过葡萄糖消耗实验研究胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的作用浓度和时间关系,发现10-7mmol/L胰岛素诱导处理48h是3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的最适条件,该细胞模型的胰岛素抵抗状态可维持48h。通过高浓度胰岛素成功诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,具有建模周期短、重复性好、操作简便的优点,该细胞模型可以用于抗胰岛素抵抗天然产物的筛选研究。     

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的：考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法：采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP）亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK）的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果：异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK mRNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论：异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。     

多不饱和脂肪酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

本文利用MTS比色分析法、细胞形态学分析法及诱导分化法结合油红染色比色分析法研究了α-亚麻酸(alpha-linolenic acid,ALA)、亚油酸(linoleic acid,LA)对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。MTS结果显示,在一定浓度范围内ALA、LA均能呈剂量依赖关系和时间依赖关系的抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,且ALA抑制增殖作用强于LA;细胞形态学分析结果显示,ALA、LA在高浓度时均显示出细胞毒性作用;倒置显微镜观察和油红染色检测结果显示,ALA、LA、ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)在12.5~200μmol/L浓度范围内均能浓度依赖式的抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且ALA抑制分化作用强于LA,但当浓度100μmol/L时,ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)的抑制分化作用强于同浓度的ALA,当浓度为200μmol/L时,比较ALA/LA摩尔比为1:4、1:2、1:1的混合脂肪酸抑制分化效果发现,比值为1:1的略强但相互之间效果差异不明显。     

笃斯越桔花青素提取物对3T3-L1前脂肪细胞生长抑制作用

目的：研究笃斯越橘花青素提取物对3T3-L1 前脂肪细胞生长抑制作用及其作用机理。方法：采用MTT法观察细胞生长抑制并确定半数抑制浓度(IC50),LDH(lactate dehydrogenase)法评价提取物引起的细胞膜损伤,流式细胞计法测定细胞周期,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果：笃斯越橘花青素提取物能够有效地抑制3T3-L1 前脂肪细胞的生长且IC50 约为214μg/mL;LDH 实验表明细胞LDH 释放率在24、48、72h 分别为89.0%、85.2%、67.8%,72h 时相对24h 或48h 明显降低(P ＜ 0.05),提取物对3T3-L1 前脂肪细胞膜的通透性未见明显增加;笃斯越橘花青素提取物能够有效诱导细胞凋亡,同时在S 或G0/G1 期产生阻滞,但是对细胞的G2/M 期未见明显影响,荧光显微镜观察细胞出现典型凋亡特征。结论：笃斯越橘花青素提取物能有效抑制3T3-L1 前脂肪细胞生长的作用,具有开发为天然抗肥胖功能因子的潜在可能。     

3T3-L1前脂肪细胞在功能性成分评价中的应用

脂肪细胞的增殖与分化异常是导致人类肥胖、心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等的发生的主要原因,而3T3-L1前脂肪细胞是国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型,因此脂肪细胞的增殖与分化已成为研究的热点。本文主要论述3T3-L1前脂肪细胞的体外培养、增殖与分化及调控及其在功能性成分的评价中的应用,以期为预防和治疗肥胖及糖尿病等并发症提供一定的理论参考。     

多花黄精提取物体外干预3T3-L1前脂肪细胞并缓解其脂质积累

研究多花黄精提取物对3T3-L1前脂肪细胞以及分化后成熟脂肪细胞的作用。用φ=70%乙醇和复合酶（纤维素酶:木瓜蛋白酶=3:7）为提取剂，分别提取出多花黄精生品乙醇提取物（Raw Products Extract，RPE）、多花黄精九蒸九制品乙醇提取物（Processed Products Extract，PPE）和多花黄精生品多糖（Polysaccharide from Polygonatum cyrtonema Hua，CPP），得到的九蒸九制品提取物中多糖质量百分比减少（RPE 29.83%，PPE 1.92%），但表现出更高的皂苷、总黄酮和总酚含量（13.63%、5.37 mg/g、14.52 mg/g）。各多花黄精提取物处理3T3-L1细胞后，均观察到3T3-L1前脂肪细胞被阻滞在G0/G1和S期，细胞被诱导凋亡从而抑制细胞的增殖，成熟脂肪细胞内脂滴沉积累量和甘油三酯（Triglyceride，TG）所占比例显著降低，且高剂量组的PPE（380 µg/mL）对降低TG占比的效果最显著，与市售多花黄精九蒸九制品多糖（Polysaccharides from Purchased Products，PP）无显著差异。此外，脂肪生成和脂肪酸氧化有关基因也可受到调控，包括抑制PPARγ、C/EBPα、FABP4和LPL的mRNA表达，促进CPT-1的mRNA表达。结果提示，多花黄精提取物可防止脂肪细胞在体外积聚脂肪，表明多花黄精可能具有抗肥胖作用。     

染料木黄酮抑制3T3-L1细胞成脂分化机制

目的：研究染料木黄酮是否通过雌激素受体介导影响3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,并探讨其可能的机制。方法：以不同浓度染料木黄酮处理3T3-L1细胞,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中分别加入不同浓度染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780（一种雌激素受体抑制剂）混合物及不同浓度雌二醇,油红染色观察分化结果,测定细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量;染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780混合物及不同浓度雌二醇处理诱导成熟后的脂肪细胞,测定培养液甘油含量;分别用染料木黄酮（30 μmol/L）、染料木黄酮（30 μmol/L）和ICI182780混合物干预细胞成脂分化,Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）蛋白表达量。结果：3T3-L1细胞存活率随染料木黄酮浓度的升高而降低,50～200 μmol/L染料木黄酮能抑制细胞生长（P＜0.01）;染料木黄酮能负向调节成脂分化后细胞胞浆内TG含量,在0～50 μmol/L浓度范围内呈剂量依赖关系,高剂量雌二醇（100 nmol/L）能下调TG含量;染料木黄酮能促进成熟脂肪细胞脂解,提高细胞培养液甘油浓度;染料木黄酮（30 μmol/L）能上调p-AMPK、HSL蛋白表达,下调FAS蛋白表达（P＜0.01）,对ERK、p-ERK、AMPK表达量无明显影响（P＞0.05）。ICI182780（1 μmol/L）能部分阻断染料木黄酮（30 μmol/L）对p-AMPK的调节作用（P＜0.05）。结论：染料木黄酮能抑制3T3-L1细胞成脂分化,其机制可能是染料木黄酮一方面下调FAS蛋白表达,抑制脂肪合成,另一方面激活AMPK-HSL途径促进脂肪分解;染料木黄酮还可能通过非雌激素受体途径抑制3T3-L1细胞成脂分化。