漆酶固定化及其性质研究

本文就漆酶的固定化及固定化酶的性质作了初步研究。利用明胶和海藻酸钠的聚合作用与海藻酸钙凝胶球的包埋作用制备固定化漆酶．结果表明：固定化酶米氏常数Km为12.0mg／ml，游离酶米氏常数Km为7．0mg／ml，固定化酶最适温度为40℃，游离酶为30℃．同时固定化酶明显提高了游离酶的耐热性、储藏稳定性和操作稳定性。     

固定化糖化酶的研究

文中就糖化酶的固定化固定化酶的性质作了初步研究,利用明胶和海藻酸钠的聚合作用与海藻酸钙凝胶球的包埋作用制备定化糖化酶,结果表明：固定化酶米氏常数Km为12．3mg/ml,游离酶米氏常数Km为7.5mg/ml,固定化酶最适温度为70℃,游离酶为60℃,同时固定化酶明显提高了游离酶的耐热性,储藏稳定性和操作稳定性。     

壳聚糖微球固定化葡萄糖氧化酶的研究

以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定葡萄糖氧化酶,对葡萄糖氧化酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1g壳聚糖微球与5ml5%戊二醛交联,固定6mg葡萄糖氧化酶,在此条件下酶活力回收可达60%。固定化酶的最适温度为50℃,最适pH为6.0,通过Lineweaver-Burk作图,确定动力学参数Km值为18.3mmol/L,表观米氏常数较游离酶有所降低,固定化酶的热稳定性较游离酶明显提高,该固定化酶具有良好的操作及保存稳定性。     

金针菇漆酶的固定化及其性质研究

采用海藻酸钠包埋法制备固定化漆酶,结果表明,固定化pH值为4.5,海藻酸钠与CaCl2质量浓度均为2％,酶液与海藻酸钠体积比为1∶1时,漆酶的固定化效果最佳,酶活回收率为48.6％.固定化酶的最适pH值为3.0,最适温度为40℃,米氏常数Km为21.5μmol/L,游离酶的最适pH值为3.0,最适温度为30℃,米氏常数Km为18.6μmol/L,与游离酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显提高,耐酸性略有增加,最适反应温度提高了10℃.     

壳聚精固定胰蛋白酶的研究

以自制壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂将胰蛋白酶固定化。5％戊二醛在30℃下处理载体8h,加10ml酶液（0．3mg／ml,pH7．0）固定12h以上,活力回收率达67％－75％。固定化酶的表观米氏常数（酪蛋白）k’m=22．22mg／ml,而游离酶k’m=4.17mg／ml;固定化酶最适温度为80℃,比游离酶提高了30℃;固定化最适pH值为7．5,而游离酶为8．0;固定化酶的贮存稳定性很好,二个多月重复使用,酶活力未见明显下降。     

氨基化硅胶作载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5 种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α- 淀粉酶。对制备固定化α- 淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH 值的影响因素进行了研究和优化。并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较。结果表明：固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶。与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善。固定化酶的Km 值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml。     

氨基化硅胶载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α-淀粉酶.对制备固定化α-淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH值的影响因素进行了研究和优化.并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较.结果表明:固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶.与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善.固定化酶的Km值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml.     

固定化蔗糖酶的研究

利用海藻酸钙凝胶球的包埋作用制备固定化蔗糖酶，并对其性质进行了初步研究，结果表明，游离酶被固定化后，最适pH值为4.0，最适温度为60℃。在高pH值（pH8）和高温下，固定化酶比游离酶更稳定；固定化酶的米氏常数（Km=49.05mmol/L）略大于游离酶（Km=45.45mmol/L）；同时固定化酶明显提高了游离酶的储藏稳定性和操作稳定性。     

壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的特性及应用的初步研究

以壳聚糖凝胶颗粒为载体,采用共价键偶联法固定绿豆乳糖酶,研究壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的酶学性质并对其进行水解牛乳中乳糖的初步应用研究。结果表明：固定化酶的热稳定性在4～55℃范围内;最适温度60℃;最适pH3.5;固定化酶的表观米氏常数Km 为0.04%,溶液酶米氏常数Km 为0.33%,是溶液酶米氏常数Km 的0.12 倍;固定化酶的操作半衰期为30d,较溶液酶长。用固定化酶制备填充床式反应器水解牛奶中乳糖,水解率可达60% 以上。     

海绵态壳聚糖固定化单宁酶及其酶学性质研究

以海绵态壳聚糖为载体,0.25%戊二醛为交联剂固定化单宁酶,确定固定化酶的最佳工艺参数为:给酶量6mg/g载体、固定化pH5.0、固定化温度4℃、固定化时间8h.制备的固定化单宁酶Km为3.83mmol/L,而游离酶的Km为33mmol/L.固定化酶的热稳定性、酸碱稳定性均高于游离酶,稳定pH范围向酸性方向偏移.     

功能化水刺粘胶纤维膜的制备及其在漆酶固定化中的应用

针对现有材料对漆酶的负载率低,负载漆酶后重复使用性能差等缺点,以甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为单体,采用原子转移自由基聚合(ATRP)技术对工业化生产的水刺粘胶纤维膜进行改性处理,然后将改性后的水刺粘胶纤维膜 (即SV-poly(HEMA))进行Fe³⁺吸附,最后将吸附Fe³⁺后的SV-poly(HEMA)(即SV-poly(HEMA)- Fe(Ⅲ))作为配位法固定漆酶的载体,探究其对漆酶固定化的含量、活性、稳定性和重复使用性能,同时对纤维形貌和结构进行表征。结果表明:SV-poly(HEMA)-Fe(Ⅲ)对漆酶的固定化量达到132.9 mg/g;与自由漆酶相比,固定化漆酶对温度变化(20~70 ℃)表现出更强的抵抗力,对pH值(2.0~7.0)表现出更低的敏感性;将负载漆酶的SV-poly(HEMA)-Fe(Ⅲ)重复使用10次后,漆酶的活性依然保持在55%以上。     

固定漆酶与游离漆酶对造纸废水深度处理的研究

用固定漆酶和游离漆酶对造纸废水进行深度处理,重点分析了两种不同状态的酶在不同反应时间、温度、pH值下对造纸废水的CODCr和色度的去除率。结果表明:游离漆酶在处理废水时,最佳反应时间为8 h,最佳反应温度为55℃,最佳反应pH为5;固定态漆酶在处理废水时,最佳反应时间为6 h,最佳反应温度为50~55℃,最佳反应pH为4;通过对废水处理的效果对比,固定漆酶的优点在于达到最佳效果的反应时间短,酶的稳定性高,温度耐受性强,pH适应性显著增强。     

漆酶的固定化及其在造纸废水处理中的应用

漆酶是(对)-二酚:双氧氧化还原酶,是多铜氧化酶中的一种含铜的糖蛋白氧化酶参与木素的降解或聚合,具有氧化木素的能力.固定化漆酶能够延长漆酶的使用寿命,提高漆酶的稳定性及其对环境的耐受性.因此,它具有比游离漆酶更好的使用性质.综述了近年来漆酶的固定化方法及其在造纸废水处理中的应用与研究现状.     

漆酶的固定化及其在造纸废水处理中的应用

漆酶(对-二酚:双氧氧化还原酶)是多铜氧化酶中的一种含铜的糖蛋白氧化酶.参与木素的降解或聚合,具有氧化木素的能力.固定化漆酶能够延长漆酶的使用寿命,提高漆酶的稳定性及其对环境的耐受性,因此它具有比游离漆酶更好的使用性质.综述了近年来漆酶的固定化方法及其在造纸废水处理中的应用与研究现状.     

固定化胰蛋白酶水解乌鸡肉制备功能肽的研究

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化胰蛋白酶,考察胰蛋白酶的固定化工艺,固定化酶水解乌鸡肉的工艺条件及固定化酶的稳定性。结果表明：固定化胰蛋白酶的最佳条件为：海藻酸钠浓度4%、加酶量10%、pH7.5、温度70℃,酶活力回收率为38.84%;水解乌鸡肉的最佳条件为：固液比1:3(m/V)、pH7.5、加酶量10%、温度60℃,氨基氮含量最高为2.18mg/ml,固定化酶重复使用8 次,酶活力仍保持50% 以上。     

新型交联剂三羟甲基磷固定化脂肪酶的研究

本试验研究了一种新型交联剂三羟甲基磷（THP）用于以纯棉浴巾载体、聚乙烯亚胺（PEI）为吸附剂的固定化脂肪酶制备新方法。通过单因子实验获得了固定化条件为：0.2 g浴巾使用0.5 mLPEI（浓度3.37 mg/mL,pH 7.0）、2 mLTHP（浓度为0.10%,V/V）、固定化温度为40℃、交联时间为20 min。制备的固定化脂肪酶催化正丁酸乙烯酯与戊醇酯交换反应,1 h底物转化率达92.1%,酶比活力达到15.80 U/g固定化酶。与戊二醛（GA）交联法制备的固定化酶相比,本固定化酶具有良好的重复使用稳定性、温度稳定性和高比活力,本试验采用的方法是一种低成本、实用性强的脂肪酶固定化新方法。     

Laccase and Mn-peroxidase production by Coriolus hirsutus strain 075 in a jar fermentor

The white-rot fungus Coriolus hirsutus strain 075 excretes considerable amounts of laccase and Mn-peroxidase into culture broth over a brief production time. The effects of agitation speed, temperature, aeration and inoculum amount on laccase production using a 10-l fermentor were studied. The optimum fermentation conditions were a 15% inoculum, an aeration rate of 0.88 vvm, an agitation speed of 160 rpm, and a temperature of 28 degrees C. By optimizing the fermentation conditions, the laccase activity reached 80+/-3 U/ml in 3 d and the purified enzyme output was 30 mg/l. The laccase and Mn-peroxidase were purified by means of isoelectrofocusing and ion-exchange chromatography. The pIs of the laccase isoenzymes were 4.2 and 4.5. Mn-peroxidase had only one isoenzyme with a pI of 3.2. The optimum pH was 4.5 for laccase with syringaldazine as the substrate and 5.0-5.3 for Mn-peroxidase with Mn(+2) and H2O2 as the substrates. The laccase and Mn-peroxidase retained 50% of their activities at 50 degrees C after 55 h and 12 h of incubation time, respectively.     

Preparation of immobilized Trametes pubescens laccase on a cryogel-type polymeric carrier and application of the biocatalyst to apple juice phenolic compounds oxidation

A new biocatalyst was prepared by the immobilization of a Trametes pubescens laccase, into a wide-pore poly(vinyl alcohol) cryogel. The known enzyme was produced and purified by the previously described procedure. The resulted laccase (yield 40%) has an activity of 46.4 U mg⁻¹ and 12.51 mg mL⁻¹ protein content. The enzyme was subsequently immobilized in a functionalized macroporous cryogel beads by a covalent immobilization technique. The time dependence of the immobilization process and the enzyme loading of the carrier material (5.2 mg g⁻¹ cryogel) were determined by measuring the decrease of protein amount in the enzyme solution. In conversion experiments, a higher stability of the immobilized biocatalyst compared to the free enzyme was evidenced. Steady-state kinetic characterization of four phenols (catechol, caffeic and chlorogenic acids, and catechin) has been performed with free and immobilized laccase, the catalytic parameters being determined and compared. The effect of both laccases (free and immobilized) on the phenol content of retailed apple juice samples, having the same initial composition, was also investigated by working in batch conversion. The variation in phenolic compound content has been compared with that of an untreated apple juice sample having initially the same content of phenolic compounds. A number of advantages resulted in using the immobilized laccase for the apple juice treatment (conservation to some extent of enzyme activity, higher content of phenols preserved, easy separation of the enzyme from the apple juice, therefore avoiding the possible unhealthy effects due to the remaining protein, etc.).     

转谷氨酰胺酶在尼龙网上的固定化及其酶学性质的研究

以硫酸二甲酯活化后的尼龙网为载体,戊二醛为交联剂固定转谷氨酰胺酶,并对固定化条件及固定化酶的酶学性质进行研究。结果表明固定化的最适条件为：1cm2 处理后的尼龙网与20ml 7% 的戊二醛交联5h 后,在4℃条件下固定10ml 1.5mg/ml 的转谷氨酰胺酶溶液6h,此条件下酶活回收率达到46%。固定化转谷氨酰胺酶相对于游离酶具有更好的热稳定性,并具有良好的储存性及操作稳定性。