一种苗期鉴定烟草赤星病抗性的新方法

烟草赤星病抗性的高通量鉴定是快速筛选和培育烟草抗赤星病品种的前提条件。以15份对赤星病表现不同抗性水平的烟草种质为材料,采用链格孢菌菌饼接种苗期离体叶片,以发病叶片病斑面积作为抗性评价指标,对15份烟草种质的抗性进行评价,并与其田间成株期赤星病抗性进行比较分析。结果表明,采用苗期菌饼接种,供试15份烟草种质的病斑面积差异显著,感病品种病斑平均面积明显大于抗病品种;各品种苗期赤星病鉴定结果与成株期抗性鉴定结果基本一致,且苗期病斑面积大小与3个不同年份、同一地点的成株期平均病级指数间相关性均达到显著水平,分别为0.78、0.74和0.66。表明本研究探讨的苗期离体叶片菌饼鉴定法可以用于烟草赤星病早期鉴定,病斑面积可以作为评价指标准确反映不同烟草品种间赤星病的抗性差异。     

大豆品种Maple Arrow耐菌核病生化机制

以世界公认的菌核病抗性品种Maple Arrow以及感病品种合丰25为材料,在大豆V1期进行活体接种,比较不同抗感材料在接种核盘菌后的72h内6个时间点的菌丝扩展速度和4种生化酶活性,旨在明确MapleArrow抗菌核病的生化机制,为抗病育种提供依据.扫描电镜结果表明,抗感品种在侵染后0～72h对病原菌的抗性差异明显,接种前期病原菌在Maple Arrow叶片上的扩展速度明显低于合丰25.接种后期,Maple Arrow叶片病健交界明显,菌丝体周围寄主组织结构保持相对完整;合丰25叶片布满菌丝体,叶片结构崩溃.动态生化指标测定结果表明抗感品种在过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、超氧化物歧化酶（SOD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性均不同程度的高于对照组.接种后24h Maple Arrow的PPO活性显著高于感病品种;接种后48h Maple Arrow的POD和PAL的活性增加幅度显著高于合丰25.由此得出结论,抗病品种Maple Arrow的保护酶系统对核盘菌侵染的响应比感病品种合丰25更为活跃,四种保护酶中的PPO、POD和PAL是两种抗性差异的关键因子,其中PPO主要作用于感染前期,POD和PAL主要作用于后期.     

向日葵菌核病田间接种方法及品种抗病性研究

为建立有效的向日葵菌核病田间接种鉴定方法,以菌核病菌菌丝体悬浮液和高粱粒菌丝体作为接种物,分别对不同抗感向日葵品种在始花期和盛花期进行人工接种,从而筛选出最佳接菌物类型、浓度及接种时期,并用此方法对52个品种进行抗性评价。试验结果表明：两种接种物均可使向日葵感病品种产生盘腐症状。用菌丝体悬浮液接种时,7．5～15．0 g／L浓度即可区分出向日葵品种间抗感性差异。始花期接种较盛花期可获得更高的发病率及病情指数。同时筛选出5个对盘腐型菌核病表现抗病的向日葵品种。本研究所建立的田间接种方法能够有效地对向日葵进行抗菌核病筛选和鉴定。     

黑龙江省烟草野火病菌生理小种鉴别寄主的筛选

为明确黑龙江省烟草野火病菌生理小种的分化情况,采用针刺接种法,将黑龙江省主要烟区采集的15个烟草野火病菌菌株接种到28个供试烟草品种上,通过对发病率的差异性分析和聚类分析来测定供试烟草品种的抗性表现,从而建立了一套鉴定烟草野火病菌生理小种的鉴别寄主体系,并将15个供试菌株划分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ4个生理小种.     

甘蓝型油菜BnERF50的超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性

从接种核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF（乙烯相应转录因子）保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h后,该基因的表达量被诱导显著上调。在它的超表达转基因拟南芥中,病原相关蛋白（PR）防御素基因PDF1.2和几丁质酶基因ChiB的表达量升高,对腐生营养型真菌核盘菌的抗性显著增强。     

植株内水杨酸诱导表达与花生网斑病抗性的关系

为探讨水杨酸（SA）在花生网斑病诱导抗性中的作用,采用ELISA方法测定花生植株不同生长期、不同位置叶片及不同组织中内源SA含量,然后将2％的网斑病菌培养滤液喷施于花生叶片上,研究诱导接种后叶片中SA含量变化与诱导抗性的关系。结果表明：未诱导接种花生生长中期叶片及根组织中SA含量相对稳定,各品种间差异不显著,但叶片中SA含量显著高于根中含量;诱导处理叶片和临近非处理叶片SA含量变化曲线都有两个高峰值,第一个高峰值出现时间和峰值大小叶片间差异不明显,而第二个高峰值出现时间及大小和叶片位置关系密切。初步确定SA在花生网斑病抗性及信号转导中发挥着重要作用。     

延边烟区烟草菌核病病原菌鉴定及抗性种质筛选

为防控延边烟区烟草菌核病提供基础资料和理论依据,开展了病原菌鉴定及抗性种质材料筛选研究。将收集的病原菌核采用常规方法进行分离、纯化,经致病性测定、形态学特征观察、rDNA-ITS测序比对及基于rDNA-ITS序列的系统发育分析,鉴定病原菌种类;并采用离体叶片法、活体叶片法对61份种质材料进行抗性筛选。结果表明：（1）经形态学、分子生物学方法鉴定该病原菌为核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary]。（2）两种方法筛选出31份高感材料、6份中感材料、15份抗病材料,鉴定结果一致率为85.25%,未筛选到免疫和高抗种质材料。延边烟区烟草菌核病病原菌为核盘菌,离体叶片法、活体叶片法可用于苗期烟草种质材料对菌核病抗性筛选。     

酶活性变化在萝卜抗TuMV分析鉴定中的应用

不同萝卜品种接种抗感芜菁花叶病毒 (TuMV )后 ,测定不同时期叶片中的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶 (PPO)、苯丙氨酸裂解酶 (PAL)的活性 .结果表明 ,抗病品种POD活性的略低于感病品种 ,接种后POD活性升高 ;抗病品种PPO活性比感病品种高 ,接种后抗病品种PPO活性迅速升高 ,与抗性呈正相关 ,可以作为抗性大小的衡量指标 ;抗病品种PAL活性比感病品种高 ,接种后变化无规律 .     

甘蓝型油菜抗菌核病研究进展

由真菌核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）引起的油菜菌核病是世界范围内最严重的病害之一,也是影响油菜高产稳产的丰要生物逆境.选育抗菌核病油菜品种并在生产上大面积种植是防控菌核病最经济有效和环保的途径.本文从核盘菌的致病机理、油菜抗菌核病的遗传控制、抗病基因表达谱和抗性相关基因的应用等方面综述了油菜抗菌核病研究有关的最新进展.     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定食品真菌影响因素的探讨

目的探讨培养基成分、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析真菌的影响以及该法鉴别产毒和非产毒真菌的可能性。方法(1)实验模式菌株红曲菌分别接种于查氏酵母提取粉琼脂培养基(CYA)和麦芽提取粉琼脂培养基(MEA),曲霉属分别接种于CYA、查氏琼脂培养基(CA)、马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(PDA)和麦芽汁琼脂培养基(MA),青霉属分别接种于CA、CYA和MA培养基,镰孢菌属分别接种于CA、MA和PDA培养基,培养10d(红曲菌)和7d后进行MALDI-TOF-MS分析;(2)模式菌株寄生曲霉接种于PDA培养基,在培养5、7、10和14d时进行MALDI-TOF-MS分析;(3)产毒和非产毒(或低产毒)红曲菌和黄曲霉分别接种于MEA和PDA培养基,培养7d后进行MALDI-TOF-MS分析。结果CYA、PDA、CA和MA分别是红曲菌、曲霉属黄绿组和镰孢菌属、曲霉属黑色组、青霉属进行MALDI-TOF-MS分析的最适培养基;真菌进行MALDI-TOF-MS分析的最佳培养时间为7d;从MALDI-TOF-MS质谱图上尚不能区分红曲菌高产毒株和低产毒株;黄曲霉产毒株和非产毒株的质谱图各异。结论MALDI-TOF-MS进行真菌鉴定时必须对培养基、培养时间进行标化。     

广西烟草一种斑枯病新病原菌的鉴定

为明确导致广西田林县烟草叶片斑枯的病原菌种类,采用组织分离法对典型发病叶片的病原菌进行分离,并以菌丝块接种法测定分离物的致病性。用PDA和V8培养基培养并观察其形态特征,再将其rRNA-ITS和TUB2序列联合进行分子鉴定。结果表明,分离获得的代表菌株可致烟草叶片发病,在PDA培养基上不能产孢,在V8培养基上培养可形成分生孢子器和分生孢子。分生孢子器近球形,直径70～150μm。分生孢子为单胞,无色,呈椭圆形,平均大小7.1μm×2.7μm。代表菌株的rRNA-ITS和TUB2序列Blastn比对及系统进化树分析显示,其与木瓜拟多隔孢（Stagonosporopsis caricae）的相似度分别为99.61%和100%,与S. caricae归为同一分支。结合致病性和形态特征,将广西烟草斑枯病的病原菌鉴定为S. caricae。     

烟草品种对TMV抗性差异的比较研究

对不同遗传类型的7个烟草品种设计水杨酸（SA）预处理与对照,而后进行TMV接种和挑战接种,调查这些品种的响应程度,发现对TMV侵染的响应可分为花叶和枯斑反应2种类型,在两个对TMV侵染具有系统获得抗病性（SAR）特性的烟草品种中,品种HZNH在病斑数量、形态及大小等方面与前人已沿用多年的品种Xanthi-nc存在明显差异,且两者对于SA预处理后再接种的响应也不一样。     

人工microRNAs干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

基于本研究室自主开发的油菜防御cDNA芯片分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达。序列比对发现,该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,后者编码289个氨基酸,功能未知。本研究用花序浸染法将At3A06基因的人工微RNA（amiRNA）干扰载体（该载体包含一个除草剂草胺磷抗性基因）转化拟南芥。经草胺磷筛选获得3株T1代转基因植株,PCR检测均为阳性;荧光定量PCR检测表明,与野生型对照相比,3个转基因植株的At3A06基因的表达量均显著降低;对其T2代进行菌核病抗性鉴定,结果显示转基因株系对菌核病的敏感性均显著增强（P〈0.05）。推测At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性相关。     

影响向日葵菌核菌（Sclerotinia sclerotiorum）生长和毒素产生的条件研究

为探讨向日葵菌核菌生长和毒素产生的营养和环境条件,研究了在不同培养液、培养时间、培养温度、pH值、碳源、氮源条件下菌核菌生长和毒素的产生情况。结果表明,向日葵菌核菌菌丝生长和产生毒素所需的营养和环境条件不同。有利于菌丝生长的最佳培养液有PD、马铃薯麦芽糖培养液和Richard,最适生长温度为20℃,最适pH为4．0—8．0,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为NH4Cl。含有琥珀酸钠的培养液B最有利于菌核菌产生草酸毒素,草酸毒素积累的最适温度为25℃,最适pH为6．0～7．0,最佳碳源为乳糖,最佳氮源有天门冬酰胺和谷氨酸。菌核菌在最佳培养条件下培养10d后菌丝干重和草酸含量都达到最大值。     

一株银杏内生真菌红色素稳定性的研究

真菌色素是一个极具应用潜力的食用色素来源。一株从银杏枝条分离的内生真菌SX01,能产生大量的红色素,经鉴定该菌属于产紫青霉（Penicillium purpurogenum）。该菌在PDA液体培养基中静置培养后,经过离心、过滤可得到红色素,该色素为水溶性色素。通过分析红色素特征吸光值的变化,研究了光照、pH、温度、金属离子对该红色素稳定性的影响。结果表明,色素溶液对温度和光照较为敏感,色素在温度〈60℃的稳定性较高,但当温度上升至80℃以上后,色素稳定性较差。色素对光照较为敏感,长时间光照可以使色素色价大幅度下降,影响色素品质。该色素对pH是稳定的,色素提取液在pH10时色价甚至有所增高。金属离子对该色素稳定性影响较小,Zn2+有一定的增色效果,Cu2+、Al3几乎无影响,Fe2+和Fe3+对其有不良影响。     

TMV 侵染后烟草中信号分子水杨酸和过氧化氢的变化

以两个抗病品种、一个感病品种为材料,利用抗体和定位染色对 TMV侵染后烟草中的信号分子水杨酸和过氧化氢的时空变化进行检测。结果表明:接种 TMV能够诱导水杨酸(SA)含量的上升,到接种后 12h达到最大,且接种叶比同侧上部叶上升幅度要大,品种间存在差异;抗病品种接种 TMV能够诱导过氧化氢的产生,随着时间延长过氧化氢从局部向外扩散,而感病品种和磷酸盐缓冲液(PBS)对照不能激发过氧化氢的产生。      

一株突破va基因型烟草抗性的PVY病毒分离物的鉴定

  背景和目的  近来,能突破va基因型抗性的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)毒株在烟草上不断出现。2016年,我们分离到一株抗性突破的毒株PVY-CJ,本文对该病毒分离物进行了验证和鉴定。  方法  采用病毒重新接种、多重RT-PCR、RT-PCR分段扩增病毒全长基因组、PVY病毒分子进化分析及病毒蛋白VPg蛋白序列比对等方法对PVY-CJ毒株进行了验证和鉴定。  结果  三种重新接种了PVY-CJ的va基因型烟草品种均发病。多重RT-PCR结果将PVY-CJ鉴定为PVYNTN株系。序列分析表明,PVY-CJ全长基因组包含一个全长9180 nt的开放读框,其编码一个3060 AA的多聚蛋白。分子进化分析进一步验证了其归类于PVYNTN株系。相比其他PVYNTN株系毒株,PVY-CJ的VPg蛋白105位氨基酸出现了一个由赖氨酸到谷氨酸的替换,而这一氨基酸替换导致了其对va基因来源抗性的突破。  结论  我们首次报道并鉴定了国内一株能突破va基因型烟草抗性的PVY毒株—PVY-CJ。这为进一步研制PVY抗病烟草品种提供了材料。      

酸胁迫处理对鼠伤寒沙门氏菌抗酸性的影响

目的:以鼠伤寒沙门氏菌CGMCC 1.1190为试材,研究酸胁迫处理对其抗酸性的影响.方法:研究CGMCC 1.1190菌株经4种有机酸(柠檬酸、乳酸、醋酸和苹果酸)胁迫培养过程中其生长情况和形态的变化;对经4种有机酸胁迫培养至稳定期获得的耐酸性CGMCC 1.1190菌株在pH 2.5的强酸性基质中进行抗酸性分析;分...     

PDA培养基改良配方的研究

通过单因素和正交试验对PDA培养基配方进行改良。改良后的PDA培养基为:在PDA基础培养基中添加牛肉膏0.35%,酵母膏0.45%,玉米汁3.50%。同一米根霉菌株分别用改良PDA和基础PDA培养,结果表明,用改良PDA培养的菌种糖化酶活力为1374 U/g,基础PDA培养的糖化酶活力为1190 U/g。