高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的研究

研究了以醋酸纤维素/聚丙烯复合膜为载体的高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的固定化条件,采用响应面分析法对固定化条件进一步优化,并对固定化酶膜的酶学性质进行了讨论。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15 mol/L,活化为60 min时,浓度为0.013 g/mL的酶液与pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液于戊二醛质量分数0.24%,温度4℃下,进行交联反应,反应3.1 h后,获得的固定化酶活最高,为0.52 U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为:固定化酶最适温度35℃,最适pH为9.0。     

有机改性凹凸棒土交联吸附法固定化磷脂酶A_1研究

以有机硅烷偶联剂KH550改性凹凸棒土作为载体,在单因素试验基础上,研究固定磷脂酶A1最佳工艺条件。优化反应条件为:固定化反应时间5.5 h,固定化反应温度50℃,戊二醛浓度0.4%,体系pH 4.7,最终固定化酶酶活5,100~5,330 U/g。固定磷脂酶A1具有比游离磷脂酶更广温度范围和更宽pH应用范围,固定磷脂酶A1最适pH为5.3,而游离磷脂酶A1为4.8;固定磷脂酶A1在较低和较高pH酶活力均高于游离酶;在58℃处理0.5 h,固定化酶仍能保持高于85%酶活,而游离酶酶活则低于70%。     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究.固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×10 5,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%.固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08μmol/L.     

环氧化双醛氧化纤维素固定化β-半乳糖苷酶的研究

通过环氧氯丙烷和高碘酸钠依次对纤维素进行环氧化和双醛氧化,制得环氧化双醛氧化纤维素。以环氧化双醛氧化纤维素为载体固定化β-半乳糖苷酶,研究固定化酶的制备条件、酶学性质及微观结构。结果表明：固定化时间4h,固定化pH6.5,m酶:m载体=1:15时,固定化酶的活力最高为0.528U/g。与游离酶相比,β-半乳糖苷酶经过固定化后最适反应温度升高,热稳定性和耐酸碱性增强,米式方程分析表明,β-半乳糖苷酶经固定化后与底物的亲和力增加,固定化酶重复使用5次后,相对酶活力为64%。红外光谱和扫描电镜对固定化酶的微观结构研究表明,环氧化双醛氧化纤维素的环氧基和醛基与β-半乳糖苷酶的氨基发生共价反应形成固定化酶。     

海藻酸钠包埋法固定青霉产菊粉酶的研究

利用海藻酸钠包埋法固定青霉(penicillium)产菊粉酶,研究了最佳固定化条件及固定化酶性质,为固定化菊粉酶应用于果糖工业生产提供理论依据。结果表明:海藻酸钠浓度为4%,氯化钙浓度为1%时,固定化酶活力最高且机械强度好;加酶量越少,固定化效率越高;固定化酶与游离酶的最适pH为4.5,但固定化酶在pH4到6.5范围内相对酶活要比游离酶酶活高;固定化酶与游离酶的最适温度均为55℃,在35℃到55℃范围内两者酶活变化不大,在55℃到75℃范围内固定化酶的温度适应性比游离酶的好;在重复利用方面,将固定化酶反复利用7次,酶活仍为原酶活的50.6%。由此说明,固定化酶成本低,利用率高,在工业生产方面具有利用价值。     

硅胶固定化胰蛋白酶的工艺及特性研究

以硅胶为载体,戊二醛为交联剂,进行了胰蛋白酶固定化的研究.以光度比色法测定蛋白酶活力为指标,优化了戊二醛浓度、pH和酶用量等固定化参数,研究了固定化酶的基本特性、最适作用温度和pH及其对酪蛋白的酶解.结果表明:经优化,制备功能化载体的戊二醛最适浓度为1%,固定化pH为8.0,酶与载体比例为50mg/g.固定化胰蛋白酶比活力为4.89×105U/g,最适作用温度和pH范围分别为60℃和6.0～10.0.50℃水解酪蛋白,水解60min,重复使用8次,回收酶活力约为90%.     

醋酸纤维素-聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的研究

以醋酸纤维素(CA)和聚四氟乙烯(PTFE)为材料制备醋酸纤维素-聚四氟乙烯复合膜,采用吸附-交联相结合的固定化方法,用该复合膜固定化脂肪酶。研究温度、吸附时间、酶液质量浓度、交联时间和交联剂体积分数对脂肪酶固定化效率和催化效果的影响,并对固定化酶膜的酶学性质进行研究。得到最佳的固定化条件为：温度25℃、吸附时间2h、酶液质量浓度0.02g/mL、交联时间3h、交联剂(戊二醛)体积分数0.2%,固定化酶最大酶活力为17.2U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为：最适温度35℃,比游离酶降低了5℃;最适pH8.5,与游离酶相比pH值向碱性偏移1.0;经10次(10h /次)重复使用后,固定化酶相对酶活力为55.5%。SEM结果显示CA-PTFE复合膜能较好的固定化脂肪酶。     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究。固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×105,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%。固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08mmol/L。     

氨基化Fe3O4-SiO2固定化磷脂酶A1

以磁性Fe3O4-SiO2纳米颗粒为载体,研究固定化条件对磷脂酶活力的影响,通过响应面试验得到最优固定化条件为：固定化pH 6.7、固定化温度30 ℃、固定化时间7.9 h、戊二醛质量分数8.3%、加酶量8.2 mL/50 mg,在此条件下酶活力回收率能达到63.6%,蛋白固载率68%。并对制备的固定化磷脂酶的化学组分、形态结构和粒径进行分析,结果表明磷脂酶固定化效果较好,粒径均一,载体平均粒径为200 nm左右。固定化酶热稳定性、pH值稳定性和贮藏稳定性增强,最适反应温度为50 ℃,最适pH 6.0,重复操作10 次后保留60%以上的初始酶活力。     

对苯醌活化法固定化脂肪酶的研究

研究了对苯醌活化法在纤维素滤纸膜载体上固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当对苯醌浓度为０．０１ｇ／ｍｌ,活化６０ｍｉｎ,与浓度为０．００５ｇ／ｍｌ的酶的ｐＨ８．０的磷酸盐缓冲溶液于４℃交联２４ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．４４Ｕ／ｃｍ＾２。固定化酶最适温度３５℃,最适ｐＨ９．０。     

醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化磷脂酶A1的研究

以醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜为载体对磷脂酶进行吸附固定,以酶活力为指标,进行单因素实验,并采用响应面的方法进行分析,确定最佳的固定化条件为:酶液浓度0.06g/mL,吸附时间3h,温度60℃,搅拌速度200r/min,得到固定后的酶活力为4.0U/cm2。由SEM结果可知,CA/PTFE复合膜可较好的固定磷脂酶。     

菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠固定化菠萝蛋白酶的制备及稳定性研究

本实验以菠萝皮渣羧甲基纤维素、海藻酸钠为原料,制备了菠萝皮渣羧甲基纤维素/海藻酸钠复合水凝胶珠,用于固定化菠萝蛋白酶。采用单因素法分析菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比、氯化钙的浓度、菠萝蛋白酶浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶活性的影响。结果表明,固定化酶的优化制备工艺为:菠萝皮渣羧甲基纤维素与海藻酸钠的质量比为2:3,氯化钙的浓度为1.0%,菠萝蛋白酶浓度为2.0 mg/mL,戊二醛体积分数为1.0%,交联时间为60 min。制备的固定化酶比游离酶具有更好的热稳定性,在80℃环境下放置2.0 h后,固定化酶的相对酶活性为35.1%,而游离菠萝蛋白酶在此条件下几乎失活;在pH为11条件下放置24 h后,游离酶的相对酶活性为43.2%,而固定化酶相对酶活性为85.1%,说明固定化酶比游离酶更耐受碱性环境。另外,固定化酶重复使用7次后,相对酶活性为60.5%,说明制备的固定化酶具有较好的重复使用性能。     

棉织物上SESA活化法固定化脂肪酶工艺的研究

研究了对-β-硫酸酯乙砜基苯胺活化法在棉织物上固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化酶的最适作用温度和pH及间歇操作稳定性。最佳固定化条件为醚化pH为10.0,偶联pH为7.0,脂肪酶的浓度为6mg/ml,偶联时间为12h,所得固定化脂肪酶的最大活力为35U/g(棉)·min。固定化酶的最适作用温度为35℃,最适pH为8.0,半衰期为6d。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

Alcaligenes sp.碱性脂肪酶产生条件及酶学性质的研究

对Alcaligenessp .产碱性脂肪酶的工艺条件进行了研究。结果表明 ,适宜产酶培养基为 :3 %黄豆粉 ,1%果糖 ,0 .2 %K3 PO4,1%NaNO3 ,0 .6%柠檬酸钠 ,0 .0 3 %FeSO4,0 .5 %聚乙烯十八烷基醚 ;最佳培养条件为 2 5℃ ,初始pH9.0。脂肪酶活力可高达 12 0IU/mL。该酶在5 5℃以下 ,pH6.0～ 10 .5范围内稳定 ;酶反应适宜温度为 40℃ ,适宜pH9.0。该酶制剂在洗涤和制革工业中有良好的应用前景。     

鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备及影响因素

以鸡腿肉为原料,提取并酶解肌原纤维蛋白得到鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽,采用单因素试验和正交试验研究鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备条件及温度、pH值、金属离子、模拟胃肠液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响。结果表明：鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的最优酶解条件为：在鸡肉肌原纤维蛋白质量浓度为9 g/100 mL的溶液中,加入500 U/g胰蛋白酶,40 ℃酶解3 h,所得脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率高达67.35%,对α-淀粉酶的抑制率为23.0%;温度、pH值和金属离子对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的活性有显著影响（P＜0.05）,温度为75 ℃、pH值为4、无金属离子存在时,鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率较高;模拟胃液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响不显著（P＞0.05）,模拟肠液能显著降低脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率（P＜0.05）,但已经达到预期效果。     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。