卵白蛋白多肽的酶解制备及抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除率和水解度为指标,采用碱性蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化活性肽,考察底物质量分数、酶解时间、加酶量、温度等因素对制备的影响。正交实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物质量分数4%、酶解时间6h、加酶量5500U/g,温度65℃,此条件下DPPH自由基清除率达到96.92%、水解度为57.14%。酶解时间对DPPH自由基清除率的影响最大,而底物质量分数对水解度的影响最大。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的条件优化

本研究以花椒籽蛋白质抗氧化肽水解度(DH)和DPPH自由基清除率为指标,对酶解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的水解用酶及其酶用量、底物浓度、酶解温度、时间等酶解条件进行研究,以期优化得到酶解法制备花椒籽抗氧化肽的最优条件。结果表明Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽效果最好,通过响应面分析法优化出该酶最佳酶解花椒籽制备抗氧化肽的条件为:底物浓度5%,温度55℃,pH 8.5,加酶量4%;该方法可用于花椒籽蛋白制备抗氧化肽,在此条件下花椒籽水解液DPPH自由基清除率可达到61.00%,水解度为12.00%。     

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。     

南瓜籽抗氧化肽的制备及分离纯化

以脱脂南瓜籽蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽,并进行分离纯化。通过单因素试验,筛选最佳蛋白酶并考察了酶解p H、酶解温度、底物浓度、加酶量及酶解时间对水解度及DPPH自由基清除率的影响,在此基础上进行响应面试验优化酶解条件。然后采用大孔吸附树脂对南瓜籽抗氧化肽进行脱盐及分离纯化。结果表明:南瓜籽抗氧化肽的最佳酶解条件为选用碱性蛋白酶、酶解p H10.1、酶解温度52℃、底物浓度5.7%、加酶量2%、酶解时间120 min;在此条件下,20 mg/m L的南瓜籽抗氧化肽对DPPH自由基清除率为85.36%;75%乙醇溶液洗脱组分PD-3对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率及总还原力最高,洗脱组分的抗氧化性能相比粗多肽大幅提高;PD-3组分肽含量79.63%,PD-3组分77.56%相对分子质量分布在2 000以下。     

响应面法优化酶解海产小杂鱼及酶解液抗氧化性

利用响应面法优化海产小杂鱼蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化性研究。选用木瓜蛋白酶作为海产小杂鱼的酶解用酶,在单因素试验基础上,研究底物浓度、酶用量、酶解时间对酶解液的DPPH自由基清除率、肽回收率的影响。结果表明:以DPPH自由基清除率为响应值,得到的最佳酶解条件,为底物浓度4%,酶用量7%,酶解时间2.4 h,此时DPPH自由基清除率为60.82%;以肽回收率为响应值得到的最佳酶解条件,为底物浓度3%,酶用量7.20%,酶解时间2.6 h,此时肽回收率为55.31%。     

大鲵肽酱香酒酶解工艺优化及抗氧化活性研究

为研发一种具有抗氧化活性的大鲵肽酱香酒,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为主要指标,多肽含量为辅助指标,比较酸水解、酶水解和直接浸泡等不同预处理方式对大鲵肽酱香酒抗氧化活性的影响,并在单因素试验基础上采用响应面法对大鲵肽酱香酒酶解条件优化。结果表明,酶水解法优于酸水解法和直接泡制,其最佳酶解工艺为木瓜蛋白酶添加量6 126 U/g、酶解时间4 h、酶解温度55 ℃、酶解pH 4.5。在此优化条件下,大鲵肽酱香酒多肽含量为（14.20±0.11） mg/mL,对DPPH自由基的清除率为（77.98±0.99）%,羟自由基清除率为（70.66±0.70）%,还原能力（吸光度值A700 nm）为0.651,表明大鲵肽酱香酒具有一定抗氧化性。     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

响应曲面法优化鸭肫酶解制备抗氧化肽工艺

在单因素实验基础上应用响应面法对鸭肫抗氧化肽制备工艺进行优化。在前期筛选酶解鸭肫的最佳蛋白实验中得到木瓜蛋白酶为酶解鸭肫蛋白的最佳作用酶,优化的鸭肫抗氧化肽最佳工艺条件为:酶解时间4.0 h、加酶量0.5%、酶解温度55℃、料液比1∶3 g/m L。在此条件下,酶解鸭肫蛋白的水解度可达28.30%,DPPH·清除率为75.10%。结果表明该鸭肫抗氧化肽工艺制备可行,鸭肫蛋白水解度与DPPH自由基清除能力之间不存在相关性。     

小米多肽的制备及其抗氧化功能研究

采用碱性蛋白酶Alcalase水解小米蛋白,以二苯代苦味肼基(DPPH)自由基清除率为指标,通过单因素试验和正交试验确定小米多肽最佳制备条件,用硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验、脱氧核糖法检测其对超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)的清除能力,分光光度法测定小鼠红细胞溶血和肝线粒体MDA生成量。结果表明：碱性蛋白酶Alcalase制备小米多肽的最佳酶解条件为pH8.5、[E]/[S]5%、温度40℃、时间3.5h、对DPPH自由基、O2·和·OH的清除率分别为68.93%、40.06%和48.63%,并具有明显抑制氧化溶血现象和·OH诱导线粒体氧化损伤的功能,表明小米多肽具有较强的抗氧化功能。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

黑蚂蚁蛋白的酶解优化及抗氧化肽的超滤膜分离

本文研究了酶量、温度、pH和时间四个因素对黑蚂蚁蛋白的碱性酶法水解的影响。通过响应面设计,以各个抗氧化活性为指标,优化了超氧自由基清除率,DPPH自由基清除率,羟基自由基清除率,还原力和亚油酸自氧化抑制作用最强的酶解工艺条件。验证实验证实方程的准确率达95%以上。采用超滤膜及离子交换色谱对酶解产物进行了分离,发现5-10 kDa和1-3 kDa组分的抗氧化能力最强,碱性肽对超氧自由基清除能力、羟基自由基清除能力、亚油酸自氧化抑制作用贡献较大,酸性肽对DPPH自由基清除能力及还原力的贡献较大。     

鳙鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

采用优化酶法从鳙鱼肉蛋白中制备具有清除Fenton体系产生的羟自由基(·OH)活性的抗氧化肽.应用响应面分析法以酶解液对Fenton体系产生的羟自由基(·OH)的清除率为指标优化最佳酶解工艺;酶解液相对分子质量分布采用凝胶层析法测定.复合蛋白酶是水解鳙鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适合酶,最佳酶解条件为:温度40℃、酶解时间30 min、PH=7.0、酶加量为600 U/g底物、底物:水=1:2;活性肤相对分子质量范围为519～1088.响应面分析法是优化酶解工艺可行的方法;具有清除羟自由基活性的肽是一些寡肽.     

裙带菜孢子叶仿生酶解工艺优化及酶解肽的抗氧化活性分析

以裙带菜孢子叶为原料,采用仿生酶解工艺制备生物活性肽。以多肽得率和水解度为主要指标,在单因素实验基础上采用响应面分析法优化酶解工艺条件,并评价了酶解肽对三种自由基（DPPH、ABTS、OH）的清除能力。结果表明:裙带菜仿生酶解工艺的最优条件为超声功率720 W、超声破壁时间40 min、料液比1:104 g/mL、胃蛋白酶加酶量为6.1%、酶解时间2.5 h、胰蛋白酶加酶量为5%、酶解时间3 h。在此条件下进行酶解,多肽得率为21.17%,水解度为43.07%。酶解肽对DPPH、ABTS、OH自由基具有较好的清除效果,其IC₅₀值分别为5.71、0.82、1.35 mg/mL。优化的裙带菜孢子叶仿生酶解工艺合理可行,酶解肽具有较好的自由基清除能力,说明其具有良好的抗氧化活性,可作为功能性食品开发的配料。     

苜蓿多肽制备工艺优化及其抗氧化活性

以苜蓿(Medicago sativa)为原料,对碱性蛋白酶添加量、酶解时间、酶解温度、酶解pH四个因素进行单因素实验,通过响应面法对苜蓿多肽的酶解工艺进行优化。结果表明,最佳酶解工艺条件为:加酶量3000 U/g,酶解pH8.79,酶解温度49.9 ℃,酶解时间4.9 h,得到多肽含量为4.94 mg·mL-1。在该条件下,1 mg·mL-1样品对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力较强,分别为74.61%和72.14%,对DPPH自由基清除能力较弱,为61.53%,说明苜蓿多肽具有良好的抗氧化活性,为苜蓿进一步开发利用提供理论依据。     

复合酶制备鱼蒸煮液水解肽及其抗氧化活性研究

目的:研究鳀鱼蒸煮液的最佳酶解工艺条件,并分析所制备水解肽的分子量分布和抗氧化特性。方法:以三氯乙酸氮溶解指数(Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)为酶解效率的评价指标,在单因素实验基础上,运用中心组合设计法优化水解肽的制备工艺,并对酶解产物的分子量分布及抗氧化活性进行分析。结果:鳀鱼蒸煮液的最佳酶解条件为酶解时间45 min、酶解温度54.5 ℃、酶解pH8.2、碱性蛋白酶与中性蛋白酶比例1:1,在此条件下TCA-NSI可达76.51%。所制备的水解肽中分子量低于1500 Da的多肽含量可达81.941%。水解肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC₅₀分别为2.45、1.37和3.45 mg/mL,表明其具有较强的抗氧化活性。结论:采用复合酶法可高效酶解鳀鱼蒸煮液,并获得具有较强抗氧化活性的水解肽,可为鳀鱼蒸煮液高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

响应面法优化菊芋渣酶解制备抗氧化肽工艺

以菊芋渣蛋白为原料,在单因素试验基础上,采用Plackett-Burman设计选出最显著的因素,即底物质量浓度、酶解时间、pH值,再用响应面分析法对其进行考察,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,优化菊芋渣抗氧化肽酶解工艺。结果表明,最佳酶解条件为加酶量8 000 U/g、酶解温度50 ℃、pH 5.0、酶解时间3.5 h、底物质量浓度0.16 g/mL,在此条件下DPPH自由基清除率实测平均值达88.10%,与预测值88.08%相近。     

Effect of defatting and enzyme type on antioxidative activity of shrimp processing byproducts hydrolysate

Shrimp processing byproducts (SPB) was digested by 6 proteases (trypsin, pepsin, neutrase, Protamex, Flavourzyme, and Alcalase) to produce antioxidative peptides. Both degree of hydrolysis (DH) and DPPH radical scavenging activity (DSA) of the Alcalase hydrolysate were the highest of all. The effect of defatting on DH and DSA of the Alcalase hydrolysate was significant. The DH decreased while the DSA increased after defatting of the byproducts. The antioxidative activity of Alcalase hydrolysate was also investigated using several in vitro assays, including DPPH, ABTS radical scavenging assays (ASA), reducing power assay, and chelating activity. The antioxidative activity of the hydrolysate was obviously concentration dependent. The SPB Alcalase hydrolysate exhibited notable DSA and ASA with the IC50 values of 500 and 7.4 μg/mL, respectively. And the hydrolysate showed 38.9% chelating activity at 120 μg/mL level. The SPB Alcalase hydrolysate was a potential source of natural antioxidants.