水飞蓟粕蛋白的酶解及其酶解物抗氧化活性研究

以水飞蓟粕为原料,研究其蛋白酶解工艺及酶解物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶用于制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽具有明显的优势。正交试验确定了制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽的最佳酶解条件为:底物质量分数2%,加酶量14 000 U/g,pH7.0,温度55℃,酶解时间120 min,该条件下制备的水飞蓟粕蛋白酶解物对羟自由基的清除率为88.57%。抗氧化试验显示,水飞蓟粕蛋白酶解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,IC50分别为0.402 g/L和6.659 g/L,水飞蓟粕蛋白酶解物同样也具有较强的还原能力。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

响应面优化鱼鳔胶原肽制备工艺及其抗氧化活性研究

鱼鳔富含胶原蛋白,营养价值高,但目前对鱼鳔的加工利用不足,造成资源浪费、环境污染。以草鱼鱼鳔为原料,以DPPH自由基清除能力为评价指标,通过单因素和响应面实验优化酶解鱼鳔胶原蛋白制备抗氧化活性肽的最佳工艺,并研究其体外抗氧化活性。结果表明:抗氧化活性肽的最佳制备工艺为,以风味蛋白酶为酶制剂,酶解时间79.34 min,料液比为3.09∶100(g∶m L),酶添加量为6 343.43 U/g,在此条件下制备的鱼鳔胶原肽的DPPH自由基清除能力达79.98%。鱼鳔胶原肽清除DPPH自由基、羟自由基的IC50分别为8.05 mg/m L和3.54 mg/m L,并且具有较强的还原力。因此,鱼鳔胶原肽具有较强的抗氧化活性,草鱼鱼鳔是制备抗氧化活性肽的良好原料。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

大米蛋白的木瓜酶酶解及其水解物的抗氧化活性

以大米蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性.选取底物浓度、加酶量、酶解pH、酶解温度为考察因素,进行了酶解工艺的单因素及正交试验.试验结果表明,底物浓度([S])10%,加酶量([E] /[S])5%,酶解pH 6.0,酶解温度60℃,酶解时间90 min为最佳酶解参数,在此条件下大米蛋白水解物的固形物含量为25.6mg/mL,对DPPH自由基清除率为54.5%.抗氧化试验显示,大米蛋白水解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,其IC50分别为1.738和0.238mg/mL.大米蛋白水解物同样也具有较强的还原能力.由此得出,大米蛋白水解物是一种天然的抗氧化肽.     

响应面法优化麦胚清蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺

选择合适的蛋白质水解酶是制备高活性抗氧化肽的关键。以小麦胚芽清蛋白为原料,酶解产物的DPPH自由基清除率以及ORAC值为指标,从4种蛋白酶(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)中,筛选得出中性蛋白酶为最佳用酶。然后通过响应面法对中性蛋白酶酶解工艺条件进行了优化。结果表明,中性蛋白酶酶解麦胚清蛋白的最佳酶解参数为:底物浓度2.4%、加酶量5 900 U/g、酶解p H 7.04、酶解温度55℃、酶解时间4 h。此酶解条件下,其1 mg/m L酶解产物的DPPH自由基清除率为65.93%,100μg/m L酶解产物的ORAC值为1 291.32μmol Trolox当量/g多肽。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

麦糟蛋白肽发酵制备工艺优化及其生理活性评价

以麦糟为原料，采用米曲霉固态发酵制备麦糟蛋白肽，通过单因素试验和正交试验优化蛋白肽制备工艺，并分析其体外抗氧化活性和降血糖活性。结果表明：麦糟蛋白肽最佳制备工艺为发酵时间120 h、发酵温度28℃、接种量1.2 mL、pH 6.6,在此条件下蛋白肽转化率为87.58%;抗氧化活性试验显示，麦糟蛋白肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基有不同程度的清除作用，其中，对DPPH自由基清除能力最强；降血糖活性试验显示，麦糟蛋白肽对α-葡萄糖苷酶有明显抑制作用，在试验蛋白肽质量浓度范围内，最大抑制率达86.96%。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

草鱼源抗氧化肽的响应面法优化制备及活性评价

用5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Neutrase 1.5MG、菠萝蛋白酶、PTN6.0及Alcalase 2.4L)分别酶解草鱼肉糜制备抗氧化肽,发现酶解产物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除力最强的分别是木瓜蛋白酶(IC50=2.66±0.41mg/mL)、Alcalase 2.4L(IC50=1.81±0.44mg/mL)及PTN6.0(IC50=8.57±0.32mg/mL)的酶解产物.将此三种酶进行复配,进一步用响应面分析法优化得到抗氧化肽的最佳制备条件为:酶浓度[E/S]=0.68 × 103U/g蛋白,酶解时间为3.83h,酶解温度为51.41℃,模型预测该条件下羟自由基清除力的IC50值为146.22μg/mL,而实际测定值为155.89±11.21μg/mL,与预测值吻合,且在最优条件下所得的酶解物具有较强的小鼠离体肝脂质过氧化抑制力及还原力.     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。     

响应面法优化鹿骨多肽酶解工艺及其体外抗氧化活性

目的:筛选鹿骨蛋白最适提取温度和最佳酶解工艺并检测其抗氧化活性。方法:根据鹿骨蛋白的蛋白浓度筛选出最适提取温度,根据水解度（DH）通过单因素及响应面实验设计筛选鹿骨多肽的最佳酶解工艺,并通过测定鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基的清除能力来评价鹿骨多肽的抗氧化活性。结果:最佳提取温度为95 ℃,通过响应面法优化及实际验证确定了胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解工艺分别为胃蛋白酶酶用量6200 U/g,温度37.3 ℃,pH2.0,时间3.2 h,此时的水解度为11.23%;胰蛋白酶酶用量6300 U/g,温度37.2 ℃,pH8.1,时间4.0 h,此时的水解度为23.09%。鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有清除能力,其IC₅₀值分别为:3.72、2.24 mg/mL。结论:本实验得到了鹿骨蛋白最佳提取温度并确定鹿骨多肽最佳酶解工艺,且鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有良好的清除能力,说明鹿骨多肽具有良好的抗氧化活性。     

加酶超声提取核桃抗氧化肽工艺优化

实验利用脱脂核桃粕为原料,在加酶提取核桃抗氧化肽工艺基础上,采用超声辅助技术,研究了超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽的最佳提取条件。以对DPPH自由基清除率为考察指标,在单因素实验基础上进行正交实验优化超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽工艺。结果表明:加酶超声提取核桃抗氧化肽的最优工艺为:酶解时采用Alcalase2.4L碱性蛋白酶,料液比(核桃粕:缓冲液)1:20,[E]/[S]为13:500、pH9、酶解温度49℃的条件下酶解2h;超声功率150W,超声时间20min,超声温度50℃,在此条件下制备的核桃抗氧化肽对对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除率达65.11%,抗氧化肽产率62.37%。     

响应面法优化葛根蛋白酶解工艺及其体外抗氧化特性分析

目的:优化葛根蛋白酶解工艺并研究其抗氧化特性。方法:以DPPH自由基清除能力、水解度（DH）为评价指标,结合SDS-PAGE电泳结果,筛选最佳水解蛋白酶;在单因素实验基础上,利用Box-Behnken响应面法优化葛根蛋白酶解工艺,并对最佳葛根蛋白酶解物进行抗氧化特性研究。结果:葛根蛋白酶解最佳工艺条件为:酶解温度55 ℃、pH9、酶底比2%,该条件下制备的葛根蛋白酶解物清除DPPH自由基、ABTS+自由基、OH自由基的IC₅₀值分别为0.15、0.38、1.41 mg/mL,还原能力为0.553。结论:该条件下制备的葛根蛋白酶解物具有较好的抗氧化特性。     

黑米与欧洲越橘花色苷抗氧化活性比较研究

为探究黑米与欧洲越橘花色苷抗氧化活性的差异,以抗坏血酸为阳性对照,通过比较其总还原力及清除超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢、DPPH·、ABTS+·的能力,对其体外抗氧化作用进行了比较研究。结果表明,在测试浓度范围内,黑米花色苷与欧洲越橘花色苷总还原能力、清除过氧化氢、DPPH·、ABTS+·能力均高于阳性对照,且黑米花色苷具有更好地清除DPPH·、ABTS+·能力(IC₅₀分别为0.88、0.75 μg/mL);两种花色苷清除羟自由基、超氧阴离子自由基能力均低于阳性对照,但黑米花色苷清除超氧阴离子能力是欧洲越橘的3.63倍,清除羟自由基能力与欧洲越橘花色苷相当。研究表明,黑米花色苷具有更好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。     

麦胚蛋白的双酶分步水解及其产物的抗氧化活性研究

前期实验确定中性蛋白酶为水解麦胚蛋白制备抗氧化肽的最适单酶,在此基础上进行了双酶组合水解麦胚蛋白的酶解工艺及酶解产物的抗氧化活性的探讨性研究。结果表明,双酶最佳组合为中性蛋白酶和碱性蛋白酶。经中性蛋白酶酶解270min的酶解液加入碱性蛋白酶后,水解至300min和420min时酶解产物还原能力和肽含量有不同程度增加,但DPPH·清除率始终是呈下降趋势。因此双酶水解比单酶水解麦胚蛋白没有明显优势。